BHA和β-ME对表观修饰后的NIH/3T3细胞向神经方向诱导的实验研究

目的通过联合应用表观修饰药物5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)和曲古抑菌素A(TrichstatinA,TSA)对NIH/3T3细胞进行重编程,应用β-羟基酸(betahydroxyacid,BHA)和β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)进一步诱导,以期表达与神经细胞密切相关的基因。方法应用流式细胞技术检测实验组(4.5μM5-aza-dC+0.35μMTSA+1mMβ-ME+200μMBHA作用后的NIH/3T3细胞)和对照组中NIH/3T3细胞的DNA甲基化水平。应用RT-PCR的方法检测Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4的表达,免疫细胞化学染色检测巢蛋白(nestin)和神经丝轻链(neurofilamentlightchain,NF-L)的表达情况。结果实验组NIH/3T3细胞DNA甲基化水平较对照组明显降低,细胞均呈现出Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4基因的阳性表达。经过BHA和β-ME诱导后,NIH/3T3细胞呈巢蛋白和神经丝轻链阳性。结论表观修饰后的细胞经诱导后可以呈现nestin和NF-L的阳性表达。     

衰老时大鼠大脑皮质枕叶一氧化氮合酶阳性神经元的变化

本实验采用免疫组化 SABC法结合计算机图像分析技术 ,研究了衰老时大鼠大脑皮质枕叶一氧化氮合酶阳性神经元的分布及形态特征变化。结果发现 :一氧化氮合酶阳性细胞在枕叶皮质 ～ 层均有分布 ,属于非锥体形神经元 ;比较三个年龄组阳性细胞的数量和平均截面积的变化 ,发现老年组与幼年组及中年组相比 ,两项指标都显著减小 (P<0 .0 1)。而幼年组和中年组相比两项指标没有明显差别 (P>0 .0 5 )。提示 ,一氧化氮作为神经递质 ,可能与大脑皮质枕叶功能的调节有关 ;随着衰老 ,其阳性神经元的变化可能影响其发挥正常的生理功能     

密度梯度离心法结合贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的:建立一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞的方法,观察成年大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性。方法:实验于2003-03/2004-05于哈尔滨医科大学组胚教研室完成。①用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化成年大鼠骨髓间充质干细胞。②采用倒置显微镜、透射电镜观察,免疫细胞化学法鉴定骨髓间充质干细胞膜抗原和细胞基质蛋白属性。③体外加成骨、成软骨诱导剂,14d分别做碱性磷酸酶组织化学、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,观察骨髓间充质干细胞的成骨分化及成软骨分化结果。结果:①成年大鼠骨髓间充质干细胞呈均一的成纤维细胞样,具有一般干细胞的超微结构特点。②广泛表达Vimentin,CD29,CD44,不表达CD14,CD34。③加入成骨诱导剂14d后,骨髓间充质干细胞呈多层重叠生长,现碱性磷酸酶强阳性,阳性率为90.5%。④经成软骨诱导后,Ⅱ型胶原免疫组化染色,诱导14d的骨髓间充质干细胞呈现广泛的棕褐色染色,在细胞密集处细胞周围可见黄褐色染色。结论:密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化成年大鼠骨髓间充质干细胞,用此种方法培养的细胞具有骨髓间充质干细胞的一般生物学特性。     

手术治疗股骨头骨折二例

1992～1994年我科收治2例腕关节后脱位并股骨头骨折患者，报告如下。     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动及粘附中的作用

目的：评价大鼠胎脑神经细胞(FBC)与几丁质(Chitin)多孔体、胶原蛋白(Collagen Protein)海绵及明胶(Glutin)海绵的细胞相容性；研究几丁质和胶原蛋白与大鼠FBC复合体(C-FBC，CP-FBC)脑内移植对脑损伤的修复作用。为中枢神经系统(CNS)组织工程材料的选择提供实验依据。     

对癌灵1号注射液抑制小鼠肝癌细胞分裂作用的研究

目前癌症已成为常见病和多发病,寻找有效的抗癌药物是人类的共同心愿。本校附属第一医院临床认为癌灵1号注射液有一定的抗癌效果,本文是对癌灵1号注射液进行初步的基础理论研究,目的是了解癌灵1号注射液作用机制和用量的问题。     

肾缺血再灌注损伤和丹参的保护作用的实验研究

用组化和电镜方法观察大鼠肾脏缺血及缺血再灌注后碱性磷酸酶（ＡｌｋａｌｉｎｅＰｈｏｓｐｈａｔａｓｅＡＫＰ）活性和超微结构的变化，同时观察丹参对这种异常改变的保护作用。结果发现，再灌注后ＡＫＰ活性明显降低，超微结构损害最重，丹参对这种异常改变有较好的保护作用。     

用瑞氏染色制作血涂片的关键环节

用瑞氏染色染血涂片,经常发生的二种偏差是：①过染：红细胞内的血红蛋白被染成深紫红色;②异染：红细胞内的血红蛋白被染成偏紫蓝色。为了消除过染和异染现象,我们对瑞氏染色的关键环节进行了长时间的探索。材料和方法取人的指端末梢血液制作血液涂片,共计制作２００...     

体外分离培养的人尿道黏膜上皮细胞的生物学特性

目的 探讨体外分离培养的人尿道黏膜上皮细胞的生物学特性,为构建组织工程尿道提供种子细胞.方法 取尿道下裂患者尿道黏膜,经消化离心后,接种于培养基中连续培养,观察细胞形态变化及生长、增殖过程,并绘制生长曲线;对细胞进行常规冻存和复苏;应用免疫细胞化学技术进行角蛋白染色的鉴定.结论 体外培养的细胞呈铺路石样外观,可传至8代;可进行常规冻存和复苏;角蛋白免疫细胞化学染色呈阳性.结论人尿道黏膜上皮细胞的体外连续培养及扩增技术被建立,本实验培养的细胞可用于构建组织工程尿道.     

血必净对急性胰腺炎患者血清炎症因子及氧自由基的影响

目的探讨血必净治疗急性胰腺炎的疗效及其对患者血清炎症因子和氧自由基的影响。方法将118例急性胰腺炎患者随机分为血必净治疗组及对照组,治疗组在对照组治疗基础上加用血必净。记录患者腹痛、腹胀缓解时间及住院天数,检测两组患者入院第l天、第7天血清C反应蛋白（CRP）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平,并进行比较。结果血必净治疗组患者腹痛、腹胀缓解时间及住院天数均显著低于对照组（P〈0．01）,入院治疗第7天血清CRP、IL-6、TNF-α、MDA水平低于对照组（P〈0．05）,SOD水平显著高于对照组（P〈0．01）。结论血必净可有效降低急性胰腺炎患者血清炎症因子水平,清除氧自由基,改善临床症状,缩短住院时间。