CD137及其配体与肿瘤关系研究进展

CD137是肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族成员之一,表达在活化T细胞、B细胞、NK1.1及活化的单核细胞表面上.活化细胞表面CD137与其配体结合后,介导的共刺激信号,是CD28/B7之外的另一重要的共刺激信号.CD137介导的协同刺激信号,可依赖或不依赖CD28途径发挥共刺激作用,调节T细胞、B细胞、单核细胞、NK1.1的活化、分化、增殖,提高免疫细胞的作用,阻止活化诱导的细胞的凋亡,在一定条件下具有抗肿瘤的作用和加速移植排斥反应.因此,CD137与其配体既参与机体免疫调节,又介导了免疫病理.CD137与其配体在不同的病人体内表达水平不一致,不仅影响机体的抗肿瘤作用,而且对肿瘤的发生、发展和预后具有重要意义.     

一种优化的PCR方法--降落PCR扩增目的基因

目的尝试用一种新的PCR方法--降落PCR扩增目的基因.方法在构建人CD137-hIgG1Fc-pCDNA3融合蛋白真核表达载体以及在检测HBV多聚酶YMDD变异的过程中运用降落PCR扩增目的基因.结果扩增出的特异性条带与目的基因大小一致.结论降落PCR省却了常规PCR中摸索最适退火温度的过程,对一些Tm值相近的PCR反应可应用一套温度程序扩增,是一种行之有效的PCR方法.     

caspase-8靶向小发夹RNA抑制肝细胞凋亡的研究

目的研究针对caspase-8 mRNA的小发夹RNA(shRNA)真核表达载体对肝Hepa1-6细胞凋亡的干扰作用。方法TNF-α诱导Hepa1-6细胞凋亡,脂质体法将shRNA表达载体转染入Hepa1-6细胞中,24h后应用荧光实时定量PCR和Western blot法分别在mRNA和蛋白水平测定其caspase-8表达差异,流式细胞仪观察细胞凋亡的变化。结果TNF-α作用后Hepa1-6细胞caspase-8 mRNA由(0.050±0.006)升高至(0.286±0.063)(P<0.01),而shRNA表达载体Pgenesil-casp8使其下降至(0.098±0.037)(P<0.01)。转染Pgenesil-casp8重组质粒后caspase-8蛋白表达与mRNA荧光实时定量PCR结果吻合。TNF-α诱导Hepa1-6细胞凋亡率由(4.70±0.89)%升高至(17.40±2.21)%(P<0.01),Pgenesil-casp8作用后下降至(1.20±0.32)%(P<0.05)。结论针对caspase-8 mRNA的shRNA真核表达载体可有效抑制肝细胞Hepa1-6凋亡。     

食管癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞在食管癌局部及全身免疫中的作用.方法:流式细胞仪检测97例食管癌患者外周血和20例肿瘤组织的CD4+CD25+调节性T细胞比例,比较不同病理类型、不同分期等食管癌患者外周血及肿瘤局部组织的CD4+CD25+调节性T细胞的分布变化.结果:食管癌患者肿瘤组织CD4+CD25+调节性T细胞比例为(18.97±2.38)%,高于患者外周血比例[(17.57±3.99)%],差异无统计学意义,t=1.511,P＞0.05;食管癌患者肿瘤组织及外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的比例,均高于同期健康对照组患者外周血的比例(9.35±1.41)%,差异有统计学意义,t值分别为12.111和8.332,P值均＜0.01.CD4+CD25+调节性T细胞水平与临床分期(F=9.384)、有无淋巴结转移(t=2.326)有关,P值均＜0.05.结论:食管癌患者全身及肿瘤局部均存在免疫异常,推测CD4+CD25+调节性T细胞可能参与了食管癌的发生与发展.     

sGVHD小鼠结肠IEL细胞CD137 和Th1细胞因子的表达

目的研究协同刺激分子CD137和Th1类细胞因子在小鼠同基因型移植物抗宿主疾病（sGVHD）中的作用。方法受体鼠用同基因型骨髓移植后,用环孢菌素A（CsA）诱导3周建立小鼠sGVHD模型;从小鼠结肠中分离上皮内淋巴细胞;用流式细胞术测定细胞亚群,RT-PCR方法检测CD137和Th1类细胞因子的表达,^3H掺入法测定T细胞增殖的抑制。结果sGVHD时,小鼠病变器官结肠上皮内淋巴细胞（IEL）中CD137及Th1类细胞因子（IL-12,IFN—γ,TNF-α）表达较正常,而移植对照组明显增高（P〈0．01）;IFN-γ的增高始于环胞霉素A诱导治疗后3周,而CDl37和IL-12、TNF-α表达增高仅在出现GVHD样症状时,Th2类细胞因子（IL-4、IL-10）在GVHD的诱导和发生中均无明显改变。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在食管癌中的表达及意义

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在食管癌患者免疫失效机制中的作用。方法应用流式细胞仪检测97例食管癌患者外周血和肿瘤组织的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例,比较不同病理类型、不同分期、有无淋巴结转移患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分布变化。结果食管癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占CD4^＋T淋巴细胞的比例为（17．57±3．99）％,肿瘤组织CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例为（18．97±2．38）％,均高于健康对照组（P均〈0．01）。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞比例在不同临床分期、有无淋巴结转移患者间差异有统计学意义（P均〈0．01）。结论食管癌患者全身及肿瘤局部均存在免疫异常,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可能参与了食管癌的发生与发展。     

移植前血清细胞因子水平对重型再生障碍性贫血患者异基因造血干细胞移植疗效的影响研究

目的:探讨重型再生障碍性贫血(SAA)患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)前细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α水平对预后的影响。方法:本研究共纳入117例SAA接受allo-HSCT的患者,回顾性分析患者总体生存率(OS)、移植物抗宿主病(GVHD)发生率、细胞因子水平与OS及主要移植并发症的关系。结果:本研究纳入的SAA患者包含同胞HLA全相合allo-HSCT 78例(66.7%),非亲缘供者allo-HSCT 12例(10.2%),单倍体相合供者alloHSCT 27例(23.1%)。所有患者5年OS率为76.0%(95%CI:64.4%-87.5%)。a GVHD累积发生率为49.6%(95%CI:40.4%-58.8%);c GVHD累积发生率为31.6%(95%CI:23.1%-40.2%)。接受同胞HLA全相合allo-HSCT的患者,其5年OS率明显优于替代供者(82.3%±6.6%vs 61.3%±11.7%)(P0.05)。HLA匹配程度、供者年龄、移植后巨细胞病毒/EB病毒(CMV/EBV)血症是影响a GVHD发生的重要因素。移植前血清IL-6增高的患者,移植后血小板植入较快(14.6±1.8 vs 18.3±2.6 d)(P=0.05);血清TNF-α增高的患者,移植后CMV/EBV血症发生率较低(37.8%±11.1%vs 58.8%±16.8%)(P=0.029)。结论:HLA匹配同胞供者allo-HSCT是SAA患者有效治疗手段;供者选择仍然是影响预后的重要因素。移植前血清IL-6和TNF-α水平增高可能预示allo-HSCT后患者血小板植入加快,CM V/EBV血症发生率减低。     

胰岛素联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)治疗1型糖尿病的实验研究

[目的]探索胰岛素联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)促进胰岛修复,治疗1型糖尿病的可行性,为糖尿病的治疗提供新的方案。[方法]2005~2010年,通过给近交BALB C小鼠腹腔注射链脲菌素建立1型糖尿病小鼠模型,成模后将小鼠随机分成4组,即模型组/治疗对照组(皮下注射生理盐水)、胰岛素治疗组(皮下注射中效胰岛素)、G-CSF治疗组(皮下注射G-CSF)、胰岛素和G-CSF联合治疗组(同时给予胰岛素和G-CSF治疗)。隔天测定尿糖和体重,分别于治疗后第15、30、60 d测定血糖;治疗后第30、60 d取出小鼠胰腺,病理切片,做HE染色和免疫组织化学实验,观察胰岛病理变化。[结果]胰岛素治疗组、G-CSF治疗组、联合治疗组血糖降低与体重升高较模型组明显(P<0.05);联合治疗组较胰岛素、G-CSF单独治疗组血糖降低明显(P<0.05)。胰岛素和G-CSF单独治疗组小鼠胰岛细胞损伤没有明显改善;G-CSF与胰岛素联合治疗组胰岛的修复。[结论]胰岛素联合G-CSF治疗1型糖尿病BALB C小鼠,更有利于胰岛的修复和糖尿病的控制。