胸腺重建的研究进展

作为T 细胞发育的主要器官,胸腺在产生强大的适应性免疫应答及应对来自病原体和肿瘤的威胁时发挥主要作用。随着对胸腺作用的深入了解,人们逐渐意识到胸腺对急性和慢性损伤均很敏感。胸腺在许多有害因素的作用下会迅速衰退,同时也会随着年龄的增长而衰退。胸腺恢复和重建能使其功能恢复至一定水平。胸腺上皮祖细胞过继免疫、输注IL-2 及血管生长因子、调整c鄄Met 信号通路等均可促进胸腺恢复及T 细胞再生。     

氯普鲁卡因诱导体外人宫颈癌细胞抑癌基因CDH1、APC和P16启动子去甲基化及基因表达

 摘要：目的 观察氯普鲁卡因(CP)对人宫颈癌细胞HeLa和CaSki的抑癌基因CDH1、APC及P16启动子甲基化水平和基因表达的影响。方法 用不同终浓度的CP（0、1、1.5、2、3和4 mmol/L）处理癌细胞系HeLa和CaSki及正常人脐静脉内皮细胞HUVEC,MTT法检测细胞生长抑制率;用甲基化特异性PCR (MSP) 和RT-PCR检测1.5 mmol/L CP处理后各细胞CDH1、APC及P16启动子甲基化状态及基因表达水平。结果 1.5 mmol/L CP作用96 h后,HeLa和CaSki抑制率分别为 (66.17±5.82) % 和 (69.12±6.89) %,显著高于HUVEC的 (21.78±3.12) %, 1.5 mmol/L CP处理宫颈癌细胞96 h后,CDH1、APC及P16基因启动子均有不同程度去甲基化,3种基因mRNA均增强或者恢复了表达。结论 CP可以抑制人宫颈癌细胞HeLa和CaSki增殖,诱导HeLa和CaSki的CDH1、APC及P16基因启动子去甲基化,并可增加或者恢复相应基因的表达。     

阿司匹林对不稳定型心绞痛患者血浆中5种miRNA水平的影响

目的 探讨口服阿司匹林对不稳定心绞痛(UAP)患者血浆miR-21、miR-24、miR-126、miR-146、miR-223水平的影响.方法 以未服用过阿司匹林的15例冠状动脉病变阳性的UAP患者及10例冠状动脉病变阴性的UAP患者作为研究对象,予以阿司匹林肠溶片0.1g,每日1次口服,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miRNA浓度,比较服药前及服药1周后外周血浆中这5种miRNA的差异.同时选取50例UAP患者(包括冠状动脉病变阴性及阳性者),根据其近期是否服用阿司匹林情况分为阿司匹林组及对照组,比较不同组间血浆中5种miRNA水平.结果 仅冠状动脉病变阳性的UAP患者服用阿司匹林后血浆中的miR-223水平升高有统计学意义(P＜0.05),而其他几种miRNA及冠状动脉病变阴性者血浆中5种miRNA水平变化均无统计学意义(P＞0.05).结论 阿司匹林可升高冠状动脉病变阳性的UAP患者血浆中miR-223的水平但不影响冠状动脉病变阴性者血浆miR-223水平.     

肼苯哒嗪对宫颈癌细胞系APC基因去甲基化的转录调节作用

目的:观察宫颈癌细胞系HeLa、CaSki和SiHa中APC基因的表达与甲基化修饰之间的相关性,探讨肼苯哒嗪对APC基因去甲基化的转录调节作用及其对细胞生长和凋亡的影响。方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)法分析细胞中APC的甲基化状态;采用RT-PCR及FQ-PCR检测肼苯哒嗪对APC mRNA表达的影响;MTT法及流式细胞术观察肼苯哒嗪对细胞增殖及凋亡的影响;采用免疫组化SP法检测肼苯哒嗪对APC相关蛋白β-连环蛋白表达的影响。结果:APC基因在HeLa、CaSki细胞中有甲基化修饰;肼苯哒嗪能使其甲基化的APC基因重新表达;β-连环蛋白也可重新表达于细胞膜;肼苯哒嗪能抑制细胞生长,使细胞凋亡增多。结论:APC甲基化修饰是宫颈癌发生重要机制之一,肼苯哒嗪能使甲基化的APC去除甲基化修饰重新表达,且能抑制宫颈癌细胞生长。     

Wnt／β-catenin信号转导途径与宫颈癌

Wnt／β-catenin信号转导途径异常与宫颈癌的发生发展密切相关。该途径异常主要表现为B连环蛋白（β-catenin，β-cat）在胞质及胞核内异常积聚、β-cat编码基因（CTNNBl）突变、腺瘤性结肠息肉病（adenomatous polyposis coli，APC）基因及此途径其他组分基因的变化以及下游靶基因cyclinD1，survivin等的激活，而这些靶基因多与细胞周期和细胞凋亡及细胞增殖相关，从而影响细胞增殖和分化的正常调控，使细胞过度增殖，导致癌的发生。因此可以把Wnt／β-cat信号途径作为宫颈癌治疗的一个重要靶点，通过对该途径的干预调整靶基因表达．使其恢复正常．以达到抑制肿瘤生长、治疗肿瘤的目的，这将是宫颈癌信号途径治疗的有效方法。     

肼苯哒嗪对宫颈癌细胞系APC基因异常甲基化的影响

目的检测宫颈癌细胞系HeLa、CaSki和SiHa中结肠腺瘤性息肉病基因(APC)启动子区CpG岛甲基化状态;探索肼苯哒嗪(Hyd)能否作为去甲基化药物恢复APC表达。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测细胞系中APC启动子区CpG岛甲基化情况;Hyd处理后,RT-PCR检测APCmRNA表达。结果APC启动子区CpG岛在HeLa细胞中被甲基化,在CaSki细胞中半甲基化,在SiHa细胞中无甲基化;一定浓度Hyd处理HeLa、CaSki细胞后,检测到APCmRNA表达。结论HeLa、CaSki细胞系APC表达沉默与APC启动子区甲基化有关;Hyd能作为去甲基化药物诱导APC表达。     

刺五加提取物及其活性成分免疫调节作用的研究进展

免疫力下降及免疫失衡是临床多种疾病发生的根源,调节机体免疫力成为许多疾病的有效治疗方法。刺五加Acanthopanax senticosus属于五加科五加属传统药用植物,在临床上常用于病后恢复、改善睡眠和增强机体免疫力等。刺五加提取物一般分为水提取物和醇提取物,其活性成分主要有刺五加多糖、萜类、木脂素类、黄酮类和香豆素类等。刺五加提取物及其活性成分可在增强机体免疫力的同时发挥抗炎作用,体现在刺激细胞因子产生、增强巨噬细胞吞噬功能以及调节多种炎性细胞因子水平等方面。主要对刺五加提取物及其活性成分的免疫作用进行综述,为刺五加临床免疫应用提供一定理论基础。     

HLA-DR1二聚体的构建及其在昆虫细胞中的表达和纯化

目的 构建 HLA-DR1(由DRA和 DRB1*01 基因编码)杆状病毒表达载体,并使其在昆虫细胞内得到表达.方法 采用RT-PCR方法从721.221细胞中扩增DRα和DRβ的信号肽及胞外序列,运用重叠PCR将DRα和DRβ片段分别与Fos和Jun的亮氨酸拉链序列相连,成为DRα-Fos和DRβ-Jun,DRα和DRβ可凭借Fos和Jun的亮氨酸拉链结合形成DR1分子,再通过EcoR Ⅰ酶切位点将DRα-Fos和人IgG1的Fc段相连,形成DRα-Fos-Fc重组序列,2个同源的DR1分子可通过IgG1的Fc段的二硫键结合形成二聚体.分别将DRα-Fos-Fc及DRβ-Jun插入杆状病毒表达载体pFastBacTMDual的2个多克隆位点处,构建出重组载体pFast BacTMDual+[DR1/Fc].对构建的载体进行PCR及限制性内切酶酶切鉴定和测序.采用脂质体转染方法将表达载体转入昆虫细胞系Sf9中,通过双抗夹心ELISA及Western blot检测HLA-DR1的表达.结果 PCR及酶切鉴定和测序证实目的基因插入正确且序列与GenBank一致.ELISA和Western blot检测表明DR1杆状病毒感染的Sf9细胞培养上清HLA-DR1表达呈阳性,且表达的HLA-DR1分子具有正确的构象.结论 成功构建出杆状病毒表达载体pFastBacTMDual+[DR1/Fc],并在Sf9细胞中得到表达,为研究HLA-DR1限制性的T细胞应答奠定了基础.     

转录调节因子FOXN1异常表达引起相关疾病的研究进展

自发现FOXN1缺乏症以来,FOXN1在胸腺发育和皮肤生长中的作用愈来愈受重视。FOXN1是胸腺上皮和T细胞发育的主要调节因子,是维持胸腺发育、功能和稳态的基础。在皮肤中,FOXN1对角质形成细胞和毛囊细胞的分化起关键作用,但潜在的分子机制仍有待进一步阐明。