广西肝细胞癌组织及癌旁中乙型肝炎病毒X基因突变体的分析

目的了解广西肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)组织及癌旁中乙型肝炎病毒X基因(HBX)突变体的分布情况。方法收集2015-2016年广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科因HCC手术切除的HCC患者共117例,分别收集HCC组织及对应癌旁组织,巢式PCR扩增HBX基因片段并测序,用相应的生物信息学软件分析核苷酸及氨基酸序列。结果 (1)癌组织中,HBX羧基端序列缺失率和缺失长度,高于癌旁组织[(分别为22.4%和12.1%,X~2=4.868,P0.05);(60.19±83.48)和(19.79±4.98)bp,P0.05)];(2)癌旁组织中,插入突变仅存于血清甲胎蛋白(AFP)20 ng/ml的患者序列中;(3)癌组织中,第88、118、119、130、131、130+131、132、143位点突变率高于癌旁组织(P0.05);(4)K118T突变组HBV DNA水平,低于未突变组[分别为(4.50±0.96)和(4.98±1.07),P0.05];V88N/D、D119E/N突变组ALT水平,高于未突变组[分别为(41.59±21.72)和(64.81±63.42);(41.33±22.32)和(64.36±62.75),P均0.05];(5)差异性点突变均位于EnhII或BCP区域。结论广西HBX基因突变有多态性;HBX羧基端序列是否缺失、缺失长度及第88、118、119、130、131、130+131、132、143位点突变对广西HCC发生可能有影响。     

B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台的搭建及BALB/c小鼠感染模型的建立

【摘要】 目的 本研究利用基因工程技术全基因合成B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88的8个基因节段,并利用反向遗传技术从体外拯救B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88,同时建立BALB/c小鼠感染模型,为下一步研究B型流感病毒致病机制、传播机制以及开发新型疫苗奠定基础。方法 通过基因合成和反向遗传技术体外拯救B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88。全基因组测序验证拯救病毒基因组序列与Genbank序列的一致性。将拯救病毒以105EID50的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒复制等方面进行致病性分析,建立小鼠感染模型。结果 成功从体外拯救出B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88,命名为B-S9。全基因组测序结果表明,B-S9基因组序列与Genbank公布序列一致。B-S9能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性; 攻毒后第3天,B-S9感染小鼠体重出现下降,攻毒后第8天,小鼠体重开始回升;攻毒后第3天和第6天,B-S9感染小鼠的肺脏内均能检测到病毒复制,且攻毒后第3天的小鼠肺脏病毒滴度比攻毒后第6天的小鼠肺脏滴度高132倍。结论 成功搭建B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台,并建立BALB/c小鼠感染模型。目前国内外对B型流感病毒的研究还较少,该反向遗传操作平台的建立为B型流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定了基础,同时也为包括B型流感病毒减毒活疫苗在内的新型疫苗的研制开辟了新途径。     

中国人群HBV基因型及亚型与肝细胞癌相关性的Meta分析

目的 探讨中国人群HBV基因型及亚型与肝细胞癌（以下简称“肝癌”）的相关性。方法 计算机检索文献,收集2007年1月至2017年2月公开发表的有关中国人群HBV基因型、亚型与肝癌相关性的病例对照研究,按纳入与排除标准筛选文献、评价质量并提取有效数据,采用RevMan 5.3进行Meta分析。结果 最终纳入中国人群HBV基因型与肝癌相关性研究37篇,其中病例组4 109例,对照组15 319例;HBV基因亚型（C1、C2、 B2）与肝癌相关性研究8篇,其中病例组931例,对照组5 793例;纳入文献质量评分均≥7分。Meta分析结果显示,携带HBV C基因型者罹患肝癌的风险较携带HBV B基因型高（OR=2.35,95%CI：1.93~2.87,P<0.001）;携带HBV C基因型与A/D基因型者罹患肝癌风险差异无统计学意义（OR=1.25,95%CI：0.20~7.82,P=0.81）;携带HBV C1亚型、HBV C2亚型者罹患肝癌的风险差异无统计学意义（OR=1.05,95%CI：0.66~1.68,P=0.82）,携带HBV C2亚型者罹患肝癌风险较HBV B2亚型者高（OR=1.77,95%CI：1.38~2.27,P<0.001）。结论 中国人群携带HBV C基因型者罹患肝癌风险较其他主要基因型高,携带HBV C1亚型和HBV C2亚型者罹患肝癌风险相当,但HBV C2亚型者罹患肝癌风险均较携带HBV B2亚型者高。     

B型流感病毒B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台的搭建及BALB/c小鼠感染模型的建立

目的 利用基因工程技术全基因合成B型流感病毒B/Yamagata/16/88的8个基因节段,并利用反向遗传技术从体外拯救B型流感病毒B/Yamagata/16/88,同时建立BALB/c小鼠感染模型,为下一步研究B型流感病毒致病机制、传播机制以及开发新型疫苗奠定基础。方法 通过基因合成和反向遗传技术体外拯救B型流感病毒B/Yamagata/16/88。全基因组测序验证拯救病毒基因组序列与Genbank序列的一致性。将拯救病毒以10⁵EID₅₀的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒复制等方面进行致病性分析,建立小鼠感染模型。结果 成功从体外拯救出B型流感病毒B/Yamagata/16/88,命名为B-S9。全基因组测序结果表明,B-S9基因组序列与Genbank公布序列一致。B-S9能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性;攻毒后第3天,B-S9感染小鼠体重出现下降,攻毒后第8天,小鼠体重开始回升;攻毒后第3天和第6天,B-S9感染小鼠的肺脏内均能检测到病毒复制,且攻毒后第3天的小鼠肺脏病毒滴度比攻毒后第6天的小鼠肺脏滴度高132倍。结论 成功搭建B型流感病毒B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台,并建立BALB/c小鼠感染模型。目前国内外对B型流感病毒的研究比较少,该反向遗传操作平台的建立为B型流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定了基础,同时也为包括B型流感病毒减毒活疫苗在内的新型疫苗的研制开辟了新途径。     

灭活A组链球菌对红细胞及其膜蛋白影响的实验研究

目的研究灭活A组链球菌诱发红细胞破裂的机制,为A组链球菌导致的溶血性疾病治疗提供新思路。方法将杂种家兔随机分为对照组和实验组,每组2只并分别称重,实验组从耳缘静脉注射2.5mL灭活的A组链球菌全菌体,对照组从耳缘静脉注射2.5mL生理盐水。分别于注射后第6h、48h、96h、7d、14d时从耳缘静脉取血2mL,常规分离红细胞并提取膜蛋白,十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析各组红细胞膜蛋白的百分含量。每次取材均做涂片,瑞氏染色,光镜下观察红细胞形态和计数异常率。结果实验组家兔的体重在相同时间点较对照组明显降低。注射A组链球菌第96h、7d、和第14d,实验组家兔光镜下均见红细胞形态异常,大小不等,部分红细胞中央淡染区消失,部分红细胞中央淡染区扩大。计数红细胞畸形,实验组高于对照组(P<0.05),差异有显著性。SDS-PAGE电泳分析各组红细胞膜蛋白的百分含量,发现有多条带实验组红细胞膜蛋白含量显著低于生理盐水对照组。结论灭活A组链球菌从耳缘静脉注射第96h始能引起红细胞形态异常,其机制可能是红细胞膜蛋白的含量变化所致。     

血筛核酸检测在临床诊断中的应用价值研究

目的探讨血筛核酸检测在临床诊断中的应用价值研究。方法选取我院执行术前/输血前的300例患者(包括血液透析、血液病科、肿瘤科、肾病科、妇产科等科室患者),采集血液样本,执行PCR核酸检测(试验组)和化学发光试剂检测(对照组),对比观察检测结果。结果核酸检测法敏感性、特异性明显大于化学发光试剂检测法(P<0.05);300例患者中检测检出10例存在HBV,8例存在HCV,不存在HIV,其中对不同种类的HBV-DNA含量、HBV-DNA阳性率进行比较,结果HBV-DNA含量具有显著差异(P<0.05),阳性率无显著差异(P>0.05);HCV-RNA含量检测为(1265.50±76.20)copy/mL,符合阳性者7例。结论执行血筛时通过采用核酸检测法能获得较高的特异性、敏感性,在血筛时核酸检测方法值得推广。