贵州与中国大陆其它地区空肠弯曲菌MLST特征的比较分析

目的 了解贵州省鸡源空肠弯曲菌的分子流行特征,阐明各地菌株间的亲缘关系和进化特征。方法 在贵州省随机抽取7个大型养鸡场,共采集210份鸡的新鲜粪便样本,分离培养出38株空肠弯曲菌,采用多位点序列分型对分离株的序列型及克隆复合体进行构成和聚类分析,与PubMLST数据库中来自国内的分离株分子特征进行比较。结果 贵州省38株鸡源空肠弯曲菌分为23种ST型和8个克隆复合体,其中9种是目前中国大陆地区已有的ST型,2个等位基因和8种序列型为新发现的。ST型构成比前四位分别是ST - 45、ST - 161、ST - 354、ST - 4 324,与数据库中已有的6株贵州来源菌株相比,不存在共同的ST型。优势克隆复合体（CC - 45、CC - 354、CC - 52）与数据库中鸡源分离株的前三位克隆复合体没有重叠。菌株遗传进化树显示,本研究中属于优势克隆复合体的18株菌与国内部分人源、猪源、野生鸟源、鹅源分离株有较近的遗传距离。结论 贵州省鸡源空肠弯曲菌具有高度遗传多样性,在一定程度上表现出地域流行特征。序列型与国内华东地区的分离株有较高的交叉性,部分分离株与国内人、野生鸟、鹅等来源分离株遗传距离近,应加强对不同地区、不同宿主来源空肠弯曲菌的动态监测。     

贵州省即食米面制品食源性致病菌污染及病原特征分析

目的 了解贵州省即食米面制品中食源性致病菌污染状况和病原学特征,为细菌性食源性疾病的防治提供参考依据。方法 2014—2019年在贵州省的88个县（市、区）采集即食米面制品1128份,依据食品安全国家标准（GB4789）进行五种食源性致病菌的检测;采用荧光定量PCR法和ELISA法分别检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因及蛋白,普通PCR法检测蜡样芽胞杆菌毒力基因。结果 1128份即食米面制品有130份样品检出食源性致病菌,检出率为11.52%,分别是蜡样芽胞杆菌7.71%,金黄色葡萄球菌3.10%,沙门氏菌0.27%,单核细胞增生李斯特氏菌0.44%,未检出致泻大肠埃希氏菌。分离的35株金黄色葡萄球菌有65.71%携带肠毒素基因,54.29%呈肠毒素蛋白阳性。87株蜡样芽胞杆菌都至少携带两种以上毒力基因,同时携带hblACD及nheABC的有29.88%。结论 贵州省即食米面制品存在多种食源性致病菌污染,蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌污染率较高且携带多种毒力基因,存在较大食源性疾病风险,监管部门应加强对即食米面制品的加工制作管理。     

肠杆菌及临近种属的多位点序列分析

目的 为建立适宜的分子分型方法,以弥补16S rDNA在肠杆菌种属聚类分析上的不足,为后续类似菌株鉴定提供参考。方法 以肠杆菌属内各个种的模式菌株为研究对象,选择16S rDNA及rpoB、infB、gyrB和atpD基因序列,采用CLUSTALX软件和BioEdit软件进行序列比对和拼接;16S rDNA的相似性通过EzBioCloud数据库在线比对,拼接后的序列经MegAlign软件分析相似性;采用MEGA 7.0软件对序列多态性及系统发育关系进行分析。结果 肠杆菌属部分种间的16S rDNA序列高度相似(>99%),且与Lelliottia、Klebsiella及Kosakonia等属的部分种也有98%以上的相似性,其系统发育树的聚类分析显示属内成员并没有完全聚于一簇;16S rDNA序列的变异位点占比为6.44%(74/1149),rpoB、infB、gyrB和atpD基因串联后的变异位点占比为14.44%(380/2630)。结论 在16S rDNA高度同源的部分种属间,多位点序列分析较清晰地将肠杆菌属与其临近种属区分开,更能真实、准确地反映其生物分类学地位。     

贵州省动物性食品中沙门菌耐药及分子特征相关性研究

目的 了解贵州省动物性食品中沙门菌的耐药和分子型别特征及二者相关性,为我省食源性沙门菌感染及防控提供科学依据。方法 对贵州省9个市(州)2017—2021年市售动物性食品中分离的146株沙门菌进行血清学分型,采用微量肉汤稀释法测定菌株对15种抗生素的耐药性,脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)和多位点序列分型(multi-locus sequence typing, MLST)对菌株进行分子分型。结果 146株沙门菌分出27种血清型,以鼠伤寒(31/146,21.2%)、德尔卑(26/146,17.8%)、肠炎沙门菌(16/146,11.0%)为优势血清型。146株菌耐药率为79.5%(116/146),多重耐药率达60.3%(88/146),共有72种耐药谱。对氨苄西林、四环素耐药率分别达61%、64.4%。129株菌经PFGE共分出52个聚类76种带型,相似度在53.5%～100%,146株菌经MLST共检出29种ST型,以ST40(26/146,17.8%)、ST34(17/146,11.6%)、ST11(16/146、1...     

贵州省食源性蜡样芽孢杆菌毒力基因及耐药研究

目的 了解贵州省食源性蜡样芽胞杆菌的毒力基因分布及耐药谱,为蜡样芽胞杆菌食源性疾病的防治提供参考依据。方法 采用PCR方法对2015-2017年贵州省60株食源性蜡样芽胞杆菌进行10种毒力基因的检测;采用K-B法检测10种抗生素的敏感性。结果 60株蜡样芽胞杆菌共发现16种毒力基因携带模式,其中nheB、nheC检出率100%,nheA、entFM为96.67%(58/60),hblA为63.33%(38/60),hblC为56.67%(34/60),hblD为53.33%(33/60),bceT为15%(9/60),ces为3.33%(2/60)。60株蜡样芽胞杆菌对庆大霉素、氯霉素、环丙沙星、万古霉素敏感率100%,对四环素、红霉素、克林霉素、氨苄西林、甲氧苄啶的敏感率分别为98.33%、91.67%、86.67%、13.33%、3.33%,对头孢吡肟100%耐药。结论 贵州省食源性蜡样芽胞杆菌毒素基因携带率较高,存在引起食源性疾病的风险。氨苄西林、甲氧苄啶、头孢吡肟不建议作为蜡样芽孢杆菌引起的食源性疾病的临床治疗用药。