TLR9在不同胎龄新生儿脐血中的表达变化

目的 通过观察早产儿不同胎龄Toll样受体9（TLR9）的表达，探讨早产儿免疫功能低下的机制。方法 采集2010年7月至2014年6月在上海市嘉定区妇幼保健院产科出生的活产新生儿的脐血229份，按胎龄分为4组，28~31周组，31~34周组，34~37周组，≥37周组，采用流式细胞术和实时荧光定量PCR方法，分别检测其TLR9的蛋白和mRNA表达情况，了解其与胎龄之间的关系，并分析mRNA和蛋白表达间的相关性。结果 TLR9阳性细胞率在28~31周组，31~34周组，34~37周组，≥37周组分别为（15.93±6.23）%，（11.63±6.70）%，（13.66±6.88）%，（20.51±12.06）%；其在胎龄28~31周较高，至31~34周逐渐下降至最低，两组差异有统计学意义（P<0.05）；34~37周后TLR9阳性细胞率表达逐渐升高，至≥37周达最高，两胎龄组比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。31~37周间新生儿脐血TLR9阳性细胞率与胎龄呈正相关（r=0.273，P=0.006）。TLR9 mRNA表达在28~31周组，31~34周组，34~37周组，≥37周组分别为（4.95±3.44）%，（8.89±8.49）%，（13.91±10.92）%，（7.19±7.11）%；其在28~36周逐渐升高，与胎龄呈正相关（r=0.355，P< 0.001）。≥37周TLR9 mRNA表达量下降，该值虽高于28~31周，但差异无统计学意义（P>0.05）。相关性分析表明，同胎龄时期同样本新生儿的TLR9 mRNA和TLR9阳性细胞率之间存在负相关（r=-0.227，P=0.011）。结论 TLR9阳性细胞率和TLR9 mRNA表达在不同胎龄组新生儿间有差异，TLR9阳性细胞率表达在31~37周间随着胎龄的增加而增加，TLR9 mRNA在28~36周间随着胎龄的增加而增加。     

乳凝集素调节EEI-10细胞IL-2,IL-4及IFN-γ的分泌表达

目的:探讨乳凝集素调节肠相关淋巴组织淋巴细胞分泌表达细胞因子的作用.方法:应用基因重组技术从MCF-7乳腺癌细胞中提取总RNA,通过逆转录PCR方法得到目的基因(乳凝集素)片段,利用酶切,连接等技术,将目的基因构建至PET28载体内,转化入DH5a细胞后,鉴定阳性质粒;将含有目的基因的阳性质粒转化入表达细胞BL-21,IPTG诱导表达目的蛋白乳凝集素,应用特异性镍鏊合的亲和层析柱得到纯化的目的蛋白.利用H3-Tdr法明确乳凝集素剂量与人类肠上皮内淋巴细胞株EEI-10细胞增殖之间的关系.给予适当剂量乳凝集素作用于EEI-10细胞后,利用ELISA方法检测EEI-10分泌IL-2,IL-4及IFN-γ浓度,应用RT-PCR方法检测IL-2,IL-4及IFN-γmRNA表达.结果:酶切阳性的质粒经测序证实与基因文库一致.所得纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE电泳和特异性抗体鉴定,明确为目的蛋白乳凝集素.利用H3-Tdr法检测乳凝集素剂量与细胞增殖之间的关系,结果显示乳凝集素作用剂量为250mg/L时淋巴细胞增殖显著.给予乳凝集素处理后细胞培养上清中IL-2(P=0.0394)和IFN-γ(P=0.0082)的含量高于未处理细胞组,而IL-4没有显著的增高;同时处理后IL-2mRNA表达量升高,IL-4mRNA表达量无显著性改变,IFN-γmRNA表达量明显增高并高于PHA刺激组.结论:乳凝集素具有上调EEI-10细胞分泌和表达IL-2和IFN-γ的作用.     

人乳中乳铁蛋白含量的初步检测分析

目的 了解人乳乳铁蛋白水平.方法 利用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA),分别测定36名产妇产后2、3 d的初乳,6、7 d的过渡乳及42 d的成熟乳标本中乳铁蛋白水平.结果 初乳的乳铁蛋白含量最高,过渡乳组和成熟乳组依次降低,分别为初乳组(2.63 ± 1.11) g/L、过渡乳组(1.96 ± 1.05) g/L、成熟乳组(1.42 ± 1.01) g/L,三组差异有统计学意义(P ＜ 0.01).剖宫产与顺产产妇的乳铁蛋白差异无统计学意义(P ＞ 0.05).产妇年龄＜ 28岁与≥ 28岁的乳铁蛋白含量差异无统计学意义(P ＞ 0.05).结论 人乳乳铁蛋白在初乳、过渡乳、成熟乳中的下降趋势与国外报道相符,但三组测定值均低于国外水平,尤其是初乳乳铁蛋白明显低于国外报道.     

母乳中溶菌酶含量的初步测定

目的:初步研究我国产妇不同时段母乳中溶菌酶含量,为了解我国产妇人群的基本资料奠定基础。方法:采用ELISA法检测溶菌酶含量。结果:母乳中溶菌酶含量在初乳组最高,其次是成熟乳组,过渡乳组最低;其中两两比较:初乳与成熟乳、过渡乳溶菌酶含量比较有统计学差异(P<0.05);成熟乳与过渡乳溶菌酶含量比较无统计学差异(P>0.05);过渡乳组溶菌酶含量与初乳组呈正相关,而与成熟乳组无明显相关性。3组的溶菌酶含量测定值均低于国外报道,尤其是初乳中溶菌酶含量更低。结论:应用ELISA法检测溶菌酶含量具有通量高,所需样本体积量少的优点,将来可以推广应用于大样本人群的调查研究。     

Toll样受体9与感染性疾病

<正>Toll样受体是哺乳动物所具备的I型跨膜糖蛋白,目前已在人体和小鼠体内发现13种,即TLR1~13,但TLR11~13只在小鼠基因表达,在人类基因不表达。不同的Toll样受体单独或协同识别具体不同结构的配体,如识别病毒的有TLR2~4和TLR7~9,TLR2主要识别病毒的脂蛋白和肽聚糖,Toll样受体识别病毒双链RNA分子,TLR4识别病毒脂多糖,TLR7可与呼吸     

胎膜早破对早产儿败血症发病的影响

对有脑膜早破史而发生败血症的30例围产期早产儿进行分析，认为早破膜后有利于细菌逆行，形成羊膜感染综合症而感染胎儿，有羊水混浊发生率更高。加之早产儿抵抗力低下易致败血症。细菌培养多为革兰氏阴性杆菌，其次为白色葡萄球菌。     

乳凝集素对新生仔兔小肠粘膜及小肠CD4~+,CD8~+,CD25~+淋巴细胞发育的影响

目的探讨乳凝集素(lactadherin)对新生仔兔在吮乳期及断奶期小肠粘膜发育以及小肠淋巴细胞发育的影响。方法新生仔兔共45只,随机分为母乳组(GB),配方奶组(GF)及配方奶加乳凝集素组(GL,100μg/ml),每组15只,在3w和5w应用图像分析技术检测新生仔兔小肠粘膜发育情况,分别在1、2、3、4和5w时,应用流式细胞技术测定小肠CD4+,CD8+,CD25+淋巴细胞发育情况。结果(1)GL组3w空肠绒毛周长、绒毛面积、绒毛高度及隐窝深度均超过GF组,GB组3w空肠绒毛周长及绒毛高度超过GF组;GL组5w空肠和回肠绒毛周长、绒毛面积、绒毛高度及隐窝深度均超过GF组和GB组。(2)5w各组小肠绒毛发生变化,绒毛表面由高密度的手指状变为平滑叶状或舌状,GL组绒毛面积和高度恢复较GB和GF组好。(3)GL组回肠CD4+淋巴细胞发育较GF组好,GB组较GL组好;GL组回肠CD25+淋巴细胞发育较GF组好(P<0.05)。结论乳凝集素对近端空肠粘膜形态发育和小肠CD4+和CD25+淋巴细胞发育有促进作用,并且可能帮助断奶期绒毛的恢复。     

调节性T细胞与胃肠道黏膜免疫

胃肠道是人体最大的淋巴器官，其黏膜免疫系统在机体担负第一线的局部防御任务。黏膜免疫和系统免疫不同，主要发挥免疫抑制作用。调节性T细胞（Tr）是近年来免疫学领域的热点之一，其主要在机体免疫系统中发挥负向调节作用，既能抑制不恰当的免疫反应，又能限定免疫应答的范围、程度及作用时间。大量研究表明，Tr与胃肠道黏膜的过敏、感染及自身免疫性疾病有关。该文对近年来文献报道的Tr在胃肠道黏膜免疫中的作用及潜在应用价值作一综述。     

新生儿阵发性血红蛋白尿临床分析

目的探讨新生儿阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的临床及实验室检查特点.方法总结我院收治的3例新生儿PNH的病例资料,从临床,血象,溶血检查方面及红细胞,粒细胞CD55/CD59的表达检测等方面分析其特点.结果新生儿PNH临床表现为新生儿期黄疸持续不退、面色苍白、进行性贫血,典型的酱油色样尿不易发现.3例患儿红细胞CD55表达均有缺陷,2例红细胞CD59表达缺陷,1例进行粒细胞CD55/CD59检测,发现亦有表达缺陷,诊断为PNH.结论新生儿PNH极为少见,由于其临床表现不同于成人,不易发现,而通过血细胞CD55/CD59表达的检测,可明确诊断该病.因此,临床上在怀疑溶血病时,同时需考虑PNH的可能,利用目前先进的诊疗技术,从PNH的发病机制出发,积极进行血细胞CD55/CD59表达的检测,以早期明确诊断新生儿PNH,以免漏诊、误诊.