病毒miRNA研究新进展

MicmRNA（miRNA）是一类由多细胞真核生物编码的长度约为22个核苷酸的调控RNA分子,它们在许多重要细胞过程中参与转录后基因表达调控。某些病毒也能编码miRNA。目前发现的病毒miRNA已经超过200种,病毒利用这些miRNA可以调节细胞及其自身的基因表达。此文就编码miRNA的病毒,病毒miRNA的作用机制、生物学功能、保守性及其与疾病治疗的关系等内容进行综述。     

壳聚糖季铵盐作为基因递送载体的初步研究

目的考察壳聚糖季铵盐体外基因转染活性,寻求一种新的非病毒基因载体递送系统。方法凝胶阻滞实验分析壳聚糖季铵盐包裹质粒的能力,DNase I的保护实验分析载基因纳米粒的抵抗核酸酶降解的能力,体外基因转染实验评价纳米粒的体外转染活性,用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪测定转染结果。通过考察转染液中有无牛血清和递送不同剂量的基因对转染效率的影响,寻求本递送系统较好的转染条件。另外,用MTT法测定壳聚糖季铵盐的细胞毒性。观察壳聚糖季铵盐和pcDNA 3．1-EGFP以何种比例结合形成的纳米粒、转染液中有无牛血清,质粒的量为多少时对人胚肾T细胞的转染效率是最高的;不同浓度的壳聚糖季铵盐对细胞生长的影响。结果壳聚糖季铵盐纳米粒能转入人胚肾T细胞,虽然转染效率略逊于聚乙烯亚胺,但是细胞毒性明显小于聚乙烯亚胺。壳聚糖季铵盐纳米粒转染细胞72h后效率较高,经综合分析,当pcDNA质量为2μG,壳聚糖季铵盐和peDNA以质量比为5结合形成的纳米粒,在无血清条件下对人胚肾T细胞进行转染,转染效率是最高的。结论壳聚糖季铵盐纳米粒能将基因递送到细胞内,并且报告基因能在细胞内表达。因此,壳聚糖季铵盐用做基因递送的载体系统值得进一步的研究。     

葡萄糖和Cu2+对蛹虫草Cu,Zn超氧化物歧化酶在E.coli中表达的影响

对含有蛹虫草Cu，Zn-超氧化物歧化酶（cm—SOD）基因的重组E．coli培养条件进行了初步优化。结果表明，LB培养基中含有Cu^2＋可明显提高超氧化物歧化酶比活力；而在菌体培养中补加葡萄糖，可提高重组蛋白表达量和细胞生物量。在含有0．6mmol／L Cu^2＋、Zn^2＋的LB培养基中补加22mmol／L葡萄糖，每200ml培养液可获得1g湿细胞，超氧化物歧化酶比活力达到3305u／mg。     

Cu2+、Zn2+胁迫对蛹虫草(Cordyceps militaris) 抗氧化酶活性及脂氧化水平的影响

研究了Cu^2＋、Zn^2＋对蛹虫草菌丝体抗氧化酶活性及脂氧化水平的影响。结果表明：高浓度的Cu^2＋抑制菌丝体的生长和细胞内抗氧化酶的活性；高浓度的Zn^2＋对菌丝体的生长也有抑制作用但抗氧化酶的活性变化不大。脂氧化水平随细胞内过氧化状态的变化而变化。蛹虫草菌丝体对Cu^2＋、Zn^2＋有较高的耐受度。     

蛹虫草菌丝体超氧化物歧化酶的制备

 目的从蛹虫草(Cordyceps militaris)菌丝体中制备Cu,Zn-超氧化物歧化酶。方法超声破碎、硫酸铵沉淀、离子交换。结果10 g湿菌丝体,最佳超声破碎功率400 W,超声时间15 min。粗酶液经55%～95%硫酸铵沉淀,DEAE-FF阴离子交换柱,CM-52阳离子交换柱纯化,酶蛋白收率22.4%,比活达到13 592.1 U·mg(蛋白)^-1,纯化倍数214.1倍。SDS-PAGE电泳分析呈现均一条带。紫外最大吸收峰为266 nm。该酶对KCN和H₂O₂敏感。氨基酸组成和其他来源Cu,Zn-SOD相似。结论本制备工艺切实可行,能获得理想的电泳纯蛋白。     

壳聚糖季铵盐(HTCC)载HSV-2型DNA疫苗pgD诱导小鼠免疫应答的初步研究

目的:制备了壳聚糖季铵盐-DNA疫苗(pgD)纳米粒复合物,并对其诱导BALB/c小鼠产生免疫应答的能力做了初步研究。方法:通过复凝聚法制备了HTCC-pgD纳米粒复合物并对其进行表征。60只BALB/c小鼠随机分成5组:①HTCC10对照组;②pcDNAkan空载体对照组;③重组质粒pgD组;④HTCC∶pgD=5∶1组;⑤HTCC∶pgD=10∶1组。各组小鼠后腿肌肉注射,注射剂量为100μg/(只.次),隔2周免疫1次,共免疫2次。末次免疫2周后,通过流式细胞仪检测外周血中CD4+、CD8+百分率,ELISA法检测血清中IgG抗体效价、IFN-γ、IL-4含量这4个方面来研究该纳米粒复合物对小鼠免疫反应的影响。结果:HTCC能与质粒pgD很好结合成纳米复合物,保护DNA免受核酸酶的降解。小鼠经免疫2次后,流式细胞仪检测外周血中CD4+T淋巴细胞亚群结果显示HTCC-pgD纳米粒复合物组的CD4+百分率要高于其他对照组(P<0.05)。血清ELISA检测IgG结果显示与对照组相比,HTCC-pgD纳米粒复合物可诱导小鼠机体产生较高滴度的IgG抗体。HTCC-pgD纳米粒复合物组的小鼠血清中IFN-γ水平与对照组相比有所上调,IL-4水平有下降。结论:通过复凝聚法制备的HTCC-pgD纳米粒复合物可诱导BALB/c小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫,为HSV-2型DNA疫苗研制提供科学依据。     

不同基因型戊型肝炎病毒抗原表位的研究进展

此文介绍了戊型肝炎病毒(HEV)的分型、地理分布和抗原表位的研究进展,以期对HEV的诊断方法 、疫苗研究、进化和其是否为人畜共患等方面的研究提供依据.     

H7N9禽流感病毒血凝素线性B细胞抗原表位单克隆抗体的制备和鉴定

目的研制用于H7N9禽流感病毒诊断的血凝素线性B细胞抗原表位单克隆抗体。方法采用H7N9禽流感病毒血凝素特异性线性B细胞抗原表位免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术和间接ELISA法筛选、鉴定获得稳定分泌抗H7N9禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞株;通过SDS-PAGE、间接ELISA和斑点免疫印迹技术鉴定其亚型、效价、纯度等生物学特征。结果共获得2株单克隆抗体(7C8H8和8E9E2),其中7C8H8抗体亚类为IgG2a,腹水抗体效价>1∶512000,且可以特异性结合H7N9禽流感病毒血凝素。8E9E2仅具有较低的H7N9禽流感病毒血凝素蛋白结合力。结论获得1株可分泌高效价、高特异性的抗H7N9禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞株7C8H8。     

流感病毒神经酰胺酶功能及其抑制剂的研究进展

神经酰胺酶(NA)是流感病毒的一个表面糖蛋白,在病毒感染宿主细胞及其传播过程中起着重要作用。NA活性中心的多个带正电荷的氨基酸残基高度保守。NA结构的阐明有利于特异性的NA抑制剂的研发。当前广泛应用的2种NA抑制剂——扎那米韦和奥司米韦能有效地抗击流感病毒,但针对NA及血凝素(HA)保守序列突变的耐药株也不断出现。     

CD40L对单纯疱疹病毒2型DNA疫苗的免疫增强作用研究

目的 研究重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L辅佐HSV-2 DNA疫苗增强小鼠体液免疫和细胞免疫的作用效果,探讨其作为HSV-2 DNA疫苗佐剂的潜力。 方法 (1)构建鼠CD40L基因的重组真核表达质粒pcDNA3-Kan/CD40L。(2)体外细胞实验:检测重组质粒pCD40L刺激小鼠外周血淋巴细胞增殖情况和脾细胞分泌IFN-γ的能力。(3)体内动物实验:48只雌性BALB/c小鼠随机分为4个免疫组pK组、pgD组、pcCD40L+pgD组和pK+pgD组。小鼠后腿肌内注射,共免疫2次,间隔3周。末次免疫3周后,每组随机取4只小鼠进行致死剂量攻毒实验验证疫苗的保护作用。 ELISA检测小鼠血清抗HSV-2 IgG抗体水平和趋化因子RANTES;流式细胞术检测全血中CD4⁺和CD8⁺T细胞百分率以及分泌IFN-γ和IL-4的T细胞的百分率;MTS法检测小鼠脾脏T细胞的增殖能力。 结果 (1)体外实验结果:重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L对小鼠外周血淋巴细胞的增殖能力和刺激脾细胞分泌IFN-γ的能力均显著大于空质粒pcDNA3-Kan(P<0.05)。(2)体内实验结果:小鼠血清抗HSV-2 IgG水平、趋化因子RANTES、脾淋巴细胞刺激指数和外周血CD4⁺T细胞数和分泌IFN-γ的Th1细胞数均高于其他免疫组(P<0.05)。pcDNA3-Kan/CD40L+pgD组预防小鼠感染HSV-2效果好于其他免疫组。 结论 (1)重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L能够诱导外周血淋巴细胞增殖并刺激脾细胞分泌IFN-γ具有作为疫苗佐剂的潜力。(2)pcDNA3-Kan/CD40L可以辅助HSV-2 DNA疫苗诱导BALB/c小鼠产生特异性抗HSV-2的体液免疫和细胞免疫,具备作为HSV-2 DNA疫苗免疫佐剂的能力。