登革1型和2型病毒混合感染样本的一步法实时荧光定量PCR检测方法的建立

本文旨在建立检测登革1型和2型病毒的一步法实时荧光定量PCR方法,为登革热的诊断和预测提供技术支撑。依据登革1型和2型病毒的保守区序列设计引物和探针,建立了同时检测两个血清型登革病毒的一步法实时荧光定量PCR方法。特异性实验结果显示,该方法可检测出登1型和2型病毒,与登革3型、4型病毒、黄热病毒、流感H3N2病毒均无交叉反应,具有较好的特异性。对登革1型和登革2型的灵敏度均为102copies/μL。应用该方法,可检测出登革1型和2型病毒混合感染C6/36后不同时间点病毒复制动态。在两个血清型登革病毒混合感染C6/36细胞72~120 h登革2型病毒的拷贝数与单独感染时登革2型病毒的拷贝数相比显著下降。上述研究证实建立的一步法实时荧光定量PCR方法具有特异性好灵敏度高、重复性好等特点,能够用于登革型和2型病毒混合感染样本的检测。     

免疫荧光技术检测室内感染蚊虫体内登革病毒的研究

目的　探讨检测媒介蚊虫体内登革病毒的方法。　方法　以埃及伊蚊和白纹伊蚊两种有效媒介为研究对象 ,在人工经口感染大剂量登革 2型病毒 (DEN- 2 )的基础上 ,通过蚊细胞培养病毒分离和蚊头部压片免疫荧光技术进行病毒抗原检测。　结果　埃及伊蚊感染 DEN- 2病毒 1d后 ,接种 C6 / 36细胞 ,盲传一代后第 5 d出现空斑现象 ,确证细胞发病。白纹伊蚊经口感染登革病毒后 ,取吸血雌蚊每日进行头部压片免疫荧光检测 ,结果显示 ,从蚊虫感染后第 1d～第 2 0d内均能检测到病毒抗原。　结论　用免疫荧光技术 ,可直接检测出感染蚊体内是否携带登革病毒 ,是较为简便、省时、敏感的方法     

DNA条形码研究进展

DNA条形码（ DNA Barcoding ）技术是一种新的物种识别方法,它是分子生物学和生物信息学相结合的产物。在最近几年里,该技术已成为生物分类学中引人注目的研究热点。这一概念认为,类似于商店里使用扫描仪读取条形码,对地球上每一种生物通过快速分析其DNA中的一段基因（线粒体细胞色素c氧化酶Ⅰ亚基, mt COⅠ）加以识别。理论上, DNA条形码已被证明在生物分类鉴定中具有非常重要的作用,并推动了一系列相关学科的发展,但目前不同分类学家对其持的意见也不尽相同。本文综述了DNA条形码技术的产生、发展概况、原理与操作及其在分类中的应用,并概括了DNA条形码在应用于物种分类中可能存在的问题。     

白纹伊蚊气味受体基因OR21α的克隆及定量分析

本文克隆白蚊伊蚊气味受体基因OR21a分析其是否与搜寻宿主或吸血行为相关。通过设计简并引物,PCR扩增得到白纹伊蚊气味受体基因OR21a段,采用SYBR荧光定量PCR方法,以自纹伊蚊β-肌动蛋白基因作为内参,比较了OR21a因在未吸血雌蚊、雄蚊、打断吸血雌蚊和饱血雌蚊头部表达量的差异。结果显示,白纹伊蚊OR21a因在未吸血雌蚊头部表达量最高,饱血雌蚊头部表达量最低,而在雄蚊头部的表达量介于打断吸血雌蚊和饱血雌蚊之间。本研究发现白蚊伊蚊会依据不同的生理需求改变OR21a因的表达量,推测可能与白纹伊蚊搜寻宿主及吸血行为有一定的相关性。     

淡色库蚊中溴氰菊酯和生物丙烯菊酯抗性发展与击倒抗性基因频率之间的关系?

使用溴氰菊酯和生物丙烯菊酯对采自北京的淡色库蚊蚊株进行抗药性筛选,筛选时,4龄幼虫被置于LC_(50)浓度值的水体中饲养。经过7代的不间断筛选,蚊虫对溴氰菊酯和生物丙烯菊酯的抗性倍数分别上升了12.9倍和4.8倍,对应敏感株,抗性倍数分别为217.8倍和41.6倍。PCR检测结果显示,kdr抗性基因的频率在逐代上升。F_7代时,溴氰菊酯筛选株和生物丙烯菊酯筛选株的kdr抗性基因频率已分别上升至98.96%和97.87%。结果表明,Phe1014的抗性纯合子频率和抗性杂合子频率均与LC_(50)值之间具有显著相关性。本文证明了高浓度的拟除虫菊酯杀虫剂筛选会使Phe1014突变频率快速的上升。     

创建国家卫生县城对蚊媒防制的影响研究

目的研究创建国家卫生县城对蚊媒防制的影响。方法通过德尔菲法筛选出影响灭蚊工作的主要因素,对全国病媒生物防制基本信息调查的国家卫生县城和非国家卫生县城、灭蚊达标县和灭蚊未达标县分别进行统计学分析,综合对照分析创建国家卫生县城是否对蚊媒防制工作有促进作用。结果灭蚊达标是蚊媒防制工作的最重要效果评价指标,灭蚊达标县和灭蚊未达标县的多因素分析结果显示,是否是国家卫生县城与灭蚊达标有明显关联。国家卫生县城灭蚊达标比例是非国家卫生县城灭蚊达标比例的2倍,国家卫生县城在政府重视、政策保障、经费投入、防制机构建设、专业队伍建设、社会化服务机构建设管理、密度监测和抗药性监测工作等情况均优于非国家卫生县城。结论创建国家卫生县城对蚊媒防制工作有显著促进作用。     

淡色库蚊乙酰胆碱酯酶基因上的可变剪接及对酶活性的影响

在淡色库蚊的乙酰胆碱酯酶ace1基因上发现了1个可变剪接,与实验室敏感株1个个体的ace1基因的编码区相差了24个碱基,导致所编码的成熟蛋白在44~51氨基酸残基处缺失了8个氨基酸。经过在昆虫杆状病毒表达系统中的表达,推测这段基因的可变剪接可影响乙酰胆碱酯酶的活性。     

云南南部地区三带喙库蚊与伪杂鳞库蚊种群与环境因素关系的地理信息系统分析

三带喙库蚊是云南地区主要乙脑媒介,而伪杂鳞库蚊也被怀疑在云南地区能起到传播乙脑的作用,它们的种群动态与特定地区的环境因素密切相关,也关系到当地乙脑的流行态势。本研究选择云南省南部边境地区孟腊县2个村:龙塘村和东方红村,在2村内设置16个诱蚊采样点,并应用地理信息系统对2村的三带喙库蚊和伪杂鳞库蚊种群与环境因素之间的关系进行分析。研究结果表明,灯点离水稻田最近空间水平距离(DTF)与灯点平方公里缓冲区间水稻田面积(KFA)、样点伪杂鳞库蚊种群优势度呈正相关关系;样点三带喙库蚊的优势度与灯点离河流最近空间水平距离(DTR)存在负相关关系;KFA与样点三带喙库蚊种群密度呈正相关关系。文章还在此基础上对西部开发中环境改变对这两种蚊虫乃至乙脑流行的可能影响进行了进一步探讨。