亨廷顿蛋白相关蛋白1基因对小鼠成纤维细胞增殖的影响

  目的  研究亨廷顿蛋白相关蛋白1（Huntingtin-associated protein 1,Hap1）基因对成纤维细胞增殖的影响。  方法  体外分离培养获得Hap1基因敲除（Hap1-/-）的原代成纤维细胞,鉴定后采用EdU增殖实验、细胞周期（流式细胞术）检测验证Hap1成纤维细胞增殖的改变;将野生型和Hap1-/-成纤维细胞送转录组测序筛选增殖相关基因,实时荧光定量PCR（qPCR）验证相关基因表达水平的改变。对小鼠进行皮肤损伤造模检测Hap1敲减（Hap1+/-）小鼠皮肤损伤修复情况;PCNA免疫组化染色检测损伤修复过程中成纤维细胞的增殖水平。  结果  成功培养原代Hap1-/-成纤维细胞;与野生型成纤维细胞相比,Hap1-/-成纤维细胞EdU阳性比例减少,进入S期的细胞比例减少;原代成纤维细胞转录组测序筛选出Cdc25C、E2f7、E2f8和Ccl5四个差异表达的增殖相关基因,qPCR验证发现E2f7在Hap1敲除后表达增多。小鼠皮肤损伤结果显示,Hap1+/-小鼠伤口面积较相同时间点野生型小鼠伤口面积大且愈合速度减慢,成纤维细胞增殖阳性密度低于野生型小鼠。  结论  Hap1可能通过抑制细胞周期负性调节因子E2f7的表达对成纤维细胞增殖起正向调节作用,其缺失将抑制成纤维细胞进入S期,从而减少细胞增殖,影响伤口修复。     

扶正化瘀解毒汤调控ITGB3-Ras轴对人前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨扶正化瘀解毒汤通过调控ITGB3-Ras轴对前列腺癌(Prostate Cancer, PCa)的肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移等肿瘤生物学行为的影响。方法:RM-1细胞建立PCa体内荷瘤模型,该方灌胃观察对移植瘤的生长抑制效应。该方含药血清处理人PCa细胞系LNCaP、DU-145、PC-3细胞以及正常前列腺细胞系WPMY-1,MTT检测细胞增殖,集落形成实验观察细胞集落形成,Transwell小室实验观察细胞侵袭和迁移能力,Western blot和RT-qPCR检测含药血清对ITGB3-Ras轴的调控作用,shRNA和过表达验证含药血清的作用靶点。iTRAQ分析检测该方含药血清对PC-3细胞ITGB3-Ras轴主要蛋白表达调控作用。高效液相色谱法(HPLC)测定该方的有效成分含量。结果:该方体内可明显抑制RM-1细胞小鼠的皮下移植肿瘤体积(P<0.001)和重量(P<0.01)。含药血清抑制了PC-3和DU-145的细胞生长活力和集落形成,并呈剂量依赖性。Transwell小室实验显示,低浓度含药血清可抑制PC-3和DU-145的细胞的侵袭和迁移能力。iTRAQ蛋...