自发性高血压大鼠神经肽Y-Y1受体在脑血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨神经肽Y-Y1受体激动剂[Leu31,Pro34]-NPY对体外培养的自发性高血压大鼠(SHR)脑血管平滑肌细胞促增殖作用的影响.方法应用植块法体外培养SHR大脑动脉血管平滑肌细胞,分别用正常细胞外液、10-5或10-8NPY,10-6硝苯地平,10-6硝苯地平 10-6mol/L NPY加入培养液培养细胞.用免疫荧光法检测平滑肌培养细胞中增殖核抗原(PCNA)的表达,用流式细胞仪对平滑肌细胞的S期细胞进行检测分析.结果随着[Leu31,Pro34]-NPY浓度的增加,平滑肌细胞PCNA阳性率递增,与对照组相比其阳性率有明显差别(P＜0.001).硝苯地平明显抑制PCNA阳性率.与硝苯地平 10-6 mol/L NPY相比,PCNA阳性率有显著差异(5.1±0.5 vs 17.7±2.5,P=0.009).随着NPY浓度增加,血管平滑肌细胞S期百分数也是增加的,10-5、10-6mol/L NPY组与对照组相比有差别(P＜0.05).硝苯地平组与硝苯地平 10-6mol/L NPY比较,S期细胞百分数有显著差异(P=0.0023).结论NPY-Y1受体激动剂对血管平滑肌细胞具有浓度依赖性的PCNA表达增强作用,能够提高血管平滑肌细胞S期比例.L型钙离子拮抗剂能够减弱NPY-Y1受体激动剂的促平滑肌细胞增殖作用.     

体外模拟局部肾素血管紧张素系统对心肌纤维化的影响

目的建立局部肾素血管紧张素系统(RAS)对大鼠心肌纤维化影响的体外模型。方法原代培养新生大鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞,用RT-PCR鉴定两种细胞RAS各组分在基因水平的表达。从RAS各组分蛋白代谢的角度,采用依那普利阻断心肌细胞血管紧张素转换酶(ACE),放免法观察培养基中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)量的变化,结合Western blotting验证ACE2的存在,确定心肌细胞局部RAS各组分在蛋白水平的存在。以Transwell共培养心肌细胞和心肌成纤维细胞,构建局部RAS影响心肌纤维化的体外模型。结果在心肌细胞中检测到RAS各组分基因的表达,但在成纤维细胞中未发现肾素和ACE2的表达;对心肌细胞采用依那普利干预后AngⅡ呈剂量依赖性下降,10-7mol/L组[(36.24±3.27)pg/mL]与对照组[(44.08±0.76)pg/mL]有显著差异(P<0.05);Western blotting证实心肌细胞在蛋白水平有ACE2的表达。结论心肌细胞能够单独形成局部RAS;而成纤维细胞因为不能生成肾素和ACE2,则本身不能形成局部RAS。以Transwell体外共培养心肌细胞和心肌成纤维细胞能够建立一个用于研究局部RAS对心肌纤维化影响的体外模型。     

经岩窦取标本诊断继发于异位ACTHCRH分泌的Cushing综合征存在潜在偏差

经岩下窦取标本辅以促肾上腺皮质激素释放激素（ＣＲＨ）刺激试验被认为是鉴别垂体与非垂体促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）依赖性Ｃｕｓｈｉｎｇ综合征的金标准。如果合并异位ＡＣＴＨＣＲＨ分泌时此标准便不可靠。病例概况　患者６０岁,１２个月内体重增加１２ｋｇ,伴肌无力、高血压、向心性肥胖、满月脸、水牛背、近端肌肉萎缩,血压２５．２７／１４．６３ｋＰａ、血糖１１ｍｍｏｌ／Ｌ,Ｋ＋２．７ｍｍｏｌ／Ｌ、ＣＯ２ＣＰ３１ｍｍｏｌ／Ｌ,游离尿皮质醇升高,皮质醇每日节律缺乏。应用２ｄ小剂量地塞米松（２ｍｇ）抑制试验无反…     

单核细胞和血小板CD40L高表达及血小板CD62P高含量与急性冠脉综合征的关系

目的探讨急性冠脉综合征(ACS)外周血单核细胞和血小板表达CD40L及血小板CD62P含量的变化及意义。方法应用间接免疫荧光流式细胞仪测定患者与对照组血单核细胞和血小板表达CD40L水平及血小板CD62P含量。结果发现急性冠脉综合征患者(ACS)单核细胞和血小板表达CD40水平及血小板CD62P含量均显著高于正常对照者(NS)(P<0.01)和稳定型冠心病患者(SA)(P<0.05或P<0.01)。结论急性冠脉综合征患者外周血单核细胞和血小板表达CD40L及血小板CD62P含量可能与ACS的发生有关,是动脉粥样硬化斑块不稳定的标志。     

左心室超负荷减容术治疗终末期心力衰竭的效果分析

终末期心力衰竭患者心脏由于心室重构的作用可造成左心室几何形状的改变,心脏移植是公认的治疗终末期心力衰竭的最有效的方法,但是由于供体和费用的问题,使得这种手术受到了极大的限制,所以寻找新的方法来治疗终末期心力衰竭有非常重大的意义。1996年,巴西医生Batista率先开展了左心室减容术（又称Batista手术）,该手术给终末期心力衰竭的患者带来了希望,然而由于术后并发症太多,严重限制了其发展。其后学者一直在完善该手术,现对左心室减容术的发展做一个综述。     

NPY-Y1受体激动剂对SHR脑血管平滑肌细胞的促增殖作用

目的 探讨NPY-Y1受体激动剂[Leu31, Pro34]-NPY对体外培养的自发性高血压大鼠(SHR)脑血管平滑肌细胞增殖周期的影响及其跨膜信号传递途径.方法 植块法培养SHR血管平滑肌细胞,流式细胞仪检测不同药物干预下S期细胞的百分比;激光共聚焦扫描显微镜定量分析细胞内游离钙离子浓度.结果 随着[Leu31, Pro34]-NPY浓度的增加, S期细胞所占百分比增加,10-5、10-6 mol/L NPY组与对照组相比有显著差异(P＜0.05).[Leu31, Pro34]-NPY(用正常细胞外液稀释)干预细胞时,细胞内游离钙离子浓度先明显升高,随后下降(P＜0.01);[Leu31, Pro34]-NPY+硝苯地平组细胞内钙离子浓度变化不明显,而硝苯地平组细胞内钙离子浓度呈下降趋势(P＜0.01).结论 通过细胞膜上L型钙离子通道进行跨膜信号传递,NPY-Y1受体介导促血管平滑肌细胞增殖作用.     

血管紧张素Ⅱ与高血压心肌纤维化关系的研究进展

心肌纤维化 (myocardialfibrosis,MF)以成纤维细胞数目增多和心肌细胞外间质胶原过度沉积为特征 ,可发生于许多心血管疾病 ,在高血压性心脏病中同样存在。心肌纤维化可导致心肌僵硬度增加 ,心室舒张功能下降 ,并影响心肌电生理 ,引起猝死。其重要性备受广大医务工作者关注。血管紧张素Ⅱ (angiotensinⅡ ,AngⅡ )在高血压心肌纤维化的发生、发展过程中起着非常重要的作用。现将研究现状综述如下。1　心肌胶原的产生及其功能正常心肌组织是由心肌细胞和间质所构成。间质包括成纤维细胞 (FBC)及其合成的胶原。心肌细胞仅占心脏总细胞数的 1…     

NPY-Y1受体激动剂对SHR脑血管平滑肌细胞的促增殖作用

目的探讨NPY-Y1受体激动剂[Leu31,Pro34]-NPY对体外培养的自发性高血压大鼠(SHR)脑血管平滑肌细胞增殖周期的影响及其跨膜信号传递途径。方法植块法培养SHR血管平滑肌细胞,流式细胞仪检测不同药物干预下S期细胞的百分比;激光共聚焦扫描显微镜定量分析细胞内游离钙离子浓度。结果随着[Leu31,Pro34]-NPY浓度的增加,S期细胞所占百分比增加,10-5、10-6mol/L NPY组与对照组相比有显著差异(P<0.05)。[Leu31,Pro34]-NPY(用正常细胞外液稀释)干预细胞时,细胞内游离钙离子浓度先明显升高,随后下降(P<0.01);[Leu31,Pro34]-NPY 硝苯地平组细胞内钙离子浓度变化不明显,而硝苯地平组细胞内钙离子浓度呈下降趋势(P<0.01)。结论通过细胞膜上L型钙离子通道进行跨膜信号传递,NPY-Y1受体介导促血管平滑肌细胞增殖作用。     

胱抑素C对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨胱抑素C（CysC）高表达对大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖能力的影响。方法 取出生1～3d的Sperague-Dawley（SD）清洁级大鼠10只,体质量10～15g,差速贴壁法培养乳鼠心肌成纤维细胞;采用Gateway技术构建重组CysC腺病毒高效表达载体(Ad-CysC)并体外转染大鼠CFs;将对数生长期的大鼠CFs随机分成正常细胞组（PBS组）,携有绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒组（Ad-GFP组）及CysC腺病毒高表达组(Ad-CysC组)。采用蛋白免疫印迹技术（WB）检测CysC蛋白在CFs中的表达情况,通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入法检测CysC高表达对CFs增殖能力的影响。结果 经DNA测序及WB结果分析,CysC腺病毒高效表达载体构建成功,转染CFs 24h后（MOI=200）,Ad CysC的转染效率高达90%以上;用重组CysC腺病毒转染CFs后, CysC蛋白在24h即有明显的表达上调（P<0.05）;与PBS组及Ad-GFP组相比,转染Ad-CysC的CFs在72h的 BrdU摄取率显著提高（P<0.05）。结论 大鼠CysC腺病毒高效表达能够促进CFs增殖,可能加速心肌纤维化进程。     

神经肽Y对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的应用激光共聚焦显微镜动态观察神经肽Y(NPY)受体激动剂[Leu31,Pro34]-NPY干预大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)产生的细胞内钙离子([Ca2 ]i)浓度变化,以确定NPY对大鼠VSMC[Ca2 ]i浓度的影响。方法用分散细胞培养法培养VSMC。用10μmol/L的Fluo-3孵育细胞。使其与细胞内的游离[Ca2 ]i相结合,从而能够在525nm的激发光激发下产生荧光。分别用正常细胞外液、无钙细胞外液稀释的10-6mol/L[Leu31,Pro34]-NPY、1μmol/L硝苯地平、10-6mol/L[Leu31,Pro34]-NPY 1μmol/L硝苯地平灌流细胞,同时用激光共聚焦显微镜扫描、记录图像。用Leica图像分析系统分析图像,定量分析不同情况下的[Ca2 ]i荧光强度。结果正常细胞外液灌流时[Ca2 ]i变化不明显,最高值为57.3±3.1,最低值为53.7±2.9,无明显差异(P>0.05)。[Leu31,Pro34]-NPY干预细胞时,[Ca2 ]i明显地升高,随后又开始下降。最高值为86.4±2.7,最低值为58.1±3.0,有非常显著差异(P<0.01)。无钙细胞外液 [Leu31,Pro34]-NPY灌流VSMC时[Ca2 ]i浓度变化不明显,最高值为52.5±3.5,最低值为48.0±1.2(P>0.05);[Leu31,Pro34]-NPY 硝苯地平组[Ca2 ]i变化不明显,最高值为52.6±2.1,最低值为51.7±2.7,差异无统计学意义(P>0.05)。硝苯地平组[Ca2 ]i呈下降趋势,最高值为52.8±2.2,最低值为37.5±2.1,有非常显著差异(P<0.01)。结论NPY能够通过NPY-Y1受体使细胞内的[Ca2 ]i浓度升高,这种升高是依赖于细胞外的[Ca2 ]i由L型[Ca2 ]i通道进入细胞的。