变形链球菌F-ATP酶基因重组质粒的构建和初步分析

目的：构建用于转化变形链球菌，含有F-ATP酶基因的重组质粒。方法：采用PCR方法，以变形链球菌基因组DNA为模板，扩增F-ATP酶β亚基5′末端序列，将克隆片段与载体pVA891酶切后连接，形成重组质粒，并对变形链球菌的转化作了初步分析。结果：构建的重组质粒经PCR鉴定、酶切鉴定和DNA序列测定，显示插入的目的片段序列正确。结论：变形链球菌目的片段与穿梭载体重组后能有效克隆，为通过同源重组特异突变变形链球菌染色体基因奠定基础。     

变异链球菌表面增强拉曼光谱的初步研究

目的探讨以纳米银溶胶为增强基底的变异链球菌（Streptococcus mutaras）表面增强拉曼光谱（SERS）。方法葡萄糖还原硝酸银制备纳米银溶胶。以该溶胶为增强基底．用DXR激光显微拉曼光谱仪获取变异链球菌的SERS。结果纳米银溶胶粒子为分散性好、均粒径约为11．08nm的球形颗粒．其增强效果较高;变异链球菌SERS的拉曼信号强且峰较多,被增强的谱峰主要集中在细胞壁成分相关的700．1800cm^-1区域,在721．94、1270．35、1371．83、1441．51、1569．22、1628．91、2922．65cm^-1处均有明显的拉曼振动峰。结论以葡萄糖还原硝酸银制备的纳米银溶胶为基底．可获得变异链球菌SERS,可用于变异链球菌的检测及其细胞壁成分的分析等．有助于进一步探索变异链球菌的致龋机制及研制新型防龋药物。     

phIFN-α-2 B穿梭质粒在卡介苗中的表达

目的建立一种新型、具有分泌hIFN-α-2B功能的卡介苗(BCG),为膀胱癌的治疗提供更合理的方法。方法利用基因工程技术构建出穿梭质粒phIFN-α-2B,转导至BCG内形成重组hIFN-α-2B-BCG,采用PCR、测序方法进行鉴定,ELISA方法对其表达情况进行检测。结果穿梭质粒phIFN-α-2B所插入的序列完全正确,可以转导入BCG内形成重组hIFN-α-2B-BCG。细菌外hIFN-α-2B浓度可达997.2pg/ml。结论利用基因工程技术构建了phIFN-α-2B穿梭质粒并转导入BCG内,构建出rBCG-hIFN-α-2B。重组BCG可将hIFN-α-2B分泌性表达到细菌外,为其应用于膀胱肿瘤的治疗提供了实验依据。     

心肌梗塞范围计算的研究Ⅰ:利用系列血清磷酸肌酸激酶活力改变计算梗塞范围

1971年Shell氏等设计出利用急性心肌梗塞(AMI)后系列血清磷酸肌酸激酶(CPK)活力改变计算梗塞范围的经验数学公式,并于次年应用于临床。当时已知从坏死心肌释放的CPK并非全部进入血循环,进     

变形链球菌LuxS基因缺陷株生物膜结构的初步观察

生物膜是一种基质包裹的相互黏附或附着于体表及界面的细菌群体,牙菌斑就是一种典型的口腔生物膜,与龋病、牙周病的发生密切相关.     

LuxS基因突变对变形链球菌产酸代谢的影响

目的：研究LuxS基因突变对变形链球菌产酸代谢的影响,以探讨变形链球菌LuxS基因缺陷菌株致龋毒力的变化。方法：采用比浊法测定不同培养条件下变形链球菌LuxS基因缺陷菌株培养液的吸光度A值;同时测定不同培养条件下培养基上清液的pH值。结果：基因缺陷株细菌A值显著低于标准株（P〈0．05）;培养基初始pH〉5．0时,其产酸量小于亲代株,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：变形链球菌LuxS基因缺陷菌株的产酸代谢能力下降,其致龋力小于亲代菌株。     

变异链球菌LuxS基因缺陷突变株的构建及其生物膜结构的初步观察研究

目的:通过同源重组法构建变异链球菌LuxS基因缺陷突变菌株,比较其与变异链球菌UA159标准株在生物膜形成上的差异。方法:运用基因同源重组方法将氯霉素抗性基因(Cmr)与LuxS基因上下游区域的2个基因片段按一定顺序重组到PUC载体的多克隆位点中,构建出带氯霉素抗性标志的重组质粒,将载体质粒转化到含完整LuxS基因的变异链球菌UA159中,利用氯霉素抗性筛选出LuxS基因缺陷的突变株,并利用聚合酶链式反应(PCR)和哈氏弧菌发光实验进行检测。以釉质磨片为载体,在扫描电镜下观察上述两菌株含有20 g/L葡萄糖、20 g/L蔗糖的乳酪消化胨酵母(TPY)液体培养基中形成24 h的生物膜。结果:PCR基因扩增结果显示:突变株LuxS基因已被Cmr基因完全替换,成功的构建了变异链球菌LuxS基因突变株,并且突变株不能诱导哈氏弧菌BB170的生物发光。当用葡萄糖作为补充糖源时,变异链球菌UA159标准株和LuxS基因突变株所形成的生物膜表现型未见明显差异;而用蔗糖作为补充糖源时,两菌株所形成的生物膜有明显不同,UA159生物膜相对平滑均质,而LuxS基因突变株生物膜呈松散的蜂房状,基质间有较大的间隙,形成较大的团簇状菌落。结论:成功构建出LuxS基因缺陷的变异链球菌突变株,与变异链球菌UA159标准株其生物膜结构发生改变,提示LuxS会影响变异链球菌生物膜的形成。     

LuxS基因突变对变形链球菌生长的初步研究

目的研究luxS基因突变对变形链球菌生长的影响。方法采用比浊法测定不同培养条件下变形链球菌luxS基因缺陷株培养液的吸光度A值。结果基因缺陷株细菌A值明显低于变链菌标准株,差异有统计学意义(P<0.001);对培养基的初始pH值递减敏感性增加。结论LuxS基因突变可以抑制变形链球菌的生长,基因缺陷株的耐酸性降低。     

变异链球菌LuxS基因突变株生物被膜结构的电镜观察

目的：探讨变异链球菌Ingbritt C（血清C型）国际标准株与LuxS基因缺失的变异链球菌突变株之间生物被膜的形成差异。方法：分别将变异链球菌标准株和LuxS基因突变株接种于含有2％葡萄糖、2％蔗糖的乳酪消化胨酵母（TPY）液体培养基中,以牙釉质磨片为载体,于扫描电镜下观察形成24h的上述两菌株生物被膜。结果：（1）当以葡萄糖作为补充糖源时,变异链球菌标准株和LuxS基因突变株所形成的生物被膜表现型未见明显差异;（2）当以蔗糖作为补充糖源时。两菌株所形成的生物被膜有明显的不同,标准株生物被膜相对平滑均质,而LuxS基因突变株的生物被膜呈松散的蜂房状,基质间有较大的间隙,形成较大的团簇状菌落;（3）加入标准株的无菌体上清液可以使LarxS基因突变株的生物被膜表型部分恢复正常,提高LuxS基因突变株形成生物被膜的能力。结论：变异链球菌标准株和LuxS基因突变株均能形成生物被膜．但LuxS基因突变株的生物被膜结构发生改变;依赖于LuxS的群体感应系统会影响变异链球菌生物被膜的形成。