利用实时细胞分析技术检测胰腺癌细胞的药物敏感性

目的基于实时细胞分析技术评估胰腺癌细胞的药物敏感性,为胰腺癌个体化诊疗提供参考。方法选取SW1900、Capan-2、PANC-1三株人胰腺癌细胞系,选用盐酸吉西他滨和替吉奥胶囊两种胰腺癌治疗药物,接种24 h后分别梯度浓度给药,实时细胞分析技术监测给药前后细胞生长曲线,计算药物对胰腺癌细胞的生长抑制率(IC50)。同时,细胞培养板内给药,进行AO/EB染色和激光共聚焦观察。结果药物作用72 h,同一药物对不同细胞抑制率不同。盐酸吉西他滨对SW1900、Capan-2、PANC-1细胞的IC50分别为1.69、10.05、12.74μmol/L。替吉奥胶囊对SW1900、Capan-2、PANC-1细胞的IC50分别为180.29、765.70、95.57μmol/L。AO/EB染色验证IC50真实可靠。结论 SW1900及Capan-2细胞可作为盐酸吉西他滨及替吉奥的对照,建立细胞模型,对药物进行体外筛选,为临床利用该技术进行病人肿瘤药物筛选提供一个参考,具有一定的借鉴意义。     

基于实时细胞分析技术检测前列腺癌细胞药物敏感性

目的基于实时细胞分析技术发展,以更加简便稳定的方法进行药物敏感性评估,为前列腺癌临床治疗提供参考。方法选取VCa P、DU145、PC-3、PC-3M-2B4和PC-3M-IE8五株人前列腺癌细胞,选用多西他赛、卡巴他赛和醋酸阿比特龙三种前列腺癌治疗药物,分别梯度浓度给药,利用RTCA检测给药前后的细胞生长情况,确定药物对前列腺癌细胞的半抑制浓度(IC50)。结果多西他赛对VCa P、DU145、PC-3、PC-3M-2B4、PC-3M-IE8五种细胞系24 h的IC50分别为8.81 nmol/L、11.61 nmol/L、1.78 nmol/L、1.44 nmol/L、8.69 nmol/L。卡巴他赛24 h的IC50依次为3.73 nmol/L、3.96 nmol/L、10.41 nmol/L、5.43 nmol/L、7.37 nmol/L。醋酸阿比特龙24 h的IC50依次为8.34μmol/L、8.60μmol/L、24.20μmol/L、8.59μmol/L、13.21μmol/L。结论 PC-3M-2B4及DU145、VCa P及PC-3可作为多西他赛、卡巴他赛及醋酸阿比特龙的对照,建立体外筛选药物的细胞模型,为临床推广提供参考。     

Dkk3 过表达改善阿尔茨海默症小鼠的老年斑、认知障碍和脑部糖代谢

目的：Dkk3 是WNT 信号通路的调节蛋白,主要在小鼠和人的心脏及脑组织中表达。前期研究发现,Dkk3 在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）小鼠模型及AD 病人脑组织中表达显著降低。而以往研究报道,在AD 疾病条件下,WNT 信号通路中某些关键成分会下调,并与AD发生发展相关。然而,Dkk3 如何作用于WNT 信号,以及Dkk3 对于AD 的调节作用和分子机制尚不清楚。因此本研究拟利用已经建立的脑组织特异的Dkk3 转基因小鼠和APPswe/PSΔE9 双转基因AD 模型小鼠,探究Dkk3 对AD 的调节作用及其分子机制。方法：RT-PCR 法克隆小鼠Dkk3基因cDNA,将该基因插入PDGF 启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dkk3转基因小鼠。PCR 法鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot 检测Dkk3 蛋白表达水平,确定Dkk3高表达首建鼠。Western blot 和免疫荧光方法观察Dkk3 于AD 小鼠脑组织中的表达;开放旷场和Morris 水迷宫检测小鼠自主行为和认知功能改变;硫磺素荧光染色和Aβ抗体免疫荧光染色观察小鼠脑组织老年斑病理变化,Western blot 检测Aβ单体、二聚体表达水平;PET/CT 检测小鼠脑部糖摄取的改变;Glut1 抗体免疫荧光染色观察小鼠脑组织葡萄糖转运蛋白水平改变;Western blot 检测Dkk3 蛋白表达水平、tau 过度磷酸化、WNT 的信号通路关键分子的改变。结果：建立了脑组织特异表达的Dkk3 转基因小鼠品系,同时通过杂交获得了Dkk3×APPswe/PSΔE9 小鼠。免疫荧光显示Dkk3 在小鼠脑皮质、海马等脑区神经元中表达,星形胶质细胞中不表达。Dkk3 在AD 小鼠和AD 病人脑组织中均表达下调;Dkk3 转基因表达改善AD 小鼠的探究行为异常和认知功能缺陷;Dkk3 转基因表达可导致AD 小鼠脑内Aβ产量下降,老年斑大小、数量和沉积面积减少;Dkk3转基因表达增强AD 小鼠脑部糖摄取,增加葡萄糖转运蛋白Glut1 的表达;Dkk3 转基因表达抑制GSK-3β活性、增加PKCβ1 磷酸化水平。AD 病人脑组织中也可见GSK-3β活性增强、PKCβ1 磷酸化水平下降。结论：Dkk3 是一个WNT 通路的激动剂,DKK3 转基因表达补偿了AD 小鼠脑组织中的Dkk3 表达下调,逆转了WNT 信号下调,一定程度上延缓了AD 的病理发展进程,改善了认知功能,提示Dkk3 可成为AD 治疗的一个潜在新靶点。