热休克蛋白70对脑缺血性损伤的神经保护研究进展

缺血性脑血管病是严重威胁人类健康的常见病和多发病，在成人中患病率、病死率和致残率都较高。虽然对其发病机制的了解越来越深入，但目前仍缺乏有效的治疗方法。近来研究发现，脑缺血性损伤发生后除了引起一系列细胞分子水平上的反应导致损伤外，机体还启动内源性保护机制，促进某些特殊蛋白质的合成。     

PFT-α对脑缺血后神经干细胞移植中PUMA的调控研究

目的探索p53抑制剂(PET-α)对脑缺血后神经干细胞(NSCs)中p53下游促凋亡基因(PuMA)的表达影响。方法利用SD仔鼠分离NSCs,原代及传代培养,经氧糖剥夺(OGD)处理6 h后分为OGD+二甲基亚砜(DMSO)组和OGD+PFT-α组,采用免疫印迹技术比较2组p53蛋白及PUMA的表达变化。体内实验中采用Longa法建立经CT证实的大脑中动脉栓塞模型大鼠48只,随机分为PFT-α+NSCs移植组(n=24)和DMSO+NSCs移植组(n=24);采用免疫荧光技术检测不同移植组中PUMA的表达。结果 (1)体外实验中氧糖剥夺6 h后OGD+PFT-α组中p53蛋白入核水平下调,胞浆内表达上调,而OGD+DMSO组主要表达位于胞核;PUMA的表达水平明显低于OGD+DMSO组(P<0.05);(2)体内实验中,与DMSO+NSCs组相比,PIT-α+NSCs移植组中PUMA表达阳性的细胞明显减少[(38.9±4.3)%vs.(29.4±5.6)%,P<0.01]。结论 PFT-α与神经干细胞联合应用后,可明显抑制PUMA的表达,这可能是PFT-α促进移植后神经干细胞在脑缺血区存活的重要机制。     

葛根素对成年大鼠创伤性脑损伤神经细胞的保护作用

目的 探讨葛根素对成年大鼠创伤性脑损伤神经细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法 不同浓度葛根素作用于创伤性脑损伤神经细胞，通过病理学检查、Tunel法及免疫组织化学法检测神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 葛根素作用脑损伤神经细胞7天后，以浓度效应关系改善创伤性脑损伤神经细胞的病理改变，减轻细胞凋亡程度，增加Bcl-2的表达，降低Bax／Bcl-2比率，但不影响Bax的表达。结论 葛根素对创伤性脑损伤神经细胞具有保护作用，且呈剂量依赖性，其机制可能与葛根素抗细胞凋亡，增加Bcl-2的表达有关。     

miR-27b影响β-catenin／Tcf-4通路调控U87胶质瘤细胞生物学行为

目的研究miR-27b在胶质瘤细胞系U87中的表达、功能及作用机制。方法在多个胶质瘤细胞系及胶质瘤标本中检测miR-27b的表达;利用反义miR-27b转染U87,下调rniR-27b的表达,应用流式细胞术和MTT法,评价细胞生长、增殖、凋亡及周期变化：采用荧光素酶法及Western印迹法检测miR-27b作用的初步机制及通路蛋白的变化。结果miR-27b在胶质瘤细胞系及胶质瘤标本中均呈高表达;转染反义miR-27b后,表达降低86％,MTT法显示转染反义miR-27b后细胞生长受到抑制且凋亡细胞增加13％;荧光素酶实验结果显示：miR-27b发挥作用可能与B—catenin／Tcf-4通路相关,Western印迹法显示通路相关蛋白STAT3、c-myc和CyclinD1在转染反义miR-27b后表达下降。结论miR-27b可促进人脑胶质瘤细胞生长、增殖,具有原癌基因的作用,其发挥作用可能与β-catenin／Tcf-4通路密切相关。     

骨髓基质细胞静脉移植对脑创伤大鼠神经功能恢复和细胞凋亡的影响

目的：观察骨髓基质细胞移植于创伤性脑损伤大鼠模型后不同时问。对神经功能恢复和神经细胞凋亡的影响，分析骨髓基质细胞静脉移植治疗脑损伤的可行性。方法：实验于2004-10／2005—05在哈尔滨医科大学第一临床医学院中心实验室完成。选取清洁级3月龄Wistar大鼠72只，随机分为4组：细胞移植组30只，损伤对照组30只，正常对照组6只。假伤组6只。细胞移植组和损伤对照组根据处死时问不同分为术后3，7，14，21，28d5个时间点，每个时间点6只／组。①通过密度梯度离心和贴壁筛选法分离纯化骨髓基质细胞，细胞传至第3代用于实验。②细胞移植组和损伤对照组采用改进Feeney’s自由落体装置建立大鼠刨伤性脑损伤模型，正常对照组不做处理，假伤组仅开骨窗不至伤。③大鼠骨髓基质细胞体外纯化、扩增并经Brdu标记后，细胞移植组无菌条件下将总体积1mL的3&;#215;10^6个骨髓基质细胞经大鼠尾静脉注入，其余3组注入等量生理盐水。通过神经运动功能评分观察移植后大鼠神经行为学改善情况，通过组织学方法观察移植骨髓基质细胞脑内存活迁移情况和对损伤皮质细胞凋亡影响情况。结果：实验选用大鼠72只，全部进入结果分析。①神经运动功能评分情况：细胞移植组于术后7，14，21，28d分别为（15．3&;#177;2．7），（16．4&;#177;2．5），（16．9&;#177;2．1），（18．3&;#177;1．7）分，明显高于损伤对照组（t=3．15，2．96，2．25，2．92，P均〈0．05）。②细胞移植组Brdu免疫组化染色观察：除移植后28d外，其他各时问点损伤皮质周边区均发现阳性细胞，阳性细胞为呈棕色，圆形或椭圆形的单核细胞。③术后不同时问各组原位末端标记检测法染色观察结果：正常对照组和假伤组镜下观察未见典型凋亡细胞，偶可见非特异性淡染细胞散在分布；细胞移植和损伤对照各时间点除移植后28d外，在伤侧皮质区均可见有较多的凋亡细胞。④骨髓基质细胞移植后不同时问点伤侧皮质神经细胞凋亡的变化：与损伤对照组比较，细胞移植组伤侧大脑皮质神经细胞凋亡率在移植后7，14，21d明显降低[（17．26&;#177;2．71），（11.78&;#177;2．52）；（12．76&;#177;1．52），（7．66&;#177;1.54）；（7．40&;#177;1．22），（3．32&;#177;1．51）％；t=3．62，5．78，5．14，P均〈0．01]。结论：静脉移植骨髓基质细胞能够减少脑损伤后细胞的凋亡，从而明显促进脑损伤大鼠神经功能的恢复。提示骨髓基质细胞静脉移植治疗脑损伤具有一定的可行性。     

抑制 p53 通路促进移植神经干细胞在脑缺血区的存活简

目的探讨一种提高移植神经干细胞（neural stem cells,NSC）在脑缺血区存活的方法。方法原代培养胚胎NSC并鉴定。采用改良Longa线栓法成功制作60只大鼠大脑中动脉阻塞模型,随机分为3组：对照组（n=12）、NSC移植组（n=24）和NSC＋P53抑制剂（pifithrin—α,PFT—α）移植组（n=24）。以上3组在脑梗死模型建立24h后,分别于脑内特定部位注射等量DMEM／F12培养液、NSC悬液和NSC＋PFT-α悬液。细胞移植12h、24h和7d后行免疫荧光染色,检测P53蛋白表达和移植NSC的存活情况。结果移植后12h,NSC移植组P53蛋白主要表达在移植细胞的细胞核,而NSC＋PFT-α移植组P53蛋白的表达主要位于移植细胞的细胞质。移植后7d,NSC＋PFT-α移植组NSC的存活数为（18．20±2．69）／高倍镜视野,NSC移植组为（13．06±3．20）／高倍镜视野,两组间比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论NSC移植联合PFT-α对提高移植细胞的存活率有重要意义。     

干细胞治疗缺血性脑卒中移植策略的研究进展

干细胞移植治疗缺血性脑卒中是一种很有前景的治疗方法。然而,脑梗死后局部缺血、缺氧的微环境和有害因子的激活等,均不利于移植干细胞的存活,因而影响其治疗效果。近年来,为了提高干细胞移植治疗缺血性脑卒中的效果,人们在移植策略上不断探索,本文就该方面内容作一综述。     

骨髓基质细胞静脉移植对脑创伤大鼠神经功能恢复和细胞凋亡的影响

目的:观察骨髓基质细胞移植于创伤性脑损伤大鼠模型后不同时间,对神经功能恢复和神经细胞凋亡的影响,分析骨髓基质细胞静脉移植治疗脑损伤的可行性。方法:实验于2004-10/2005-05在哈尔滨医科大学第一临床医学院中心实验室完成。选取清洁级3月龄Wistar大鼠72只,随机分为4组:细胞移植组30只,损伤对照组30只,正常对照组6只,假伤组6只。细胞移植组和损伤对照组根据处死时间不同分为术后3,7,14,21,28d5个时间点,每个时间点6只/组。①通过密度梯度离心和贴壁筛选法分离纯化骨髓基质细胞,细胞传至第3代用于实验。②细胞移植组和损伤对照组采用改进Feeney’s自由落体装置建立大鼠创伤性脑损伤模型,正常对照组不做处理,假伤组仅开骨窗不至伤。③大鼠骨髓基质细胞体外纯化、扩增并经Brdu标记后,细胞移植组无菌条件下将总体积1mL的3×106个骨髓基质细胞经大鼠尾静脉注入,其余3组注入等量生理盐水。通过神经运动功能评分观察移植后大鼠神经行为学改善情况,通过组织学方法观察移植骨髓基质细胞脑内存活迁移情况和对损伤皮质细胞凋亡影响情况。结果:实验选用大鼠72只,全部进入结果分析。①神经运动功能评分情况:细胞移植组于术后7,14,21,28d分别为(15.3±2.7),(16.4±2.5),(16.9±2.1),(18.3±1.7)分,明显高于损伤对照组(t=3.15,2.96,2.25,2.92,P均<0.05)。②细胞移植组Brdu免疫组化染色观察:除移植后28d外,其他各时间点损伤皮质周边区均发现阳性细胞,阳性细胞为呈棕色,圆形或椭圆形的单核细胞。③术后不同时间各组原位末端标记检测法染色观察结果:正常对照组和假伤组镜下观察未见典型凋亡细胞,偶可见非特异性淡染细胞散在分布;细胞移植和损伤对照各时间点除移植后28d外,在伤侧皮质区均可见有较多的凋亡细胞。④骨髓基质细胞移植后不同时间点伤侧皮质神经细胞凋亡的变化:与损伤对照组比较,细胞移植组伤侧大脑皮质神经细胞凋亡率在移植后7,14,21d明显降低犤(17.26±2.71),(11.78±2.52);(12.76±1.52),(7.66±1.54);(7.40±1.22),(3.32±1.51)%;t=3.62,5.78,5.14,P均<0.01犦。结论:静脉移植骨髓基质细胞能够减少脑损伤后细胞的凋亡,从而明显促进脑损伤大鼠神经功能的恢复。提示骨髓基质细胞静脉移植治疗脑损伤具有一定的可行性。