蒙药朱日亨滴丸源头把控——基于Q-Exactive高分辨质谱结合指纹图谱技术的蒙药广枣药材质量评价研究

目的 运用Q-Exactive高分辨质谱结合指纹图谱评价不同批次广枣药材质量,为朱日亨滴丸源头把控提供参考。方法 采用Agilent ZORBAX ECLIPSE XDB-C18色谱柱,以0.1%甲酸水-甲醇梯度洗脱30min,柱温为30℃,流速为1.0ml.min^-1。采用电喷雾(ESI)质谱离子源,在正离子与负离子模式下采集数据,检测范围为m/z 100-1500。依据精确质量数以及二级碎片离子,结合标准物质及相关数据库信息,对蒙药广枣药材主要化学成分进行定性研究。同时测定10批广枣药材,应用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)”建立广枣指纹图谱,并对各共有峰进行化学成分归属,对鞣花酸进行定量,评价各批次药材的质量。结果 鉴定出广枣中的37种化合物,并以鞣花酸为参照物,建立广枣药材指纹图谱,10批次广枣药材相似均在0.90以上。不同批次广枣药材鞣花酸含量差异明显。结论 建立基于Q-Exactive高分辨质谱结合指纹图谱技术的蒙药广枣药材质量评价研究方法为广枣药材质量控制提供参考,也为主日亨滴丸源头保证提供科学依据。     

基于脂质组学技术发现冠心病的脂质标志物和治疗靶点

冠心病是全球第一的死亡原因,其主要特征是冠状动脉粥样硬化使管腔狭窄或闭塞导致心肌缺血、缺氧或坏死而引发的心脏病,冠心病与脂质调节异常、慢性炎症、内皮功能障碍等密切相关。目前用于诊断冠心病的心肌酶和高、低密度脂蛋白等只能部分解释冠心病的风险。尚不能有效地检测冠心病患者早期的高危因素,迫切需要新的技术发现与冠心病密切相关的疾病标志物。脂质分子是心肌细胞结构重要组成部分,在心脏功能方面扮演重要角色。脂质组学是高通量研究脂质组成的一门新兴学科。近年脂质组学研究显示,特定种类的脂类,如神经酰胺、鞘氨醇、溶血磷脂酸、氧化脂质等,与冠心病的临床分型及特征相关。此外动物模型中心脏、脂肪、肝脏等相关组织样本脂质组学研究成果也为脂质生物标志物提供了新的信息,脂质组学技术正越来越多地被用于评估冠心病的风险等相关研究。本文对利用脂质组学技术探究冠心病脂质小分子标志物以及相关治疗靶点、药物研发策略进行综述。     

山奈酚、芹菜素、大豆苷元对H2O2诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的 观察不同种类黄酮类化合物山萘酚(KA)、芹菜素(AP)、大豆苷元(DA)对H2O2诱导的心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响.方法 取Wistar大鼠新生乳鼠心肌细胞做原代培养,MTT法检测几种黄酮的细胞毒浓度;H2O2(100μmol/L)诱导心肌细胞凋亡;Tunel法、流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组化方法测定Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达.结果 MTT法显示各组药物在5、30μmol/L没有显著的细胞毒作用.KA、AP、DA均显著减小H2O2诱导的细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达,增加Bcl-2/Bax比值(P＜0.05),其中KA效果最显著(P＜0.01).结论 这些黄酮类化合物有抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡作用,其机制与其抗氧化活性有关,可能是通过调节Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达,起到心肌细胞保护作用,其中KA效果最好.     

不同类型黄酮对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的：观察不同类型的黄酮类化合物红花黄色素A（查儿酮）、高良姜素（黄酮醇）、陈皮素（二氢黄酮）对H2O2诱导的心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响。方法：取Wistar大鼠乳鼠心肌细胞做原代培养，制备H2O2诱导的心肌细胞凋亡模型。MTT法检测3种黄酮类化合物适宜的实验浓度，TUNEL法、流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫组化法测定Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果：MTT法显示各组药物只有5μmol／L组与空白组相比差异无统计学意义（P〈0．05）。仅30μmol／L组细胞活力显著高于模型组，随后实验选用30μmol／L作为试验浓度。TUNEL法检测细胞凋亡率，除红花黄色素A组外各药物组细胞凋亡率均显著小于模型组（P〈0．05）。流式细胞术检测显示，各药物组均能降低细胞凋亡率和坏死率。免疫组化显示，Caspase-3蛋白阳性表达除红花黄色素A组（与空白对照组比较P〉0．05）外各药物组均显著小于模型组（P〈0．05）。Bcl-2／Bax比值除红花黄色素A组（与正常组比较P〉0．05）外各药物组均显著高于模型组（P〈0．05）。TUNEL法检测凋亡率、Caspase-3蛋白阳性表达、Bcl-2／Bax比值均显示陈皮素和高良姜素组间无统计学差异（P〉0．05）。结论：陈皮素和高良姜素抑制100tnnol／LH2O2诱导新生乳鼠心肌细胞凋亡的效果相当，可调节Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达，起到保护心肌细胞作用；而红花黄色素A对细胞坏死的影响可能比对细胞凋亡的作用更强。     

荜茇提取物对地鼠脂质代谢紊乱的影响

目的研究荜茇提取物对高血脂症地鼠血脂的影响。方法给予高脂饲料建立金黄地鼠高血脂模型,将动物随机分为正常对照组、模型组、辛伐他汀组、荜茇提取物组、去胡椒碱荜茇提取物组,除正常对照组外其余各组均给予高脂饲料喂养2或4周,每周测量体质量,分别在第2周末和第4周末用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、肝脏指数、肝脂质TC和TG。结果与正常对照组比较,模型组TC,TG和LDL显著增加(P<0.01),HDL显著降低;与模型组比较,荜茇提取物组在第2周和第4周均能显著降低TC,TG和LDL,显著升高HDL(P<0.05或P<0.01);去胡椒碱荜茇提取物组在第2周能显著降低LDL,升高HDL,在第4周有降低TC,TG,LDL的趋势,但差异无统计学意义,能显著升高HDL(P<0.05);各受试物组动物在前两周体质量显著低于模型组,而后2周差异无统计学意义;4周时荜茇提取物组能显著降低肝脂质TC,TG;各受试物组均能显著降低肝指数。结论荜茇提取物可显著改善高血脂症地鼠血脂水平,其中胡椒碱为其主要有效成分,且与其他各成分有协同降血脂作用。     

蒙药朱日很滴丸提取工艺的正交实验优选

目的优选朱日很滴丸的最佳提取工艺。方法以羟基红花黄色素和没食子酸的含量为评价指标,以醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数为影响因素,正交实验优选醇提取工艺;以提取率为指标,以萃取压力,萃取温度,萃取时间和分离温度为影响因素,正交实验优选CO_2超临界萃取工艺。结果朱日很滴丸的最佳醇提取工艺条件为加入10倍量70%的乙醇,提取两次,每次1h;最佳CO_2超临界萃取工艺条件为萃取压力25MPa,萃取温度40℃,萃取时间2h,分离温度35℃。结论该方法稳定可行,可用于朱日很滴丸处方中各味药材的提取。     

不同产地寒水石中重金属及有害元素的含量研究

目的:建立寒水石中重金属及有害元素的测定方法,并对不同产地南、北寒水石中重金属及有害元素进行初步的比较研究。方法:样品经湿法消解后,采用原子荧光法测定寒水石样品中砷、汞;原子吸收分光光度法测定铅、镉、铜。同时对相应方法学进行考察。结果:寒水石中5种有害元素回收率在90%～104.5%,精密度<2%。铅、镉、铜、砷、汞的检出限分别为0.2、0.06、0.50、1.25×10-3、1.43×10-3μg.g-1。参照2010年版《中国药典》一部矿物药石膏项下标准,寒水石样品中仅砷含量有10.34%超标;参照2010版植物药标准,南寒水石汞含量3.45%超标,南、北寒水石镉含量13.79%超标;南、北寒水石重金属、有害元素分布没有明显规律。结论:本方法快捷、准确,灵敏度高,为进一步研究寒水石中有害元素成分及完善其质量控制标准提供可参考的依据。     

离体外翻肠囊法研究蒙药塔布森-2中8个苯丙素类成分的肠吸收特性

目的：考察蒙药塔布森-2（tabson-2 decoction,TBD）中隐绿原酸、绿原酸、新绿原酸、异绿原酸C、1,5-二咖啡酰奎宁酸、咖啡酸、3-羟基肉桂酸、二氢咖啡酸8个苯丙素类成分的肠吸收动力学特性。方法：采用大鼠外翻肠囊实验,利用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用仪（UPLC-MS/MS）检测肠吸收液中8个化学成分的含量,计算各成分在各肠段的累计吸收量、吸收速率常数和表观渗透系数。结果：在同一浓度下8个成分的最佳吸收部位基本为空肠或十二指肠,吸收方式为主动转运和被动扩散相结合。结论：肠道对TBD中8个苯丙素类成分均有肠吸收,空肠和十二指肠可能是其主要吸收部位。本研究可为TBD的药物临床开发提供一定的科学依据。     

蒙药塔布森-2中9种苯丙素类成分在Caco-2细胞中的吸收特性研究

目的 研究蒙药塔布森-2(Tabson-2 decoction,TBD)中苯丙素类成分在Caco-2细胞中的吸收特性,初步阐明TBD的口服吸收机制。方法 采用Caco-2细胞单层细胞模型,通过UPLC-MS/MS分析TBD在Caco-2细胞中的摄取成分,并建立UPLC-MS/MS分析方法测定TBD中吸收最好的9种苯丙素类成分原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸C、咖啡酸、二氢咖啡酸、3-羟基肉桂酸在Caco-2细胞中的含量,分别考察时间、浓度和P糖蛋白抑制剂对各成分的吸收影响。结果 研究发现咖啡酸、二氢咖啡酸的总摄取量在0~180 min为上升趋势,未呈现饱和;3-羟基肉桂酸在90 min左右吸收恒定趋于饱和;隐绿原酸、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸C、新绿原酸、绿原酸、原儿茶酸的摄取量约从90 min开始,随时间的增加先下降后上升。与苯丙素类成分相比,加入P-糖蛋白抑制剂维拉帕米及环孢菌素A后对二氢咖啡酸的吸收产生了影响,说明二氢咖啡酸是P-糖蛋白底物。结论 TBD主要苯丙素类成分进入Caco-2细胞以被动扩散为主,主动转运为辅,且除二氢咖啡酸外其他8个成分的吸收过程不受P-糖蛋白的外排作用影响。     

蒙药方剂朱日亨滴丸化学成分鉴定及归属研究

目的：采用高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive-MS/MS)对朱日亨滴丸及其中间体中的化学成分进行快速鉴定和归属。方法：选用ACE EXCEL3 C18-PFP 色谱柱(3μm,100mm×3mm),流动相为含0.2%甲酸的甲醇(A)-0.2%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,流速0.3mL.min^-1,柱温35℃。正、负离子模式采集数据,质谱扫描范围为m/z 100～1000。通过文献检索、中药材网站收集朱日亨滴丸原药材中化学成分,自建化学成分数据库。根据精确相对分子质量、二级质谱裂解碎片、对照品及文献比对,对朱日亨滴丸及中间体中化学成分进行鉴定。结果：共识别和鉴定了朱日亨滴丸中130个成分,包括18个苯丙素、24个木脂素、26个黄酮、10个香豆素、13个环烯醚萜、15个有机酸、14个酚酸、8个单萜、2个其他类成分。结论：建立的HPLC-Q-Exactive-MS/MS方法快速、准确。适用于朱日亨滴丸及其中间体的定性鉴别。为该药的质量体系建立和药效物质发现奠定了基础。