刚地弓形虫多表位抗原基因在转基因番茄中的表达研究

目的 获得稳定表达弓形虫多表位抗原基因（Tg-MAG）的转基因番茄植株。 方法 用植物组成型启动子E35S、番茄果实特异性E82.2启动子以及E35S-E81.1复合式启动子驱动弓形虫Tg?-MAG的植物表达载体pC35MG、pCE2MG与pC35E1MG，以农杆菌介导的T-DNA转化法转化番茄子叶和下胚轴；经芽诱导、伸长以及生根的连续性抗性筛选和培育，获得Tg-MAG转基因番茄植株，练苗后移栽花盆中培育至开花、结果。用PCR、RT-PCR、蛋白质印迹（Western blotting）分别对Tg-MAG转基因植株进行DNA、RNA、蛋白水平的鉴定。 结果 获得的Tg-MAG转基因番茄植株经PCR和RT-PCR鉴定，得到预期360 bp的Tg-MAG片段，经Western blotting筛选获得能正确表达预期相对分子质量（Mr）为11 900 的Tg-MAG重组蛋白，且８株具有免疫反应性，其中有２株于番茄果实中所表达的重组蛋白能与抗弓形虫速殖子主要表面抗原１（SAG1）单克隆抗体K7H3发生强免疫反应。 结论 获得Tg-MAG转基因番茄株系，在其果实中成功表达具有良好免疫反应性的Tg-MAG重组蛋白。