微流控芯片电泳测定血清小而密低密度脂蛋白及临床应用价值

目的建立微流控芯片电泳分离血清小而密低密度脂蛋白(sdLDL)的方法并探讨其临床应用价值。方法利用自制的微流控芯片,选择Tricine缓冲液为电泳缓冲液,SDS作为添加剂,电泳分离经硝基苯并噁二唑-C6-酰基鞘胺醇(NBD C6-ceram-ide)预染的脂蛋白,激光诱导荧光技术检测。结果大而轻低密度脂蛋白(lLDL)、sdLDL、极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)在3 min内得到有效分离。冠心病(CHD)组,sdLDL检出率显著高于正常对照组(P<0.01)。CHD患者血清经连续3次分析,sdLDL出峰时间和峰面积相对标准差分别为2.18%和2.94%。sdLDL阳性组TG水平增高,HDL-C水平降低,均与阴性组存在显著差异(P<0.01和P<0.05)。CHD患者sdLDL与三酰甘油(TG)、载脂蛋白B(apoB)呈正相关(r=0.82和0.79,P<0.0001)。结论微流控芯片电泳可望成为sdLDL的常规分析手段,用于CHD危险性的评估。     

基于纳米金探针和蛋白芯片高灵敏检测肺癌CEA和CYFRA21-1标志物

目的 构建基于纳米金探针和蛋白芯片的快速、多肿瘤标志物高灵敏检测体系.方法 将待检测的肿瘤标志物捕获抗体(捕获待测抗原)结合在醛基化修饰的玻片上;用检测抗体制备纳米金探针;经过免疫反应形成三明治夹心结构(蛋白芯片-目标蛋白-纳米金探针).利用纳米金沉积的方法进行染色,通过肉眼或显微镜观察显色结果.结果 该蛋白检测体系在1h内可检测两种肿瘤标志物,其中CEA可检测到最低浓度为45 pg/mL,CYFRA21-1可检测到90 pg/mL,与传统的酶联免疫吸附法(ELISA)相比,检测灵敏度大大提高.并利用此体系,检测肺癌患者及正常人血清,结果与临床所用电化学分析方法一致.结论 该检测体系操作简单、方便、快速,同时具有高灵敏度、多指标联合检测等优点,在临床蛋白检测中具有重要的价值和应用前景.     

微流控芯片电泳在尿蛋白分离中的应用

目的:将微流控芯片电泳用于临床尿蛋白分离的验证试验,评价其在临床上的应用价值。方法:用微流控芯片电泳对30例尿蛋白定性试验为阴性的对照组和70例尿蛋白定性在 以上的病例组进行检测,以白球蛋白的峰面积比值判断蛋白尿的选择性,并与美国Helena琼脂糖凝胶电泳结果比较。结果:30例对照组未检出蛋白峰,70例病例组除2例外均检出蛋白峰,其中选择性蛋白尿16例,非选择性蛋白尿50例,溢出性蛋白尿2例,与美国Helena琼脂糖凝胶电泳结果100%相符,与临床诊断符合率为97.14%。结论:该法用于临床尿蛋白分离的验证试验,效果很好,适于在中小医院普遍推广。     

集成毛细管电泳芯片分离尿蛋白条件的初步优化

目的:探讨集成毛细管电泳芯片快速分离尿蛋白条件的初步优化。方法:考察了分离电压(1200～2000V)、进样时间(10～30s)及乙胺浓度(0.5～2%(v/v))对尿蛋白分离的影响。结果:以75mmol/L pH10.3硼酸盐缓冲液含9.73μmol/L乳酸钙、1%(v/v)乙胺为电泳缓冲液,在以500V的进样电压进样15s、分离电压1500V条件下,电泳分离尿蛋白能分出更多蛋白峰。结论:通过优化可以有效地提高电泳芯片分离尿蛋白的效果。     

一种基于酶标纳米金探针的蛋白质检测方法

目的研究酶标纳米金探针的制备条件,并构建利用酶标纳米金探针检测蛋白质的检测体系,实现对蛋白质的高灵敏度检测。方法首先标记捕获抗体的磁珠探针、抗原及标记检测抗体和辣根过氧化物酶（Streptavidin—peroxidase,SA．HRP）的纳米金探针（AuNP probes）进行免疫反应形成三明治结构,然后利用磁力分离器收集三明治结构,再加入四甲基联苯胺（Tetrabenzidine,TMB）溶液发生酶促显色反应,最后在450nm处进行分光光度检测,从而间接测定蛋白质含量。结果通过一系列优化实验建立检测体系,具体为：纳米金探针重悬液确定为50mmol Tris（pH7．8,1．25％蔗糖,0．2％BSA,0．05％PEG,0．05％PVP,0．15％Tween20）：检测体系中纳米金的最适加入量为3μl;2步孵育最适时间依次为1h和45min。使用该方法检测并绘制癌胚抗原（CEA）标准曲线,表明CEA浓度在250pg／ml—25ng／ml区间时线性关系良好,R^2为0．991。通过灵敏度实验表明该检测体系的最低检测灵敏度为25pg／ml,而传统ELISA方法的检测灵敏度仅为1．65ng／ml。结论酶标纳米金探针检测体系实现了通过普通光学仪器进行高灵敏度蛋白质检测的目标,是一种很有发展前景的蛋白质检测技术。     

针型神经微电极制作技术进展及其在脑机接口中的应用

近年来,植入式神经微电极已成为神经科学和微电子学一个新的研究热点.本文对植入式神经微电极中最常用的针型微电极制作技术的发展、研究现状以及在脑机接口中的应用进行了较为详细地综述,并讨论了各种制作方法的特点和局限,展望了该领域进一步研究的方向.     

毛细管电泳法分离血清中乳酸脱氢酶同工酶

目的利用还原型辅酶I（NADH）在340nm波长处特异性吸收峰，建立用毛细管区带电泳在线检测人血清中乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的方法。方法实验中采用未涂层毛细管，长60cm，内径75μm，pH9．4（23℃）二氨基二甲基1，3丙二醇（AM2P）缓冲液含20mmol/L氧化型辅酶I（NAD^＋）、51，6mmol/L乳酸锂。结果在25min内完成电泳分离，乳酸脱氢酶同工酶1（LDH1）、乳酸脱氢酶同工酶5（LDH5）纯品各自均可得到较好峰形，而且LDH1、LDH2纯品的混合物亦可得到完全分离，在分析正常人血清与肝癌患者血清时，其结果与美国Helena公司REP全自动琼脂糖电泳结果一致，取得满意效果。结论该法快速、低耗，具有较好的推广应用价值。     

纳米金标记p53抗体探针在p53蛋白检测中的应用

目的利用纳米金粒子静电吸附抗体和与巯基修饰的寡核苷酸以Au-S键共价结合的特点制备多功能纳米金探针,结合免疫磁珠探针技术建立一种新的、高灵敏的免疫检测体系。方法纳米金探针表面标有两种蛋白分子和一种寡核苷酸链:检测抗体(免疫检测中结合待测抗原);辣根过氧化物酶(HRP,信号扩增作用);巯基化DNA链(作为"桥梁"连接纳米金颗粒和HRP分子)。捕获抗体(捕获待测抗原蛋白)修饰的微型磁珠探针作为p53蛋白检测固相支撑物。目标蛋白p53存在时,通过抗原抗体反应形成三明治结构(磁珠探针—目标蛋白—纳米金探针)。结果最佳条件下,该蛋白检测体系可检测到最低浓度为30 pg/ml的p53蛋白,与酶联免疫吸附剂测定(ELISA)方法相比,检测效果较好。结论该法操作过程简单,灵敏度高、重复性较佳,费用低廉,在临床微量蛋白检测中具有重要的应用价值。     

两种纳米金标记p53抗体探针的制备、表征和性质研究

目的制备IgG-Au-HRP和IgG-Au-DNA-HRP两种纳米金标记p53抗体探针,并对其进行生物学特征表征和性质研究。方法利用纳米金粒子与蛋白质非共价吸附和与巯基修饰的寡核苷酸以Au-S键共价结合的特点,将辣根过氧化物酶(HRP)直接或通过寡核苷酸链间接标记在纳米金表面,制备两种多功能纳米金生物探针(IgG-Au-HRP和IgG-Au-DNA-HRP探针);应用透射电镜、紫外-可见光光谱等对纳米金探针性能进行表征,对纳米金探针表面HRP酶活性进行分析,并通过酶免疫标记技术(enzyme linked immuncsorbent assay,ELISA)优化探针制备条件和比较两种探针标记效率。结果①两种新型探针具有良好的单分散性,大小均一,粒径约10nm;②p53蛋白检测效果对IgG-Au-HRP和IgG-Au-DNA-HRP探针制备条件优化结果表明:制备IgG-Au-HRP探针时,HRP分子和p53抗体的最佳比例为10:1;制备IgG-Au-DNA-HRP探针时,DNA和p53抗体的最佳比例为2.5:1;③HRP分子定量检测显示:一个IgG-Au-HRP探针可标记HRP数量约11个,IgG-Au-DNA-HRP探针可标记HRP数量为20个;④两种探针结合ELISA法初步检测p53蛋白判定IgG-Au-DNA-HRP探针比IgG-Au-HRP探针检测蛋白灵敏度高。结论两种新型纳米金探针制备简单,可作为一种新型探针应用于微量蛋白的高灵敏检测。     

聚二甲基硅氧烷微流控芯片电泳的临床应用研究

目的 探讨聚二甲基硅氧烷(PDMS)微流控芯片电泳技术的临床应用价值.方法 利用模塑法制作PDMS微流控芯片,选择二胺基二苯甲烷(DDM)与羟丙基纤维素(HPC)对PDMS进行修饰,有效消除蛋白在芯片壁面上的吸附.PDMS微流控芯片电泳分离DNA标准品、PCR多重产物及血清脂蛋白.结果 10、20、50、100、200 bp的DNA片段得到了很好的基线分离及良好重现性,峰面积的相对标准偏差分别为4.8%、6.3%、5.9%、3.5%、3.4%.线粒体疾病患者的多重PCR产物片段165、266、378、881 bp在4 min内实现了基线分离.血清低密度脂蛋白亚型、小而密低密度脂蛋白(sdLDL)实现了快速检测,冠心病组血清sdLDL检出率与健康体检组差异有统计学意义(P<0.01).结论 PDMS微流控芯片电泳具有简单、快速、高效、低耗等特点,适合临床常规分析.