流式细胞术检测HLA-B27抗原在AS诊断中的应用

目的利用流式细胞术(FCM)检测不同患者T淋巴细胞表面HLA-B27抗原,与传统的血清法(微量淋巴细胞毒试验)比较,评价FCM检测HLA-B27在强直性脊柱炎(AS)诊断中的应用价值。方法采用荧光标记的HLA-B27单抗与T淋巴细胞表面的HLA-B27抗原结合,利用FCM专门分析软件测定HLA-B27-FITC平均荧光强度(FMI),从而间接定量HLA-B27表达情况,并采用血清法对118例AS患者标本进行HLA-B27检测。结果AS患者HLA-B27阳性率为88.9%(105/118),男女比例为5.25∶1,同其他各组比较均有较显著的差异(P<0.01);两种方法比较无明显差异(P>0.1)。结论利用FCM对疑为AS的患者进行HLA-B27抗原检测有助于AS的诊断,方法简便,稳定性好,重复性高,是目前较为理想的方法。     

《临床免疫学与免疫学检验》实验教学改革探讨

不断探索实验教学改革,是推进《临床免疫学与免疫学检验》教学改革的重要环节。作者揭示了临床免疫学检验实验教学中存在的一些问题,并从实验教学内容、实验准备、教学手段、考核方法等方面采取了一系列的改革措施,进而提高了《临床免疫学与免疫学检验》教学质量与水平,取得了良好的教学效果。     

pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒的构建及其在活细胞内的相互作用

目的构建pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察Olig2与Id4的相互作用。方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以新生大鼠脊髓RNA为模板,扩增Olig2和Id4基因,分别定向克隆到pBiFC-VN173和pBiFC-VC155载体中,获得pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒。对此2种质粒进行酶切鉴定、测序;用脂质体方法共转染pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4质粒到人结肠癌细胞系SW-1116细胞中,在荧光显微镜下观察Olig2与Id4之间的相互作用。结果通过酶切鉴定和测序表明成功构建了pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒;该质粒能够有效地共同转染到靶细胞,Olig2和Id4在靶细胞中能够高效表达,并可以相互结合出现BiFC荧光信号,且该信号主要分布于胞质中。结论成功构建了用于BiFC技术的真核表达载体,并在活细胞内检测到Olig2和Id4分子的相互结合。     

《流式细胞术》课程分层次教学探索与实践

目的:建立分层次《流式细胞术》教学模式,并评价其教学效果。方法:针对低年级本科生、研究生和继续教育学员等不同层次学生,在教学过程中采用不同的实验教学内容、方法和方案。各不同层次学生随机分成观察组和对照组实施教学,分析其学业成绩和问卷调查结果,评价教学效果情况。结果:实施《流式细胞术》分层次教学,3个层次的观察组学生在考试成绩、实践动手和创新能力3个方面均优于对照组（P<0.05~P < 0.01）。结论:分层次《流式细胞术》教学模式,为学生提供了符合自身条件和特点的学习条件,有效提高了不同知识背景学生群体的学习效果。     

临床免疫学与检验实验教学改革与实践

临床免疫学与检验是医学检验专业重要的专业课程之一,是一门理论与实践紧密结合、跨于基础医学和临床医学之间的桥梁学科.在原有实验教学模式基础上,变验证性实验为综合性实验,开设探索性实验,安排适当的课程临床见习和社区实践,改进考核方法,通过对实验课程的改革与实践,提高学生的综合分析和解决问题的能力以及临床应用和创新能力.     

流式细胞术在免疫学中的应用

流式细胞术是一项多学科知识综合应用的复杂技术,是以流式细胞仪为检测手段的新技术.与常规免疫学方法 相比,分析方法 简便、迅速、精确,直观性强,在免疫学领域有着广泛的应用.     

MiR-20b直接靶向3’-UTR调控HIF-1α表达

目的：探讨微小RNA-20b（microRNA-20b/miR-20b）是否直接靶向低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）信使RNA的3’-非编码区（3’-untranslated region,3’-UTR）调控其基因表达。方法：采用TargetScan和miRanda算法预测HIF-1α 3’-UTR区是否存在miR-20b的配对序列;构建并鉴定表达HIF-1α 3’-UTR的双荧光素酶基因报告系统（pmiR-RB-ReportTM-HIF-1α 3’-UTR）,将重组质粒（recombinant plasmid,RP）与mimics-miR-20b（M）或NC-miR-20b（N）共转染HeLa细胞,本研究共分为RP、RP+M、RP+N、P、P+M和P+N六组,24 h后检测各组双荧光素酶活性的比值。结果：HIF-1α 3’-UTR区存在miR-20b配对区域;成功构建了含HIF-1α 3’-UTR序列的双荧光素酶基因报告载体;重组质粒与mimics-miR-20b共转染的HeLa细胞荧光素酶活性明显低于其他对照组（P=0.022）。结论：miR-20b可以直接靶向结合HIF-1α 3’-UTR区负向调控其表达。     

急性肺损伤小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能降低

目的 探讨急性肺损伤（ALI）小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的变化及其影响因素。方法 昆明种小鼠随机分为正常对照组、ALI模型组,脂多糖经气道滴入激发构建ALI模型小鼠;通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞（AM）,流式细胞术及荧光显微镜观察ALI小鼠AM吞噬功能的变化;免疫印迹与ELISA检测ALI小鼠肺组织白介素-33（IL-33）的表达和分泌情况;ELISA检测不同浓度脂多糖刺激肺泡上皮细胞株MLE-12细胞IL-33分泌的情况;采用不同浓度的脂多糖和IL-33作用正常组AM,观察这些刺激因素对AM吞噬荧光微球的影响。结果 与正常小鼠AM（75.1%±3.0）%相比,ALI小鼠AM吞噬荧光微球百分率（57.0±4.3）%明显降低,但ALI小鼠肺组织IL-33的表达和支气管肺泡灌洗液中IL-33的分泌均明显升高（P<0.05）;脂多糖（100~1000 ng/mL）促进肺泡上皮细胞IL-33分泌增加（P<0.01）;脂多糖（10~500 ng/mL）和IL-33（100 ng/mL）均明显抑制了AM的吞噬功能（P<0.05）。结论 ALI小鼠AM吞噬功能降低,这可能是由于脂多糖直接刺激AM引起,或者脂多糖激发肺泡上皮细胞产生的预警素IL-33也可抑制AM吞噬功能。     

SLE病人外周血sCD28、sCD137水平及临床意义

目的探讨SLE病人血清可溶性T细胞共刺激分子sCD28、sCD137的水平及其与SLE病情活动的相关性。方法收集不同活动度的SLE病人及健康对照者外周血,分离血清,采用BA-ELISA法定量检测受试者外周血中sCD28、sCD137含量,分析比较其含量变化与SLE疾病活动度及相关实验室指标的相关性。结果SLE病人组血清sCD28和sCD137水平均显著高于健康对照组(P < 0.01);中度活动组血清sCD28水平和sCD137水平显著高于轻度活动组;重度活动组血清sCD28水平和sCD137水平显著高于中度活动组(P < 0.01);SLE病人血清sCD28、sCD137水平与病人SLEDAI评分、抗核抗体水平呈正相关,与C3水平呈负相关(P < 0.01)。结论SLE病人血清sCD28和sCD137水平显著升高且与其疾病活动度呈正相关,有望成为判断SLE病情活动度的参考指标之一。     

miR-20b抑制哮喘小鼠的气道炎症

目的探讨miR-20b对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、哮喘+miR-20b模拟
物处理组、哮喘+miR-20b模拟物对照处理组。卵清白蛋白（OVA）致敏和激发构建哮喘模型小鼠,miR-20b模拟物及其对照采用
鼻滴的方式给药干预。实验流程的第49天检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞总数和分类计数,肺组织进行HE染色观察
病理学变化,ELISA检测BALF中血管内皮生长因子（VEGF）的浓度。结果哮喘小鼠经miR-20b模拟物处理后,BALF中细胞
总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的分类计数明显降低（P<0.01）,并且气道黏膜增厚减轻,气道腔内粘液分泌及支气管周围
炎性细胞的浸润减少。与哮喘组BALF中VEGF的含量28.55±3.42 pg/mL相比,哮喘+miR-20b 模拟物处理组的含量18.19±
3.67 pg/mL明显降低（P<0.01）。结论miR-20b对哮喘小鼠气道炎症产生抑制作用,这一效应可能是通过降低VEGF的表达来
介导。