流感病毒裂解疫苗接种人体后的安全性和免疫原性研究北大核心CSCD

目的评价流感病毒裂解疫苗经工艺改进后的安全性和免疫原性。方法采用非劣效性研究,选择3～〈18岁受试者240人随机分为2组,接种试验疫苗与进口疫苗,比较其安全性和免疫原性;另选择18～〈60岁受试者360人随机分3组,接种3个连续批次试验疫苗,评价试验疫苗批间免疫效果的一致性。结果试验疫苗接种后不良反应发生率为4.17%,与进口疫苗比较,两组反应发生率差异无统计学意义（P〉0.05）;试验疫苗和进口疫苗各型别抗体阳转率、免疫后血凝抑制（HI）抗体几何平均滴度（GMT）和保护率差异无统计学意义（P〉0.05）;3个连续批次试验疫苗各型别抗体阳转率和免疫后HI抗体GMT差异无统计学意义（P〉0.05）。结论经工艺改进后的试验疫苗安全性和免疫原性良好,批间免疫效果稳定。     

内毒素诱导性基因启动子结合蛋白的筛选新方法及其应用

目的建立研究DNA-蛋白质相互作用的新方法。方法选择6只SPF级BALB／c小鼠,模型组经尾静脉注射脂多糖（LPS）25mg／kg,使平均动脉压（MAP）降至40mmHg（1mmHg=0．133kPa）造成内毒素休克,然后迅速处死,正常对照组同期处死,取肝脏组织。利用生物素一链亲和素系统结合磁珠分离技术筛选内毒素诱导基因（LIG）启动子的结合蛋白。用聚合酶链反应（PCR）扩增末端带生物素标记的LIG启动子探针,提取动物肝脏组织胞核蛋白,与制备的LIG启动子探针进行孵育,再以标记有链亲和素的磁珠分离LIG启动子-蛋白反应复合物,使用不同浓度NaCl洗脱结合的蛋白,使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分离样品蛋白,并对凝胶进行银染显色,比较模型组与正常对照组的差异条带。结果两组胞核蛋白中共观察到15条差异条带。分析差异条带显示,与正常对照组比较,在低亲和力作用水平,LPS作用后有4个蛋白开始与LIG启动子作用力增强,而有1个蛋白则同启动子的相互作用减弱;在DNA-蛋白质高亲和力作用水平,则有9个蛋白因LPS刺激而同DNA的结合力增强,有1个蛋白同启动子的相互作用消失。结论成功建立了生物素-链亲和素结合磁珠分离技术的新方法,为研究DNA-蛋白质相互作用开拓了新思路,并从“转录调控组学”角度深入理解基因表达调控机制奠定了基础。     

肝癌再手术的优越性及术式的选择

肝癌是目前最常见的恶性肿瘤之一,肝癌发病率位居恶性肿瘤发病率第5位,病死率居第3位[1]。随着医学水平的提高,肝癌的治疗比以往取得了有较大的进展,尽管采取了积极的手术治疗结合化疗、放疗等治疗方案,但肝癌的长期生存率仍然很低,主要原因在于肝癌术后复发[2]。所谓肝癌的复发包括原发部位的复发、肝内其他部位肿瘤的形成和肝外远处转移,肝内肝癌的复发率为68%～96%[3]。即使行肝癌根治切除的患者,术后3年的复发转移率也有40%～50%,术后5年复发率高达60%～70%[4]。     

42例经胸乳径路腔镜甲状腺手术的高效分析

目的：探讨经胸乳径路腔镜甲状腺手术的效果。方法将42例甲状腺结节患者分别行胸乳径路腔镜甲状腺手术（腔镜组20例）与常规甲状腺手术（常规组22例）,比较两组手术时间、术中出血量、术后引流量、术后住院时间、美容效果满意度及并发症。结果腔镜组与常规组手术时间分别为（119.2±25.7）min、（74.5±10.3）min（P0.05）;对切口满意率分别为90.0%与36.3%（P〈0.00）;两者均无甲状腺旁腺及喉返神经损伤及因术后大出血而再次手术等并发症。结论经胸乳甲状腺切除术是一种安全的手术方式,具有较好的美容效果。     

肿瘤坏死因子α通过丝裂原活化蛋白激酶激酶6诱导LA795肺腺癌细胞凋亡

目的：为了研究肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导肺癌细胞凋亡的分子机制，寻找肺癌基因治疗的新方法。方法：建立TNF－α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型；使用人胚肾293包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶6（mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)及其结构活性和无活性突变体的重组腺病毒；使用激酶活性测定法检测细胞内MKK6的激酶活性。结果：TNF－α刺激可明显诱导LA795肺腺癌细胞MKK6激活；用TNF－α刺激肺腺癌细胞可明显诱导细胞凋亡；MKK6结构活性突变体也可明显诱导LA795细胞凋亡；而MKK6无活性突变体可明显抑制TNF－α诱导的LA795细胞凋亡。结论：TNF－α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡是通过MKK6发挥作用的，MKK6的重组腺病毒有希望用于肺癌的基因治疗。     

串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨

目的：构建高迁移率族蛋白B1（HMGB1）中细胞因子诱导片段1（CIF1）与串联亲和纯化（TAP）系统中纯化标签链霉亲和素结合肽（SBP）和钙调蛋白结合肽（CBP）序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核／巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础。方法：采用PCR方法分别扩增出cBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b／CBPSBP—CIF。利用Ni—NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85％以上。采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核／巨噬细胞白血病细胞RAW264．7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264．7细胞释放TNF-a的水平变化。结果：表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好。当蛋白浓度大于0．5ng／μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性（P〈0．05）,并且在CIF1蛋白浓度O～2．5ng／μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系。结论：原核表达纯化了His—CBP—SBP—CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF—α的分泌表达。     

严重急性呼吸综合征患者细胞因子与趋化因子表达谱的特征

由于严重急性呼吸综合征(SARS)的免疫病理机制尚未阐明,目前尚无有效药物或治疗方法能够控制这种疾病.为了探讨SARS发病的免疫学机制,我们研究了SARS患者外周血细胞因子与趋化因子的表达谱以及肺和淋巴组织的免疫病理改变.采用液相芯片技术,动态扫描了23例诊断明确的SARS患者血中14种细胞因子与趋化因子;应用反转录PCR、免疫组化和免疫荧光技术对SARS死亡患者经尸体解剖的肺和淋巴组织进行免疫病理学观察.     

益气活血通脉颗粒治疗冠心病经皮冠状动脉介入术后气虚血瘀证患者的疗效观察

【目的】 观察益气活血通脉颗粒对冠心病经皮冠状动脉介入术（PCI）后气虚血瘀证患者心功能、血液流变学和炎症指标的影响。【方法】 将60例冠心病PCI术后气虚血瘀证患者随机分为试验组和对照组,每组各30例。对照组给予冠心病PCI术后常规治疗,试验组在对照组的基础上加用益气活血通脉颗粒治疗,疗程为8周并随访6个月。观察2组患者治疗前后中医证候评分、心功能指标、炎症指标、血液流变学指标的变化情况,比较2组患者的中医证候疗效和不良事件发生率。【结果】（1）中医证候疗效方面：治疗8周后,试验组的总有效率为86.7%（26/30）,对照组为70.0%（21/30）,组间比较,试验组的中医证候疗效明显优于对照组（P＜0.05）。（2）中医证候评分方面：治疗后,2组患者的各项主症评分和次症评分均较治疗前明显降低（P＜0.05）,且试验组的降低作用均明显优于对照组（P＜0.05）。（3）心功能指标方面：治疗后,2组患者的左心室射血分数（LVEF）和每分心输出量（CO）水平均较治疗前明显提高（P＜0.05）,且试验组的提高作用均明显优于对照组（P＜0.05）。（4）血液流变学指标方面：治疗后,2组患者的全血高切黏度、全血低切黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数均较治疗前明显降低（P＜0.05）,且试验组的降低作用均明显优于对照组（P＜0.05）。（5）炎症指标方面：治疗后,2组患者的超敏C反应蛋白（hs-CRP）和白细胞介素6（IL-6）水平均较治疗前明显降低（P＜0.05）,且试验组的降低作用均明显优于对照组（P＜0.05）。（6）不良事件方面：经6个月随访,试验组的不良事件发生率为16.7%（5/30）,明显低于对照组的43.3%（13/30）,差异有统计学意义（P＜0.05）。【结论】 益气活血通脉颗粒治疗冠心病PCI术后气虚血瘀证患者疗效确切,可有效改善患者临床症状、心功能和血液流变学指标,降低患者的炎症水平和心血管不良事件发生率。