携带白细胞介素2和NK4双基因真核共表达质粒的构建及活性观察

目的 构建同时携带白细胞介素2（IL-2）和NK4基因的真核表达载体（pIRES-IL-2-IRES-NK4）,观察其在防治肿瘤中的潜在应用前景.方法 根据Pubmed上公布的IL-2及NK4 mRNA序列,设计扩增IL-2及NK4 cDNA的特异性引物,以PBV220-IL-2质粒和PCAGGS/hNK4质粒为模板,分别扩增IL-2及NK4基因,并将IL-2及NK4基因分别克隆在真核表达载体pIRES-SEQ的XhoI、MLuI位点和SalI、NotⅠ位点.获得同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4.该重组质粒转染肝癌细胞HepG2后,检测目的基因的转染表达及表达产物对HepG2细胞增殖的影响.结果 通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带IL-2和NK4双基因的真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4构建成功.用pIRES-IL-2-IRES-NK4转染HepG2细胞后24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,48 h时荧光更强;逆转录聚合酶链反应结果表明转染pIRES-IL-2-IRES-NK4质粒细胞的IL-2及NK4基因表达明显增强.酶联免疫吸附测定检测结果表明,转染组细胞较对照组细胞培养上清中IL-2及NK4蛋白表达水平明显增强.转染组48 h后的IL-2、NK4蛋白表达水平为2.139、1.956 mg/L,明显高于未转染组的0.492、0.620 mg/L.四甲基偶氮唑盐法结果表明转染真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4的细胞表达上清,有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,且有剂量效应关系.结论 本研究成功构建了同时携带IL-2和NK4基因的重组真核表达质粒pIRES-IL-2-IRES-NK4,该质粒可有效转染肝癌细胞,且转染细胞表达上清有明显抑制肝癌细胞HepG2增殖的活性,提示该重组质粒有潜在防治肿瘤的应用前景.     

大黄甘草汤联合间断短时静脉-静脉血液滤过对重症急性胰腺炎患者细胞因子的影响

Objective To approach the treatment effect and mechanism of action of intermittent short time veno-venuous hemofiltration(ISVVH)and Rheum Glycyrrhiza Decoction in patients with severe acute pancreatitis(SAP).Methods One hundred and three SAP patients were randomly divided into 3 groups.Rheum Glyeyrrhiza uraleusis fisch Decoction group(A,n=25),ISVVH group(B,n=35)and ISVVH CO-Rheum Glyeyrrhiza uralensis fisch decoction group(C,n=43).A,B and C groups were all treated with conventional therapy.However.the patients in group A were added Rheum Glycyrrhiza uralensis fisch Decoction,the patients in group B added ISVVH while group C were raised ISVVH co-Rheum Glycyrrhiza uralensis fiach Decoction.Finally,we observed three groups of patients with heart rate(HR),respiration(R),blood pressure(BP),liver and kidney function;oxygenation index(PaO2/FiO2),oxygen saturation(SaO2);blood routine,plasma electrolytes,glucose and C-reactive protein;parallel APACHE Ⅱ score;measure level of TNF-α,IL-10 in patients blood serum when they were admitted to hospital,24,48,96 h after treatment respectively.Results After treated 24,48,96 h,C group compared to B group,B group compared to A group,there were significantly improvements in APACHE Ⅱ score(P < 0.05);TNF-alevel decreased(P < 0.05);IL-10 level increased(P < 0.05);three groups after treatment of acute lung injury, thoracic/abdominal effusion,intestinal paralysis/obstruction,sepsis and other complications improved significantly(P < 0.05).Conclusions ISVVH and glycyrrhiza decoction can regulate the liver and renal dysfunctions that followed SAP,raise physical conditions,improve the complications of patients with SAP.     

HGF 基因修饰的间充质干细胞对犬后肢缺血后股神经的保护作用简

目的观察携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒（Ad—HGF）修饰的骨髓间充质干细胞（Msc）对犬后肢缺血后神经组织病理学的影响。方法18只犬随机分为Ad—HGF—MSC处理组、模型对照组和正常对照组,每组6只。将Ad—HGF—MSC处理组和模型对照组犬麻醉后,全结扎左后肢股动脉制作犬左后肢缺血模型,体外分离、培养犬骨髓MSC,转染Ad—HGF,并将含Ad-HGF—MSC的细胞悬液对Ad—HGF—MSC处理组犬病肢行多点肌肉注射,模型对照组犬注射等量的PBS缓冲液,正常对照组不进行任何处理。90d后,取组织标本,常规组织病理切片染色,光学显微镜下观察。结果12只犬均建模成功。模型对照组犬病侧股神经至肌束间的细小神经均发生显著退行性变,累及轴突、髓鞘和施旺细胞核。而Ad—HGF—MSC处理组犬的各级神经病变不明显,部分甚至与正常对照组无差别。结论Ad—HGF—MSC局部注射可减轻或阻遏犬后肢缺血后股神经组织损伤,具有一定的神经组织保护作用。     

急进高原与平原大鼠肠黏膜屏障紧密连接蛋白occludin表达的对比研究

目的:探讨急进高原与平原大鼠肠黏膜屏障紧密连接蛋白occludin在肠上皮细胞中的表达变化。方法:48只Wistar大鼠随机分为平原组(n=24)和高原缺氧组(n=24),每组再按2、4、6 d时间点随机分为3个亚组(n=8)。各组均用免疫组织化学法检测occludin蛋白表达,RT-PCR法检测occludin mRNA含量。结果:与平原组各时间点比较,高原缺氧组occludin蛋白及occludin mRNA含量显著降低(P<0.01)。结论:急进高原可使大鼠肠黏膜屏障紧密连接蛋白occludin表达减少,导致肠黏膜屏障损伤。     

Ad—HGF转染对HepG2细胞的生长抑制作用

目的：探讨Ad—HGF转染对HepG2生长抑制作用的影响。方法：用Ad—HGF转染HepG2细胞，检测HGF蛋白表达及对细胞凋亡的影响；并用裸鼠致瘤试验体内观察Ad—HGF对HepG2细胞致癌的影响。结果：转染后24hHGF即有表达，48h达高峰。并观察到Ad—HGF可促进HepG2凋亡，体内Ad—HGF可抑制HepG2细胞生长成瘤。结论：Ad—HGF在体外可抑制HepG2细胞增殖、促进其凋亡，体内抑制其致癌作用。     

6 129例病人术前血液传播性疾病分析

目的 对6 129例病人术前血液传播性疾病分析,为预防医院感染和医疗纠纷提供依据.方法 对6 129例病人空腹血进行乙肝三系统、抗-HCV和抗-HIV 1/2的检测.结果 乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎抗体(抗-HCV)和抗-HIV阳性率分别为6.1%、2.5%和0.5%.在乙型肝炎中,大三阳和小三阳的阳性率分别为1.26%和1.66%,抗-HBs阳性率为21.41%.结论 术前血清学检测对减少院内感染,减少医疗纠纷十分必要.     

原发性肝癌患者血清催乳素及生长激素含量变化

为了解肿瘤患者激素调节的变化 ,我们对 38例正常查体者及 5 2例临床确诊原发性肝癌患者进行了血清甲胎蛋白 (ＡＦＰ)、生长激素 (ＧＨ )和催乳素(ＰＲＬ)检测 ,现将结果报道如下。1　材料与方法1 1　研究对象　 38例对照组来自我院健康查体者。年龄 2 8～ 4 7岁 ,其中男性 2 0例 ,女性 18例。原发性肝癌患者 5 2例 (均经临床确诊 ) ,年龄 37～ 72岁 ,其中男性 4 4例 ,女性 8例。1 2　方法　各组均于清晨早餐前肘静脉采血 3ｍｌ置清洁干燥管内 ,尽快分离血清置 - 4 0℃贮存待检。ＡＦＰ、ＨＧ及ＰＲＬ放射免疫检测试剂盒分别由北京原子能研…     

大肠癌中端粒长度与DCC基因mRNA表达的研究

目的 分析端粒长度及DCC基因mRNA表达在大肠癌及腺瘤发生发展中的作用。方法 采用Sourthern印迹杂交及RT-PCR技术,分别检测46例大肠腺瘤及62例大肠癌组织中的端粒限制性片段（TRF）长度及DCCmRNA表达状态并观察它们与肿瘤临床病理的关系。结果 在大肠癌及大肠腺瘤中,TRF长度较正常组织明显缩短,其缩短者占53.2%和41.3%,而延长者仅占6.5%和4.4%,结肠癌的TRF长度也较直肠癌的TRF长度明显缩短,DCCmRNA表达缺失率在大肠癌及大肠腺瘤中则分别达62.9%和34.8%,显著高于正常组织（1.6%);同时,大肠癌患者的平均TRF长度还随患者年龄的增长而缩短,DCCmRNA表达缺失率则随肿瘤的分化程度下降及临床阶段的进展而升高,但DCCmRNA表达缺失与TRF长度缩短在大肠癌中未表现出明显的相关性。结论 端粒缩短与DCCmRNA表达缺失与TRF长度缩短在大肠癌中未表现出明显的相关性。结论 端粒缩短与DCCmRNA表达缺失可能是大肠腺瘤恶变及大肠癌形成过程中较具特征表现的生物学异常行为。     

尿毒症患者血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原变化及其相关性研究

目的 :观察尿毒症患者血清透明质酸 (HA)、Ⅳ型胶原 (CL -Ⅳ )、层粘蛋白 (LN)的变化及其相关性。方法 :测定了 2 1例尿毒症血液透析 (ESRD)组 ,2 1例原发性肾小球肾炎 (GN)组患者及 2 4例健康献血员 (NC)组的血清HA ,CL -Ⅳ ,LN水平 ,并作相关分析。结果 :ESRD组与GN组患者血清HA ,CL -Ⅳ及LN均高于NC组 (P <0 .0 1) ,ESRD组血清HA ,CL -Ⅳ ,LN水平高于GN组 ,有统计学意义 (P <0 .0 1) ;ESRD组患者血清HA ,CL -Ⅳ及LN变化 ,除HA与LN之间是呈正相关关系 (γ =0 .5 92 ,P <0 .0 5 )外 ,HA与CL -Ⅳ以及CL-Ⅳ与LN之间未显示相关性变化 (γ =0 .312 ,0 .177,P >0 .0 5 )。结论 :血清HA ,CL -Ⅳ ,LN联合检测可以反映并监测肾小球疾病的进展 ;ESRD患者细胞外基质主要成份血清水平之间变化 ,并非完全一致。