穗花杉双黄酮对3T3-L1 细胞增殖、凋亡 及生物钟的影响

目的 探讨穗花杉双黄酮对3T3-L1 细胞增殖、凋亡及生物钟的影响。方法 采用不同浓度穗花 杉双黄酮处理正常和过表达昼夜节律运动输出周期故障蛋白（CLOCK）的3T3-L1 细胞,CCK-8 和EdU 检 测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;real-time RT-PCR 检测生物钟基因CLOCK 和BMAL1 的表 达;Western blotting 检测Cleaved caspase-3、Bcl-2、CLOCK 及BMAL1 蛋白的表达。结果 低浓度（2.5 ～ 10.0 mg/L）穗花杉双黄酮作用于3T3-L1 细胞后,3T3-L1 细胞增殖和凋亡无影响（P >0.05）,但是当浓度达 20 和40 mg/L 反而抑制增殖（P <0.05）;通过上调Cleaved caspase-3 表达,下调Bcl-2 表达,促进凋亡的发生。 较低浓度穗花杉双黄酮对3T3-L1 细胞CLOCK、BMAL1 基因和蛋白的表达无影响（P >0.05）,而浓度达20 和40 mg/L 则呈抑制作用（P <0.05）;过表达CLOCK 基因可减弱穗花杉双黄酮对3T3-L1 细胞的抑制作用 （P <0.05）。结论 3T3-L1 细胞在培养状态仍保持昼夜节律性,较高浓度穗花杉双黄酮可抑制3T3-L1 细胞 增殖并促进凋亡,其可作为抑制细胞增殖的药物,其作用机制与生物钟基因表达有关。