2011－2017年深圳市食源性沙门菌血清分型及耐药分析

目的 了解2011－2017年深圳市食源性沙门菌的血清型分布及耐药情况,为制定政策提供科学依据。 方法 根据《食品卫生微生物学检验》GB 4789-2010及GB 4789-2016对2011－2017年深圳超市、农贸市场销售的生肉、生禽、水产品、豆制品等食品中分离的468株沙门菌进行沙门菌菌种鉴定和血清分型;采用临床实验室标准研究所(CLSI)推荐的纸片扩散法进行药物敏感性试验和结果判读,确定耐药表型。 结果 468株食源性沙门菌89.3%自畜肉、生禽中检出,可分为42个血清型,德尔卑、鼠伤寒、伦敦、阿贡纳、斯坦利、韦太夫雷、肠炎株7种沙门菌为主要血清型,共占53.6%。沙门菌对美罗培南、亚胺培南以外的18种抗生素均有不同程度的耐药,以四环素和链霉素耐药率最高,2017年耐药率分别达64.6%和55.4%。食源性沙门菌多重耐药情况严重,2017年多重耐药菌株比例达31.5%,最多的是对12种抗生素产生耐药。 结论 深圳市售食品沙门菌污染以生禽、畜肉为主,食源性沙门菌耐药形势严峻, 耐药性沙门菌尤其是多重耐药性沙门菌成为公共健康的潜在威胁。     

一起肠炎沙门菌食物中毒的快速诊断与溯源

本研究采用改良分子信标-实时PCR快速检测方法和核酸脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术，成功地应用于深圳市一起细菌性食物中毒的快速诊断和准确溯源。     

深圳市食品原料用蚝汁使用现状分析

随机抽取1995年1月～12月深圳市7间食品厂生产的蚝油55份（另加市外生产的1份）及其配方主要原料蚝汁55份进行检测。结果蚝汁的氨基酸态氮（AAN）含量为0．61～1．5％，平均0．88％．按厂家蚝油配方中蚝汁最高含量为15％，则蚝油AAN含量为0．10～0．18％，平均0．13％，远低于国标中蚝油AAN含量0．3％的要求．但蚝油检测结果AAN含量为0．11～0，72％，平均含量0．38％，仅6份低于国标含量，揭示厂家采用非蚝汁的其他含氮物质来提高AAN含量。特建议在煮制蚝汁过程严格掌握浓缩程度，使其AAN含量达到1．0％，蚝油配方中蚝汁使用最低限量≥30％，以确保蚝油的营养指标及其特有的风味．     

日本血吸虫感染者尿液中特异性IgG及亚类的检测

目的 研究日本血吸虫感染者尿液特异性循环抗体在日本血吸虫诊断上的应用。方法 采集类检确诊的日本血吸虫患者尿液，ELISA法测定尿液中抗日本血吸虫特异性IgG及亚类（IgG1，IgG2，IgG3）抗体；同时肝吸虫阳性患者尿液作为考核交叉反应样本，无寄生虫感染液作为阴性对照。结果 粪检阳性日本血吸虫患者尿液中抗日本血吸虫IgG抗体的检出率为81.0%（17/21），其中IgG1为81.0%（17/21），IgG2为19.0%（4/21），IgG3为23.8%（5/21），肝吸虫患者尿液中IgG1抗体与日本血吸虫抗原有25.0%（2/8）的交叉反应，IgG2和IgG3均未发生交叉反应。结论 日本血吸虫患者尿液中存在抗日本血吸虫的特异性循环抗体，肝吸虫患者尿液中的IgG1抗体与日本血吸虫抗原有一定的交叉反应；但IgG2和IgG3无交叉反应现象，提示尿液中的IgG抗体可以作为血吸虫感染的诊断，尿液中的IgG2和IgG3抗体可以作为日本血吸虫病的鉴别诊断。     

双重实时PCR快速同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌

目的建立改良分子信标双重实时PCR同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌的快速方法,应用于霍乱监测、副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位(ctxA)和副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因(TDH)的保守序列,分别设计引物和改良分子信标探针,以10种细菌作对照,建立双重实时PCR改良分子信标检测体系,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和霍乱监测。结果改良分子信标双重实时PCR反应体系DNA灵敏度为102.4～166.6fgμl,菌液灵敏度为32～64CFUml或3～6CFUPCR反应体系,无交叉反应。此反应体系同时检测40株副溶血弧菌和50株霍乱弧菌,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰。对3起细菌性食物中毒共48份样品和100份海产品进行检测,9份副溶血弧菌实时PCR阳性,其中7份副溶血弧菌细菌培养阳性,其余样品都为阴性。从样品处理到检测结果仅需1天时间。结论改良分子信标双重实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于霍乱和副溶血弧菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

改良分子信标-实时PCR快速检测产单核李斯特菌

目的：建立改良分子信标-实时PCR检测产单核李斯特菌（LMO）的快速方法，应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。方法：根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，建立改良分子信标-实时PCR检测体系，应用于食品中LMO检测。结果：改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110fg，菌液灵敏度为99cfu／ml或4cfu／PCR反应体系，无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO，均出现特异的荧光信号。上述方法可将检测时问由原来的至少4d缩短至1d。对228份食品进行LMO检测，8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性，其中6份1310细菌培养阳性。结论：改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高，特异性强．能提高LMO的检出率和准确性，可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。     

脉冲场凝胶电泳在沙门菌食物中毒溯源中的应用研究

目的用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法,追踪某次沙门菌食物中毒的来源,确定中毒食品,快速控制传染源。方法对食物中毒中分离的肠炎沙门菌用XbaI酶切总DNA,用脉冲场凝胶电泳（PFGE）法进行分子分型,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行电子化数据分析,绘出聚类分析图。结果脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方法对患者样本分离的242株肠炎沙门菌进行分子分型,型别基本一致,表明是同一批食物中毒;从三文治等蛋糕制品中分离的9株菌株与患者分离株图谱完全一致,表明此次食物中毒的源头为某蛋糕厂生产的三文治等食品。结论脉冲场凝胶电泳技术适用于菌株的同源性的分析和传染源的追踪。     

深圳市酒店三文鱼和北极贝生食中致病菌污染状况调查

目的 了解酒店、日韩料理餐厅冰鲜海产品(三文鱼、北极贝)的微生物污染状况,为预防病原微生物食物中毒提供科学依据.方法 抽取酒店、日韩料理餐厅、超市商场等冰鲜海产品共168份,依照国家标准方法和荧光PCR方法对样品进行检测.结果 168份样品中共检出不合格大肠菌群101份,阳性率为60.12%;菌落总数29份,阳性率为17.26%;致病菌:检出副溶血性弧菌5份,阳性率为2.98%;金黄色葡萄菌38份,阳性率为22.62%.沙门氏菌和志贺氏菌致病菌未检出.结论 冰鲜海产品三文鱼和北极贝受到病原微生物的污染相当严重,各部门要加强监管监测,积极做好预防控制工作,减少食原性食物中毒发生的危险.     

深圳市酒店三文鱼和北极贝生食中致病菌污染状况调查

目的了解酒店、日韩料理餐厅冰鲜海产品（三文鱼、北极贝）的微生物污染状况,为预防病原微生物食物中毒提供科学依据。方法抽取酒店、日韩料理餐厅、超市商场等冰鲜海产品共168份．依照国家标准方法和荧光PCR方法对样品进行检测。结果168份样品中共检出不合格大肠菌群101份,阳性率为60．12％：菌落总数29份,阳性率为17．26％;致病菌：检出副溶血性弧菌5份,阳性率为2．98％;金黄色葡萄菌38份,阳性率为22．62％。沙门氏菌和志贺氏菌致病菌未检出。结论冰鲜海产品三文鱼和北极贝受到病原微生物的污染相当严重,各部门要加强监管监测,积极做好预防控制工作,减少食原性食物中毒发生的危险。     

带组氨酸标签的癌蛋白SET真核表达载体的构建及其表达

目的为研究三氯乙烯诱导的差异蛋白SET在肝细胞L-02中的相互作用,构建了癌蛋白SET和His标签融合表达的真核表达载体pcDNA3．1（＋）／SET—His。方法从L-02肝细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增SET—His基因并进行双酶切,序列纯化后定向克隆至pcDNA3．1／zeo（＋）载体,阳性克隆载体进行双酶切和测序鉴定．阳性克隆载体瞬时转染入L-02肝细胞,利用Western blotting检测SET—His融合蛋白的表达。结果利用RT—PCR从L-02细胞总RNA中成功克隆出SET基因,经双酶切和测序鉴定证实pcDNA3．1（＋）／SET—His真核表达载体构建成功。经Western blotting验证表明,SET—His融合蛋白在肝细胞中获得高效表达。结论该结果为研究SET蛋白相互作用以及三氯乙烯致机体损伤的机理奠定了基础。