Bevacizumab对人Tenon囊成纤维细胞迁移抑制作用的研究

目的：观察bevacizumab对人Tenon囊成纤维细胞迁移能力的影响,探讨青光眼术后滤过泡瘢痕化的对策。方法：采用从陕西省人民医院中心实验室细胞库中取出冻存的人Tenon囊成纤维细胞,采用细胞复苏法,遵循无菌原则,进行常规培养。创伤划痕试验：待细胞融合度达到80%时在单层细胞表面划出一条无细胞的刮除带,空白对照组加入不含血清的DMEM培养液,bevacizumab处理组加入 bevacizumab 浓度为1 mg/mL 不含血清的DMEM培养液,分时段(0,24,48,72h)观察并测量划痕宽度。结果：人Tenon囊成纤维传代细胞显微镜下观察呈长梭形,细胞核位于细胞的中部,核较大,胞浆丰富,生长时呈漩涡状排列走形,增殖能力强,符合成纤维细胞的一般形态。冻存和复苏后细胞的形态结构和生物学特点维持不变。细胞划痕试验显示：0h时,两组细胞划痕初始宽度相等;24 h 时两组细胞迁移距离基本一致;48 h 时bevacizumab处理组细胞迁移距离明显小于空白对照组;72 h时空白对照组划痕基本愈合, bevacizumab处理组细胞迁移距离较48 h无明显变化,且细胞死亡数目较多。结论：利用细胞复苏法可成功培养形态结构和生物学特性稳定的传代人Tenon囊成纤维细胞,为实验研究奠定细胞学基础。成纤维细胞本身具有较强的迁移能力,外源性bevacizumab作用可以明显抑制细胞的迁移,作用时间过长时,会造成细胞的过多死亡。抗新生血管药物对成纤维细胞的迁徙具有一定的抑制作用,未来很有可能成为眼科临床抗击青光眼术后滤过泡瘢痕化的重要手段。     

脂联素对小鼠氧诱导视网膜病变的保护作用

目的：观察脂联素对C57BL/6J小鼠氧诱导视网膜病变的影响。

方法：将新生C57BL/6J小鼠随机分为3组,分别为常氧对照组、生理盐水注射氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)组和脂联素注射OIR组。将后两组小鼠于生后第7d(P7)至P12置于体积分数75%±2%高氧氧箱中以诱导OIR模型。脂联素注射OIR模型组在P7～P15每天接受腹腔注射重组鼠脂联素蛋白(3.0μg/g),生理盐水注射OIR组则于上述相同时间点注射同等剂量的生理盐水。三组小鼠均于P17时取右眼行视网膜铺片和Lectin染色,观察视网膜中央无血管区及病理性新生血管的情况; 取左眼行视网膜切片和HE染色,观察视网膜组织病理学变化; 应用Western-blot测定左眼视网膜组织中iNOS、nNOS、eNOS的表达; 取右眼视网膜组织定量检测ROS/RNS含量以及NO水平。

结果：脂联素注射OIR组小鼠视网膜中央无血管区面积较生理盐水注射OIR组明显减少(t=7.304,P<0.01),病理性新生血管数目明显减少(t=2.654,P<0.01); 脂联素注射OIR组小鼠视网膜组织ROS含量较生理盐水注射组明显降低(t=13.349,P<0.01); 脂联素注射OIR组小鼠视网膜组织NO含量明显高于生理盐水注射组(t=3.023,P<0.01),iNOS表达明显低于生理盐水注射组(t=5.112,P<0.01),eNOS表达明显高于生理盐水注射组(t=7.421,P<0.01),nNOS的表达无统计学差异(t=1.074,P>0.01)。

结论：脂联素可以通过激活内源性eNOS促进生理性NO生成,同时又能抑制ROS/RNS的产生,在OIR进程中发挥视网膜血管的保护作用。     

高血压病伴或不伴糖尿病患者血脂，载脂蛋白、脂蛋白和眼底病变相关性临床分析

目的：研究高血压病伴或不伴糖尿病患者血脂，载脂蛋白和眼底病变的关系。方法：选择在我院住院的高血压病患者40例，高血压病合并糖尿病患者30例，正常对照40例。以全自动生化仪测定总胆固醇、甘油三醇、载脂蛋白A、载脂蛋白B、脂蛋白(a)、高密度脂蛋白胆固醇与低密度脂蛋白胆固醇值。眼科检查由固定医师完成。数据用SASS软件做统计学处理。组间比较用X^2检验。结果：高血压病患者均存在血脂，载脂蛋白代谢紊乱，高血压病伴糖尿病患者血脂，载脂蛋白代谢紊乱更为严重。97％高血压病患者发生了一定程度的眼底病变，高血压伴糖尿病患者的眼底病变也更加严重，既可以高血压性眼底病变为主，也可以糖尿病性眼底病变为主。结论：高血压病患者眼底病变明显，伴有糖尿病患者眼底病变更加严重。病程、Lp(a)与高血压病眼底病变密切相关，是独立危险因子；年龄、性别、血压、CHO、TG、HDL、LDL、apoA、apoB以及空腹血糖并非高血压病眼底病变的独立危险因子。     

抑制血管生成药安维汀玻璃体腔注射后房水细胞因子的变化

背景：关于抑制血管生成药安维汀(Avastin)治疗增殖型糖尿病视网膜病变的机制研究大多数均局限在血管内皮生长因子本身,而结缔组织生长因子、血管增生抑制因子也在其疾病中扮演着重要的角色。
　　目的：考察增殖性糖尿病视网膜病变玻璃体切割术前应用安维汀玻璃体腔注射前后房水细胞因子的变化。
　　方法：选取增殖性糖尿病视网膜病变患者30例(30眼),采用随机数字表法分为3组,每组10例(10眼)。玻璃体切割组：直接行玻璃体切割手术;安维汀注射0.05 mL组：于玻璃体切割前7 d玻璃体腔注射0.05 mL安维汀(1.25 mg);安维汀注射0.1 mL组：于玻璃体切割前7 d玻璃体腔注射0.1 mL安维汀(2.5 mg)。分别于术中抽取少量房水,检查血管内皮生长因子、结缔组织生长因子及色素上皮衍生因子的表达变化。
　　结果与结论：与玻璃体切割组比较,安维汀注射组房水中血管内皮生长因子含量降低,色素上皮衍生因子和结缔组织生长因子含量增高,并能抑制血管内皮生长因子的表达,差异有显著性意义;安维汀注射0.05 mL组与安维汀注射0.1 mL组相比,差异无显著性意义。结果说明玻璃体腔注射安维汀在增殖性糖尿病视网膜病变玻璃体切割前辅助应用可以减少与增殖相关的细胞因子的含量,同时增加了拮抗新生血管生长的细胞因子。     

TGF-β2刺激人Tenon囊成纤维细胞生物学行为改变及表达整合素连接激酶(ILK)的研究

目的 探讨转化生长因子β2(transforming growth factor beta 2,TGF-β2)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞(human Tenon fibroblasts,HTFs)生物学行为及表达整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的影响.方法 组织块贴壁法培养原代HTFs,免疫荧光染色鉴定波形蛋白和角蛋白.MTT法检测不同浓度TGF-β2对HTFs细胞的促增殖作用,RT-PCR检测TGF-β2作用前后α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)、ILK mRNA的表达,Western Blot检测α-SMA、ILK、E-cadherin蛋白的表达,细胞免疫荧光染色检测α-SMA、E-cadherin蛋白的表达.结果 MTT检测结果显示,TGF-β2作用48 h、72 h,5.0 μg· L-1及10.0 μg· L-1诱导下的OD值显著高于0.1μg·L-1、1.0 μg·L-1组及空白对照组(均为P＜O.05),5.0 μg·L-1及10.0 μg·L-1作用48 h及72 h的OD值显著高于24 h(均为P＜0.05).RT-PCR检测结果显示,5.0μg·L-1TGF-β2诱导48 h后,α-SMA mRNA及ILK mRNA水平和空白对照组相比明显上调,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).Western Blot检测结果显示,ILK、α-SMA及E-cadherin在空白对照组和5.0 μg· L-1TGF-β2处理组均有表达,但TGF-β2能够明显上调三者的表达,5.0 μg·L-TGF-β2处理48 h组与空白对照组差异均有统计学意义(均为P＜0.05).细胞免疫荧光染色结果显示,TGF-β2处理组α-SMA、E-cadherin均有荧光表达,其中oα-SMA表达在细胞质中,而E-cadherin在细胞质和细胞核中均有表达.结论TGF-β2可以诱导体外培养HTFs增殖,转分化及黏附性增强,同时促进ILK的高表达,提示ILK在青光眼术后瘢痕化过程中可能也起到一定作用.     

特发性黄斑前膜术后视功能及黄斑区形态结构的变化

目的　评估特发性黄斑前膜经２３Ｇ微创玻璃体切割术后视功能及黄斑区结构的变化。方法　回顾性分析了２８例（２８眼）于我院行２３Ｇ微创玻璃体切割术＋内界膜剥除术＋玻璃体注射２ｍｇ曲安奈德的黄斑前膜患者临床资料,术前术后行最佳矫正视力、眼压、眼底照相、眼底ＯＣＴ检查,术后随访半年。结果　２５例２５眼患者视力提高,３例３眼视力未见提高;最佳矫正视力由术前的０．１７±０．１０提高至术后的０．３７±０．２２（Ｐ＜０．０５）。黄斑中心凹厚度也由术前的（４９８．０７±１１６９５）μｍ降至术后的（３２９．４６±１１１．１５）μｍ,差异有统计学意义（ｔ＝７．７３０,Ｐ＜０．０５）。线性相关分析发现术后最佳矫正视力的好坏与术后黄斑中心凹厚度呈明显的线性相关（ｒ＝０．４１３,Ｐ＝０．０２９）。大部分患者在随访期内黄斑中心凹黄斑厚度未能降至正常。结论　黄斑前膜剥除术可以很好地改善患者的视功能,明显改善黄斑中心凹结构,但是大部分患者黄斑中心凹厚度未能完全恢复正常。     

一氧化碳中毒性脑病的MRI弥散加权成像表现与预后的关系

目的 探讨一氧化碳中毒(COP)性脑病的磁共振弥扩散加权成像(MQ-DWI)表现与预后的关系。方法对34例COP性脑病患者的磁共振影像学、临床表现及预后进行回顾性分析。结果 所有患者均及时给于高压氧和药物对症治疗。13例轻度中毒者经临床治疗后均痊愈,随访1~2个月无异常;5例中度中毒者随访3~6个月,其中1例出现迟发性脑病,4例痊愈;16例重度中毒者随访3~6个月,13例出现COP迟发性脑病(4例死亡),3例痊愈。影像学表现:单纯基底节区受累(10例)及单纯脑皮层受累(2例)患者,MR表现均表现为对称性稍长T1稍长T2信号,均痊愈;单纯脑白质受累(3例),MR表现为双侧大脑白质内对称性稍长T1稍长T2信号,DWI为稍高信号,2例痊愈,1例出现迟发性脑病;双侧基底节区及脑白质或双侧基底节区及脑皮层同时受累(16例),MR表现为受累区域对称性稍长T1稍长T2信号,FLAIR序列及DWI均为高信号,3例痊愈,13例出现COP迟发性脑病(4例死亡);MR表现为正常3例,FLAIR序列及DWI未见明显高信号,均痊愈。结论 MR-DWI对COP性脑病患者的预后判断有重要的临床价值,DWI信号越高,预示着脑白质脱髓鞘改变越严重、发生迟发性脑病的概率越大、临床预后也越差。     

内皮抑素对小鼠脉络膜新生血管抑制作用的信号通路分析

目的探讨内皮抑素对C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管抑制作用的基因表达及作用机制。方法应用532 nm固体激光机,制造C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管模型,分为空白组、对照组和实验组。其中空白组不做任何处理,对照组玻璃体腔内注射生理盐水2μL;实验组玻璃体腔内注射内皮抑素2μL(0.01 mg)。将对照组和实验组小鼠组织选取4个样本进行杂交及基因芯片检测。比较实验组和对照组基因表达的差异,选取其中表达差异大于1.5倍且P≤0.05的基因。结果免疫组织化学染色可见实验组新生血管表达明显低于对照组。实验组与对照组相比上调的基因有116个,下调的基因有106个。通过KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对上述差异基因经行分析后发现,实验组与对照组相比下调处于前10位的通道有:细胞骨架激动蛋白的校准、白细胞穿越内皮细胞层、金黄色葡萄球菌感染、Fc epsilon RI信号通路、Fc gamma R信号调理吞噬作用、Toll样受体信号通路、2型糖尿病、子宫内膜癌、吞噬体、非小细胞肺癌;处于上调前几位的通道有:细胞外基质受体相互作用、叶酸的一碳单位、肥厚性心肌病、扩张型心肌病、组氨酸新陈代谢、黏着斑、心肌细胞收缩。结论由通道功能分析可以推测,内皮抑素可能通过抑制内皮细胞的活性及移行并协同抑制免疫系统,进而抑制新生血管的生成。     

前节光学相干断层扫描仪观察原发性闭角型青光眼激光虹膜周边切除术后前房形态的改变

目的通过前节光学相干断层扫描仪(AS-OCT)观察原发性闭角型青光眼(PACG)激光虹膜周边切除术(LPI)后前房形态的改变。方法 30例(30只眼)PACG患者均行LPI,于行LPI前、后1周使用AS-OCT检查前房深度(ACD)、晶状体膨隆高度(CLR)、房角开放距离(AOD)、虹膜小梁空间面积(TISA)及瞳孔直径(PD),观察LPI前后前房形态的改变。结果手术前眼压为(15.923±2.028)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),术后1周为(14.523±1.650)mmHg,术后1周眼压显著低于术前,差异有统计学意义(P<0.05)。LPI前患者ACD、CLR、PD与手术后1周比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。LPI后1周患者鼻侧AOD500、颞侧AOD500、鼻侧AOD750、颞侧AOD750、鼻侧TISA500、颞侧TISA500、鼻侧TISA750、颞侧TISA750及双侧平均AOD500、AOD750、TISA500、TISA750均显著大于手术前,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 LPI可以显著改善PACG患者眼前房结构,AS-OCT可以客观准确地观察PACG患者的前房形态。