3‘—甲基—4—二甲氨基偶氮苯对大鼠肝脏磷脂代谢的影响

探讨３‘－甲基－４－二甲氨基偶氮苯诱发大鼠肝癌过程中肝脏磷脂代谢的变化。用３’－Ｍｅ－ＤＡＢ诱发Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝癌，同时辅以低胆碱饮食，ＴＬＣ分离磷脂组分，Ｒｏｕｓｅｒ法测定第６，９，１２，１６，２０周肝脏中总磷脂及各磷脂组分含量。结果：发现诱癌组总磷脂和磷脂酰胆碱的含量不断下降，且两者变化一致；     

雌激素受体β亚型对人乳腺癌细胞株生物学特性的影响（摘要）

目的探讨雌激素受体β亚型（ERβ）对人乳腺癌细胞株生物学特性的影响和作用机制。方法构建ERβ稳定高表达的MDA—MB-435细胞株。运用噻唑蓝（MTT）法、流式细胞术和Transwell等方法，观察不同雌激素浓度下ERβ对该细胞株增殖、侵袭和转移特性的影响。采用RT—PCR和（或）Westernblot、明胶酶谱技术检测相关基因的表达水平。结果ERB可显著提高MDA—MB-435细胞的增殖速度和侵袭迁徙能力，且呈非雌激素依赖性。与对照细胞相比，ERβ高表达的细胞s期比例显著增多（P=0．01）；β21 mRNA表达水平降低33．3％（P=0．03），蛋白表达水平降低47．4％（P=0．02）；基质金属蛋白酶（MMP）-9mRNA表达水平增高91．3％（P〈0．01），活性增高67．3％（P=0．02）；Ets-1 mRNA表达水平增高62．2％（P=0．01），蛋白表达水平增高51．0％（P=0．01）；cyclinA、cyclinE、cyclinD1、MMP—1、MMP-2、MMP-7、血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在mRNA水平未见明显差异。结论ERβ有促进乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移的作用。降低β21的表达、增加Ets—1和MMP-9的表达并增强MMP-9的活性是其可能的作用机制之一。     

二肽肽酶I研究进展

二肽肽酶I（dipeptidyl peptidase I，DPPI）也叫组织蛋白酶C（cathepsin C），是溶酶体内一种重要的内切蛋白酶。研冤表明，DPPI参与多种细胞（T细胞、肥大细胞等）颗粒内丝氨酸蛋白酶的翻译后处理和激活，以及其他蛋白的降解过程，从而在机体的细胞免疫、炎症反应等一系列病理生理过程中起到重要作用。人DPPI基因的突变失活与三种罕见的遗传病（帕．勒氏综合征等）密切相关。对DPPI的选择性抑制有希望成为一种有效的治疗手段，用于免疫调节、慢性炎症和细胞毒淋巴细胞瘤等疾病。     

DPPI抑制剂高通量筛选模型的建立和应用

目的：建立并应用DPPI抑制剂高通量筛选模型。方法：DPPI（2．25μM）与dipeptide AMC（2．5μM）在反应缓冲液（NaAc50mM，PH5．5，NaCl 30mM，EDTA 1mM，DTT 1mM）中37℃温孵30min，总体积80μL。在波长370nm／450nm处检测荧光强度。结果：成功建立一种快速稳定、灵敏度高、操作简单的DPPI抑制剂高通量筛选模型（Z’=0．87），并应用该模型对本中心化合物库10745个化合物进行了筛选，得到12个活性较好的化合物。结论：对DPPI的选择性抑制有望用于免疫／炎症相关疾病的治疗，我们筛选得到的活性化合物具有进一步研究开发的价值。     

肿节风抗肿瘤活性部位的化学成分

目的:研究肿节风(Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai)抗肿瘤活性部位及其化学成分。方法:用DA201大孔树脂柱分离部位,从体内动物瘤实验确定抗肿瘤活性部位;采用各种色谱方法对活性部位的化学成分进行分离,根据理化常数和波谱数据鉴定化合物结构。结果:95%乙醇洗脱部位具有显著的抗肿瘤活性,从此活性部位共分离得到13个化合物,分别鉴定为:3,3′-双异秦皮定(3,3′-biisofraxidin,1),球松素(pinostrobin,2),异秦皮定(isofraxidin,3),棕榈酸(palmitic acid,4),白术内酯Ⅲ(atractylenolide Ⅲ,5),金粟兰内酯E(chloranthalactone E,6),正十五烷酸(pentadecanoic acid,7),5-羟基-7,4′-二甲氧基二氢黄酮(5-hydroxy-7,4′-dimethoxyflavanone,8),伊斯坦布林A(istanbulin A,9),2′,4′-二羟基-6′-甲氧基二氢查尔酮(uvangoletin,10),6,7-二甲氧基香豆素(scoparone,11),β-谷甾醇(β-sitosterol,12),胡萝卜苷(daucosterol,13)。结论:化合物1为新化合物,化合物5,7,11为首次从该植物中得到,化合物1~7、9~11对抑制肿瘤细胞生长有弱效。     

大鼠实验性肝癌发生过程中整联蛋白表达的变化

目的研究３′ＭｅＤＡＢ诱发大鼠肝癌过程中整联蛋白的表达变化。方法利用免疫组织化学ＰＡＰ方法检测整联蛋白α１、α２、α３、α５的表达。结果正常大鼠肝细胞表达α１、α５；肝硬化时，肝细胞α１，α５表达增强外，还表达α２、α３，增生胆管细胞表达α１、α５；在癌前期增生结节及癌时，整联蛋白α１、α２、α３、α５都明显表达减弱；肺脏、膈肌等转移灶整联蛋白表达与原发灶相比，α１、α５表达增强。结论整联蛋白α１、α５的表达变化与肿瘤发生及浸润转移有密切关系。     

全长及细胞内磷酸化位点缺失的人组织因子真核表达重组质粒的构建及其生物学功能

目的： 研究组织因子(tissue factor,TF)细胞内区域的功能,分析TF细胞内区域对人乳腺癌细胞MCF-7迁移能力的影响。方法： Trizol一步法抽提人乳腺癌细胞MDA-MB-231总RNA,RT-PCR扩增TF全长(TF full-length)基因和TF细胞内磷酸化位点缺失(TF truncated)基因,分别克隆入pGEM-T载体,再构建人TF full-length基因和TF truncated基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-TF full-length和pcDNA3.1(+)-TF truncated。将构建好的pcDNA3.1(+)-TF full-length和pcDNA3.1(+)-TF truncated瞬时转染MCF-7细胞,RT-PCR和Western blotting鉴定重组质粒的表达,并用发色底物法检测瞬时转染后TF的促凝血功能。利用Transwell小室检测转入人TF full-length基因和TF truncated基因后MCF-7细胞的迁移能力。结果： 扩增出人TF full-length基因和TF truncated基因,成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),并且在MCF-7细胞中表达后具有促凝血活性。瞬时转染pcDNA3.1(+)-TF truncated不能增加MCF-7 细胞的迁移能力,而转染 pcDNA3.1(+)-TF full-length后可以显著增强MCF-7细胞的迁移能力。结论： 成功构建了带有人TF full-length,TF truncated基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-TF full-length和pcDNA3.1(+)-TF truncated,为研究TF以及其细胞内磷酸化位点区域在肿瘤学中的作用奠定了基础。     

体外模拟实体瘤内环境对肿瘤相关成纤维细胞的影响

目的:实体瘤内部环境是由很多复杂因素共同构成的.肿瘤相关成纤维细胞在实体瘤中数量丰富,它们通过自分泌和旁分泌途径与肿瘤细胞产生相互影响,在促进肿瘤发生和演进过程中起到了不可忽视的作用.缺氧是实体瘤内实际存在的环境之一,与肿瘤的不良预后密切相关.基于此,我们用更贴近实体瘤内环境的缺氧共培养模型,研究缺氧和肿瘤细胞共同作用于肿瘤相关成纤维细胞后对肿瘤相关成纤维细胞的影响.方法:采用Transwell共培养小室,将人高转移肺癌细胞95D与人肺成纤维细胞进行缺氧共培养,分别用MTT法和BrdU法观察对成纤维细胞增殖情况的变化,Western Blot检测细胞增殖相关的蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的改变;采用ELISA法检测成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的改变;PCR和Western Blot法检测成纤维细胞内肝细胞生长因子的变化.结果:缺氧共培养后,成纤维细胞的增殖增强,AKT水平无明显变化,但是激活状态的p-AKT表达量上调;成纤维细胞分泌MMP2和MMP9的量均有增加;PCR和Western Blot检测在缺氧共培养一小时后肝细胞生长因子(HGF)表达显著上调.结论:与肿瘤细胞缺氧共培养可促进肿瘤相关成纤维细胞的增殖并明显增加成纤维细胞基质金属蛋白酶和肝细胞生长因子分泌.     

3''''-甲基-4-二甲氨基偶氯苯对大鼠肝脏磷脂代谢的影响

探讨3'—甲基—4—二甲氨基偶氮苯（3'－Me－DAB）诱发大鼠肝癌过程中肝脏磷脂代谢的变化。用3'－Me－DAB诱发Wistar大鼠肝癌，同时辅以低胆碱饮食，TLC分离磷脂组分，Rouser法测定第6、9、12、16、20周肝脏中总磷脂及各磷脂组分含量。结果：发现诱癌组总磷脂和磷脂酸胆碱（PC）的含量不断下降，且两者变化一致；鞘磷脂（SM）在3'—Me—DAB加普通饮食组（A组）诱癌早期即迅速增高，超过对照组约1倍，并一直维持至肝癌形成，而在3'—Me—DAB加低胆碱饮食组（B组）虽然早期也升高，但当第20周肿瘤发生转移时降至对照组以下；溶血磷脂酰胆碱（LPC）仅在B组晚期出现下降。不含胆碱基因的磷脂组分：磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰丝氨酸（PS）和磷脂酰肌醇（PI）在3'—Me—DAB诱癌晚期均降低，B组尤为明显。缩醛磷脂的含量在整个诱癌过程中未见明显变化。结论：3'－Me－DAB诱发大鼠肝癌过程中主要影响PC和SM的代谢，表现为PC降低，SM增高。低胆碱饮食能缯强3'—Me—DAB对大鼠肝脏磷脂代谢的影响。     

重组人p43蛋白抗血管生成活性及其机制

为了研究重组人p43(YS-1)蛋白对血管生成的影响及其机制,并考察其对肺癌实体瘤的抑制作用。采用内皮细胞增殖实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、大鼠动脉环体外实验、鸡胚尿囊膜体内实验考察YS-1的抗血管生成作用;采用Western印迹法检测细胞内磷酸化MEK1/2、Akt蛋白质的表达;选用人肺腺癌A-549裸小鼠移植瘤模型检测YS-1的体内抗肿瘤活性。结果发现,YS-1能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,可以抑制体外培养的大鼠动脉环微血管样结构及鸡胚尿囊膜血管,YS-1可以明显抑制血管内皮生长因子（VEGF）诱导的内皮细胞中VEGFR2及下游MEK1/2及Akt的磷酸化,YS-1高剂量(10mg/kg)能显著抑制肺癌A549移植瘤的生长。研究结果表明：YS-1能抑制人肺腺癌A-549裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能跟抑制VEGF引起的VEGFR2活化及信号转导而影响血管生成有关。