CD40不同形式的活化对CD40突变的RPMI8226细胞增殖和表型的影响

目的 分析CD40抗体或配体不同形式刺激对RPMI8226细胞增殖及表面共刺激分子和黏附分子表达的影响,探讨RPMI8226细胞CD40基因突变在其生物学行为中的作用.方法 用RT-PCR方法和DNA序列测定检测RPMI8226细胞CD40基因突变体,分析RPMI8226细胞经CD40抗体或配体四种不同方式(CD40单抗、CD40单抗包板、rhsCD40L和CD40L转基因细胞)刺激后,其体外生长曲线、细胞表型及细胞周期的变化,并利用激光共聚焦显微镜对RPMI8226细胞表面CD40信号转导体的形成进行初步分析.结果 RPMI8226细胞表达CD40突变体(TCA→TTA,Ser→Leu),但是该点突变并未影响hmuCD40的抗原表位.三种激发CD40活化的分子(CD40单抗、rhsCD40L和CD40L转基因细胞)并不影响RPMI8226细胞的体外增殖,但是CD40单抗包板能明显抑制RPMI8226细胞的增殖[(2.5±0.6)×105 vs (7.8±1.2)×105,P＜0.05],并产生明显的G1期阻滞[(58.0±3.6)% vs (42.0±2.3)%,P＜0.05].RPMI8226细胞上黏附分子和共刺激分子的表达无明显变化.激光共聚焦显微镜分析结果显示,在CD40被激活后能形成CD40信号传导的复合体.结论 RPMI8226细胞高表达一种CD40基因突变体,该突变体能在被激活后形成相应的信号传导复合体.     

LDLR基因配体结合区多态性与丙型肝炎病毒易感性的相关研究

目的探讨低密度脂蛋白受体(LDLR)基因是否存在与丙型肝炎病毒(HCV)感染有关的单核苷酸多态性(SNP).方法利用PCR结合DNA自动测序对HCV感染者和正常人的LDLR基因的配体结合区进行分析.结果没有发现与HCV感染相关的多态性位点.结论LDLR基因的配体结合区与(HCV)感染的易感性无关.     

CD81外显子6、7、8在中国人丙型肝炎病毒感染中单核苷酸多态性的研究

目的 探讨CD81在中国人丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV)感染中是否存在遗传易感性。方法 针对人和非洲绿猴的CD81有4个氨基酸位点（163、186、188、196）不同，而非洲绿猴不感染HCV，以正常人群和HCV感染阳性患者的基因组DNA为研究对象，用PCR结合DNA测序的方法对以上4个氨基酸对应的CD81基因位点进行分析。结果 在CD81外显子6、7、8没有发现单核苷酸多态性；尽管在一部分内含子6和3′端调控区发现了3个多态位点：11028G／T、11860C／T、11960G／A，但它们与HCV的感染无关（P＞0．05）。结论 未见CD81外显子6、7、8与HCV感染的易感性相关；由于CD81蛋白的其它位点在种间是高度保守的，因此在中国人群中CD81蛋白的多态性稀少或不存在。     

大鼠4-1BBLcDNA的克隆、分析及染色体定位

目的克隆、分析并染色体定位肿瘤坏死因子配体超家族（Tumor Necrosis Factor Superfamily，TNFSF）成员4-1BBL分子。方法在对小鼠、人4-1BBLmRNA进行生物信息学分析的基础上，采用PCR扩增、T载体克隆测序等实验技术，并用软件对基因进行了拼接、序列分析及同源性比较，同时通过荧光原位杂交（FISH）技术对该基因进行了染色体定位。结果首次获得了具有完整开放阅读框的大鼠eDNA，GenBank登录号为No．AY259541，通过同源性比较分析，证明该基因与小鼠高度同源，编码区的核苷酸序列与小鼠、人的同源性分别为88％、37％。推导出的大鼠4-1BBL蛋白质由308个氨基酸分子组成，分子量为33469d，胞外区有三个潜在的N糖基化位点：AA138，AA160和AA292，是典型的Ⅱ型糖蛋白，与小鼠、人在氨基酸水平的同源性分别为83％、31％，其中胞质区为76％、32％，跨膜区为45％、40％，胞外区为87％、28％。该基因定位于大鼠染色体9q1（Gen Bank UniGene登录号为No．Rn．46783）。结论大鼠4-1BBL胞内区的“SDAA”可能发挥着TNF家族中具有逆信号的其他成员的胞内区酪氨酸激酶Ⅰ磷酸化位点“SXXS”的作用。大鼠4-1BBLcDNA的成功克隆与定位为探讨4-1BBL在免疫共刺激中的作用机制以及TNF分子的进化研究打下了基础。     

散发性乳腺癌BRCA1基因甲基化的研究

目的 研究散发性乳腺癌中BRCA1基因启动子区域的异常甲基化特性。方法 采用甲基化敏感的限制酶（methylation-sensitive restriction endonucleases,MSRES)法。结果 在34例散发性乳腺癌中有6例乳腺癌患者的BRCA1基因启动子区域出现了异常甲基化现象。结论 BRCA1基因的异常甲基化发生率较高，筛查BRCA1基因的异常甲基化对于乳腺癌患病风险评估、早期诊断及治疗具有重要的临床意义。     

LDLR基因配体结合区多态性与丙型肝炎病毒易感性的相关研究

目的：探讨低密度脂蛋白受体（LDLR）基因是否存在与丙型肝炎病毒（HCV）感染有关的单核苷酸多态性（SNP）。方法：利用PCR结合DNA自动对HCV感染者和正常人的LDLR基因的配体结合区进行分析。结果：没有发现与HCV感染相关的多态性位点。结论：LDLR基因的配体结合区与（HCV）感染的易感性无关。     

智能低下的病因分析

智能低下给家庭及社会带来严重危害，特别是影响人口素质的提高，脑及脑的发育是智力发育的物质基础，也是优生的首要前提，本文分析了影响智力发育的各种不良因素，包括遗传因素（染色体异常、基因突变），非遗传因素（生物、化学、物理）及孕妇患病、高龄、烟酒、高热、营养不良、近亲婚配、出生时难产、出生后小孩患病等，从而为优生优育工作提供科学依据。     

鼠抗人4-1BB单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

目的:鼠抗人4-1 BB分子功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定.方法:以高表达人4-1 BB分子的转基因细胞293T/4-1 BB为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,并以293T/4-1BB为阳性抗体筛选细胞,293T/mock为阴性抗体筛选细胞,经免疫荧光标记和流式细胞术(FCM)分析、反复筛选和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人4-1BB分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Western blot、间接免疫荧光法、竞争结合抑制试验、3H掺入和细胞凋亡分析等方法对mAb进行生物学特性的鉴定.结果:成功获得3株持续、稳定分泌鼠抗人4-1BB mAb的杂交瘤细胞株,命名为1G5、4B11和9F11.对mAb的生物学功能的研究结果表明,3株mAb均能识别活化T细胞和单核细胞来源的树突状细胞(Mo-DC)表达的4-1BB分子.mAb 4B11能有效地激发T细胞体外增殖、抑制其凋亡,并能促进Mo-DC体外扩增,上调CD80、CD83、CD86和CD1α的表达.结论:获得的3株分泌鼠抗人4-1BB mAb的杂交瘤,所分泌的抗体具有特异性地识别人4-1BB分子;其中4B1 1 mAb具有激发T细胞增殖及促进Mo-DC体外扩增与成熟的作用,为激发型4-1BB mAb.     

一个软骨发育不全家系成纤维细胞生长因子受体3基因突变分析

目的 基因水平上澄清一个不符合常染色体显性遗传病遗传规律的软骨发育不全家系患者的致病机理。方法 用聚合酶链反应技术扩增家系成员外周血基因组DNA成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor3，FGFR3)基因第10外显子，DNA序列分析寻找突变位点，然后经限制性内切酶Mae1分析验证。结果 患者外周血基因组DNAFGFR3基因第10外显子第1180位核苷酸发现一个A→T新突变，而家系正常成员包括先证者父母不存在此突变。结论 结合系谱分析，这一新突变可能是导致该家系患者软骨发育不全的原因。     

人4-1BB转基因细胞的构建及体外生物学功能的研究

目的构建人共刺激分了4-1BB转基因细胞并探讨4-1BB的体外生物学功能。方法利用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞总RNA中克隆出人4-1BB基因，经双酶切装入逆转录病毒载体pGEZ-Term中，重组逆转录病毒载体4—1BB／pGEZ-Term与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T．用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染晕新铺板的293T细胞，加入Zeocin选择性培养基进行筛选。经RT-PCR、Western blot、流式细胞仪表型检测等方法鉴定转基因细胞。^3H-TdR掺入法分析转基因细胞对T细胞的作用；DCs培养过程中，加入转基因细胞与激发型CI40单抗5C11．流式细胞仪分析DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达。结果成功构建了能稳定表达人4-1BB蛋白的转基因细胞4-1BB／293T，该转基因细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖，可协同5C11促进DCs的体外成熟，上凋DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达。结论稳定表达4—1BB蛋白的转基因细胞株的建立为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。