反义AFP增强子/TK基因重组逆转录病毒载体的构建及在肝癌细胞中的专一性表达

目的构建在肝癌细胞中特异性高表达的重组逆转录病毒载体,观察其对体外培养肝癌细胞生物学行为的影响。方法应用DNA重组技术将α-甲胎蛋白増强子(AFE)核心区DNA与单纯性疱疹病毒胸苷激酶(TK)基因融合,反向插入逆转录病毒载体pLXSN,重组体命名为pL/TK/AFE/SN;经PA317细胞包装、G418筛选、病毒滴度测定,挑选滴度高的抗性克隆细胞株扩增培养,收获病毒上清,感染体外培养的Hap3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞。用Southernblot、Northernblot检测转染细胞的DNA、mRNA,以羟甲基无环鸟苷(GCV)对细胞的杀伤毒性检测外源基因在转染细胞中的表达。结果酶切及Southernblot证实插入pL/TK/AFE/SN的反义AFE/TK基因大小、方向及克隆位点正确。达到一定的产病毒滴度。Northernblot分析显示Hep3B肝癌细胞有TK基因mRNA水平表达;应用GCV后,导入反义AFE/TK基因的Hep3B肝癌细胞生长明显受抑制(P<0.01)。结论成功构建了含反义AFE/TK基因的重组逆转录病毒载体并包装出具有感染能力的假型逆转录病毒;重组载体所含的反义AFP増强子能调控外源性TK基因特异地在Hep3B肝癌细胞中高表达。     

磁处理水预防动脉粥样硬化的作用机制探讨

目的观察家兔动脉粥样硬化(AS)模型中血脂变化与主动脉内膜厚度的关系及磁处理水在其中的影响,探讨磁处理水预防AS的作用机制.方法喂高脂饲料复制家兔AS模型并给饮磁处理水共100d,于实验前即0d,33d及99d测定家兔血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)水平.测量主动脉内膜厚度并计算其与主动脉直径的比值(AIT/AD),分析AIT/AD与TC、TG、LDL-c、HDL-c的关系.结果饮磁处理水明显降低血浆TC、LDL-c及AIT/AD(预防组q=6.16,6.63和6.39,P＜0.01;治疗组q=4.83,5.85和4.86,P＜0.001).AIT/AD与TC、LDL-c及TG呈显著正相关(r=0.822,0.815,P＜0.001;TGr=0.458,P＜0.01).经多元逐步回归分析显示LDL-c与AIT/AD呈极显著回归关系(B=0.006,P＜0.001).结论磁处理水能调整血脂、抑制高脂饲料所致的家兔AS形成.提示磁处理水抑制AS的作用很可能是通过降低血浆LDL-c来实现的.     

携带反义甲胎蛋白增强子/单纯疱疹病毒胸苷激酶基因的产病毒细胞系的建立及对肝癌细胞的靶向杀伤效应

目的建立对肝癌细胞具有靶向调控的高感染性和高分泌性产病毒细胞系。方法将重组反义甲胎蛋白增强子/单纯疱疹病毒胸苷激酶基因逆转录病毒载体(pL/TK/AFE/SN)转染至PA317包装细胞,经G418(400mg/L)筛选、病毒滴度测定。以病毒上清感染培养的Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞,并抽提细胞基因组DNA作Southernblot分析;观察GCV(100mg/L)对细胞生长的影响。结果转染pL/TK/AFE/SN的PA317细胞经G418筛选2周获阳性克隆;病毒滴度为5.4×104～3.8×105CFU/ml。Southern杂交证实前病毒已完整整合于PA317细胞,并稳定整合于Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞中。导入AFE/TK基因的Hep3B肝癌细胞经GCV作用后的存活率在2、4、6d时分别降低35%、87%、95%,生长明显受抑制(F=7.23,P<0.01)。结论携带AFE/TK基因的产病毒细胞系能够成功地将AFE/TK基因转移到感染细胞中。     

肺动脉高压与肺心病

对280只肺心病模型兔中的96只在处死时直接测肺动脉压,X=16.022±5.038,与26只正常对照组兔进行统计学处理,X=15.64±2.245,P>0.05,无显著差异,但肺动脉压徘徊在7～40cm水柱,波动幅度大。在96只测压兔中超过21cm水柱的有12只,我们认为这12只已发展为肺动脉高压和肺心病。此外,又对去年研制的肺心病模型中的37只测定了肺动脉压,与对照组进行统计学处理,P<0.01,有非常显著意义,说明这些     

穴位埋磁对家兔精子质量的影响

在雄性家免足三里（双侧）及关元穴位埋磁片90d，检测其对家兔精子密度、精子活力、精子存活率的影响，结果显示，埋磁家免精子的各项指标都明显高于对照组，提示穴位埋磁有提高家免精子质量的作用。     

癌细胞表面表达人绒毛膜促性腺激素的免疫荧光检测

目的筛选可供体外和动物体内肿瘤抑制试验的候选癌细胞株。方法通过间接免疫荧光法，用兔抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)多克隆免疫球蛋白(IgG)和小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白(IgG)，对人结(直)肠癌细胞(HCT15、HCT116、KM12、WiDr、LoVo、LS-174)、前列腺癌细胞(PC3)、小细胞肺癌细胞(A549)的细胞表达hCG情况进行检测。结果被检的8个癌细胞株均对兔抗hCG多克隆免疫球蛋白(IgG)呈阳性反应。其中4株结(直)肠癌细胞(HCT115、HCT116、Lo-Vo、LS-174)和小细胞肺癌(A549)能被小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白染色。结论这5株能与小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白结合的细胞株都适用于以后的肿瘤杀伤试验。     

家兔急性弥漫性血管内凝血模型的研究

本研究采用组织凝血活酶注射于家兔耳静脉以形成急性DIC 模型,发现注射后凝血时间和部分凝血活酶时间显著延长,纤维蛋白原和血小板迅速减少,而FDP 则迅速增加。纤维蛋白原和FDP 呈负相关改变,这两指标的动态观察有助于急性DIC 的诊断。此急性DIC 模型具有反应急速和剧烈的特点,而存活的动物恢复亦较快;主要病理改变为肺部广泛微血栓形成,以注射后即刻的改变最显著。     

磁处理水对家兔实验性动脉粥样硬化的影响

目的探讨磁处理水对家兔实验性动脉粥样硬化(AS)的影响。方法将新西兰雄性白兔随机分为4组即对照组、模型组、预防组和治疗组。以高脂饲料复制家兔AS模型,分阶段给饮磁处理水,检测血中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)含量并观察主动脉内膜病理学改变;测量主动脉内膜脂斑脂纹、粥样灶面积及动脉内膜厚度。结果预防组和治疗组血浆LDL-c比模型组明显降低(q=7.94,6.28,P＜0.01),主动脉内膜脂质沉积减少(q=16.99,16.62,P＜0.01),粥样斑块形成面积减小（q=13.06,14.98,P＜0.01）,内膜增生程度减轻（q=9.89,10.35,P＜0.01）。结论提示磁处理水在家兔实验性AS的预防中起一定作用。     

肺心病时肺血管的改变

对注射三氯化铁研制肺心病模型的家兔150只进行病理学及有关检查。血管阻塞性改变包括血管痉挛、血栓形成(三氯化铁血栓、透明血栓、血小板血栓、纤维蛋白血栓、白细胞血栓、废质性血栓和混合血栓等)并可见机化。主要发生于肺膜下毛细血管和小血管,肌性动脉甚至弹性动脉也可有血栓形成和机化,此与人类肺心病类同。血管痉挛和血栓形成是微循环障碍的形态学表现,可引起肺组织营养不     

磁处理水对家兔实验性高LDL—C血症及主动脉内膜病变的影响

目的 探讨磁处理水对家兔实验性高低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C）血症及主动脉内膜病变的影响。方法 将27只新西兰雄性大白兔随机平均分为对照（N）组、模型（AS）组和预防（MW）组,以高脂饲料喂养复制家兔动脉粥样硬化AS,MW组家兔喂高脂饲料同步软磁处理水。分阶段检测各组家兔血浆LDL－C含量,并观察其主动脉内膜病理学改变。结果 MW组血浆LDL－C水平明显较AS组较低（P＜0．01）,MW组主动脉内膜脂质沉积及粥样斑块形成面积较AS组减少（P＜0．01）,内膜增生程度较AS组减轻（P＜0．01）。结论 提示磁处理水在家兔实验性高LDL－C血症及AS的预防中起一定作用。