间充质干细胞通过CCL5/CCR5信号途径促进骨肉瘤Saos-2细胞迁移和生长

目的 研究人间充质干细胞(hMSC)对骨肉瘤Saos-2 细胞迁移与增殖的影响及其机制.方法 取传代培养的hMSC 和Saos-2 细胞,分别制备hMSC 条件培养基(MSC-CM)和Saos-2 细胞条件培养基(Saos-2-CM).采用免疫荧光细胞化学方法 和双抗体夹心ELISA 方法 分别检测hMSC CCL5 趋化因子的表达及其表达水平,蛋白质免疫印迹方法 检测Saos-2 细胞CCR5 因子的表达.按条件培养基的不同将Saos-2 细胞分为4 组:含10% 胎牛血清的α-MEM 培养基(阴性对照)、Saos-2-CM(阳性对照)、MSC-CM、含24 ng/ml 兔抗人CCL5 抗体的MSC-CM(MSC-CM/anti-CCL5 Ab),应用Transwell实验和噻唑蓝(MTT)法分别检测hMSC 对Saos-2 细胞迁移与增殖能力的影响.实验均重复3 次.结果 免疫荧光细胞化学方法 和双抗体夹心ELISA 检测显示,hMSC CCL5 因子表达阳性且其表达水平为3.68 pg/ml.蛋白质免疫印迹检测显示,Saos-2 细胞CCR5因子表达阳性.Transwell 实验和MTT 检测结果 显示,MSC-CM 能明显促进Saos-2 细胞的迁移与增殖,而MSC-CM/anti- CCL5 Ab 组Saos-2 细胞的迁移与增殖能力均明显下降,2 组间差异均有统计学意义(分别为P < 0.01,P < 0.05).结论CCL5/CCR5 信号途径在hMSC 促进Saos-2 细胞迁移与增殖过程中发挥关键作用,抑制CCL5 趋化因子的表达可明显降低Saos-2 细胞的迁移与增殖能力.     

张力刺激对关节软骨细胞β-肌动蛋白mRNA表达的影响

目的 观察张力刺激对关节软骨细胞β-肌动蛋白(β-aetin)mRNA表达的影响.方法 分别获取正常和骨关节炎关节软骨细胞,给予3%、6%和15%的张力刺激,运用实时定量PCR方法检测不同张力刺激强度下关节软骨细胞β-actin mRNA表达的变化.结果 6%和15%的张力刺激均可明显提高lE常关节软骨细胞β-actinmRNA表达(1.34±0.05,1.36±0.04,P＜0.05),而只有15%的张力刺激才能明显增加骨关节炎关节软骨细胞β-actin mRNA表达.结论 关节软骨细胞β-actin mRNA表达量随张力刺激强度不同而变化,不同内外环境使关节软骨细胞对张力刺激的反应不同,故在其相关生物力学研究中不能应用β-actin作为内参.     

AMPK信号通路对骨代谢的调节作用

最近越来越多的证据显示骨质疏松症可能与肥胖症类似,也与能量代谢紊乱相关。而腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是维持细胞能量平衡以及调节多种代谢相关激素的重要分子,AMPK激活后可以开启分解代谢通路以产生更多的ATP,同时会关闭合成代谢通路以减少ATP的消耗。已知AMPK不仅能被脂肪细胞分泌的脂联素和瘦素激活,还能被抗糖尿病类药物二甲双胍和噻唑烷二酮类激活,而这些脂肪因子和药物都能影响骨代谢,同时最近的研究也表明AMPK信号通路对骨代谢有调节作用。体外激活AMPK可以影响成骨,基因敲除AMPKα或β亚基会使小鼠骨量降低,骨形成和骨吸收同时增加但伴有骨重建的负平衡,但是其中涉及的具体机制并不明确。本文就AMPK的结构和功能、在骨组织细胞中的作用、与成骨成脂分化平衡的关系作一综述,并分析AMPK通路作为骨质疏松症潜在治疗靶点的可能性。     

1,2-二氯乙烷吸入染毒对SD大鼠肝脏遗传损伤效应及代谢酶表达的影响

目的研究1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)吸入染毒对SD大鼠肝脏的遗传损伤作用及代谢酶表达的影响。方法SPF级健康成年SD雄性大鼠30只,按体重随机分为对照组(n=8)、低剂量组(n=11)和高剂量组(n=11)。采用口鼻式动式吸入染毒法,低、高剂量组分别给予质量浓度为600和1 800 mg/m~3的1,2-DCE染毒8h/d,连续7d;对照组采取相同处理方式吸入正常空气。实验结束后,利用实时荧光定量PCR技术检测代谢酶及遗传损伤相关指标p53的m RNA表达改变。结果实时荧光定量PCR结果显示,1,2-DCE染毒后高剂量组大鼠肝脏中Ⅰ相代谢酶细胞色素P4502E1(CYP2E1)、乙醇脱氢酶1(ADH1)、乙醛脱氢酶3α1(ALDH3α1)、Ⅱ相代谢酶谷胱甘肽S-转移酶A1(GSTA1)、谷胱甘肽S-转移酶M1(GSTM1)、谷胱甘肽S-转移酶A3(GSTA3)以及遗传损伤相关基因p53 m RNA表达均被诱导升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论CYP2E1、ADH1、ALDH3α1、GSTA1、GSTM1和GSTA3是1,2-DCE的主要代谢酶,其表达量可以被1,2-DCE染毒诱导而发生改变,p53信号通路所介导的遗传损伤应激可能参与了1,2-DCE诱导大鼠肝细胞坏死或凋亡的过程。     

利用光学成像系统非侵入性监测乳腺癌细胞在骨环境内的生长情况

目的应用稳定表达红色荧光蛋白的人乳腺癌MDA-MB-231SArfp细胞系,建立乳腺癌骨移植瘤动物模型,并应用活体成像技术检测肿瘤的生长情况。方法注射MDA-MB-231SArfp细胞于BALB/c雌性裸小鼠胫骨髓腔,应用活体光学成像系统,连续观察肿瘤细胞在体内的生长情况,同时测量肿瘤体积的变化;4周和7周时拍摄X线片并做组织学检查,评估肿瘤对骨组织的影响。结果利用活体光学成像系统监测发现,至第3~4周期间,肿瘤进入对数生长期;肿瘤大小与荧光信号强度呈线性正相关。X线片和组织切片显示MDA-MB-231SArfp细胞形成溶骨性的骨破坏。结论成功建立了可非侵入性监测的乳腺癌骨移植瘤模型,利用活体光学成像系统结合X线片及组织学检查能够直观、连续、准确地检测肿瘤细胞在骨环境内的生长情况,为后续抗肿瘤药物的筛选和评价提供了新的手段和工具。     

GE数字减影血管机导管床故障两例

导管床是血管机的重要组成部分,故障率相对较高.本文介绍了导管床的故障现象及分析过程、处理方法.     

低氧导致培养心肌细胞Na+通道基因SCN5A mRNA表达改变

目的研究低氧培养大鼠心肌细胞Na 通道基因SCN5A mRNA表达的变化,并探讨其与丙二醛(M alond ialhyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide d ismutase,SOD)活性的关系。方法培养大鼠心肌细胞,检测各组培养液氧分压。用RT-PCR检测SCN5A mRNA表达,检测培养液MDA含量和细胞SOD活性。结果与对照组相比:SCN5A mRNA相对表达量低氧1 h和6 h组显著增高(P<0.001)、低氧12 h和24 h组显著降低(P<0.001);MDA含量显著增高而SOD活性显著降低。结论心肌细胞Na 通道基因SCN5A在低氧1 h和6 h mRNA表达上调,而在低氧12 h和24 h mRNA表达下调,且与脂质过氧化和SOD相关。     

硒对异丙肾上腺素致损伤大鼠心肌SCN5A基因表达的影响

目的研究异丙肾上腺素(ISP)致大鼠心肌损伤模型中,编码电压门控Na 通道α亚单位基因SCN5A表达的变化,以及硒对其表达的影响。方法24只Wistar大鼠雌雄各半,随机分为3组,即对照组、ISP组、硒 ISP组。测定心肌丙二醛(MDA)的水平;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot方法检测心肌SCN5A基因的表达变化。结果与ISP组比较,硒 ISP组MDA显著降低(P<0.05),但高于对照组(P<0.05);ISP组SCN5A基因mRNA和蛋白的表达均较对照组显著增加,而硒 ISP组降低其表达。结论异丙肾上腺素可使心肌SCN5A基因mRNA和蛋白的表达显著增高;硒对异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤有保护作用并能逆转ISP引起的SCN5A基因表达的改变。     

GE数字减影血管机导管床故障两例

导管床是血管机的重要组成部分,故障率相对较高。本文介绍了导管床的故障现象及分析过程、处理方法。     

恒定磁场对脑缺血再灌注大鼠血液流变学指标及红细胞膜流动性影响的研究

目的：对脑缺血再灌注大鼠应用恒定磁场后，研究血液流变学指标、红细胞膜流动性等各项指标的变化。方法：实验动物分三组，每组十只，对照组做假手术，再灌组、恒磁组参考Longa法制备局灶性脑血再灌注模型（恒磁组大鼠于脑缺血2小时再灌注后立即置于40mT的恒磁场中照射30min，每天一次）。7天后眶静脉取知进行观察。结果：再灌注ηH（全血高切粘度）、ηL（全血低切粘度）、Fg(纤维蛋白原含量）、η（平均微粘度）显著高于对照组（P＜0．01），恒磁组与再灌组比较ηH（全血高切粘度）、ηL（全血低切粘度）、Fg（纤维蛋白原含量）、η（平均微粘度）；HC（细胞压积）显著下降（P＜0．01；P＜0．05）。结论：恒磁场可降低血液粘度，提高红细胞膜流动性，改善血液流变学特性，增加脑血流量，对脑缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。