白花蛇舌草对巨噬细胞Cxcl1基因表达的影响及机制的初步研究

目的通过研究白花蛇舌草对巨噬细胞细胞因子表达的影响及Toll样受体4(TLR-4)炎性信号转导通路的影响,探索白花蛇舌草的免疫调节作用,为新药研发提供实验和理论基础。方法用白花蛇舌草水提液作用小鼠腹腔巨噬细胞,RT-PCR法检测3种常见细胞因子白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)、Cxcl1的表达。然后用Autodock软件分析白花蛇舌草主要成分与TLR-4的相互作用,得出白花蛇舌草的主要活性物质对于TLR介导的信号通路的作用机理,从而得出白花蛇舌草对巨噬细胞炎症因子释放以及吞噬功能的影响。结果白花蛇舌草能上调Cxcl1基因的表达,其主要成分豆甾醇-β-D-葡萄糖苷、反式4-甲基肉桂醇、车叶草苷酸可以与TLR-4受体结合。结论白花蛇舌草可以激活TLR-4信号通路,从而影响Cxcl1的表达及巨噬细胞功能,因此推测白花蛇舌草有调控免疫的作用。     

流动引物PCR高效筛选阳性XRCC1基因敲除小鼠细胞的方法

[目的]探索流动引物PCR筛选阳性XRCC1基因敲除细胞的可行性。[方法]构建基因敲除质粒,嘌呤霉素抗性基因5’端加上额外的来自野生型基因被敲除位点内的20 bp DNA序列。使用流动引物(floating primer)和这20 bp序列结合,PCR筛选阳性克隆。[结果]利用流动引物成功筛选小鼠体细胞XRCC1(X射线修复交叉互补蛋白)一个等位基因敲除的阳性克隆子。[结论]流动引物PCR方法可以应用于基因敲除小鼠体细胞的筛选。     

病毒感染引起血小板减少性紫癜的主要机制

已知特发性、免疫性血小板减少性紫癜 (ＩＴＰ)发病前常有病毒感染史如风疹、水痘、流行性腮腺炎、传染性单核细胞增多症以及活病毒疫苗注射等。确定的病毒为 :人类免疫缺陷病毒 1(ＨＩＶ 1)、微小病毒Ｂ19、人类疱疹病毒(ＨＨＶ)、Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒ病毒 (ＥＢＶ)、肝炎病毒等。但感染与随后发生的血小板减少的关系正在研究过程中 ,已经发现血小板减少的同时病毒往往已从血循环中消除 ,提示血小板减少可能是机体通过某种方式对原发感染发生免疫反应所致。下面阐述引起ＩＴＰ的病毒的研究情况。1　ＨＩＶＨＩＶ分为 2型 ,即ＨＩＶ 1…     

基于胃癌基因表达谱的肿瘤分化程度标志基因的鉴定

目的 通过胃癌差异基因表达谱提供的信息鉴定用于识别胃癌分化程度的分子标志物.方法 从本实验室前期所建立的胃癌Oligo基因芯片数据库中选取15份胃癌全基因组表达谱芯片数据,包括9份低分化胃癌和6份高分化胃癌标本数据,采用生物信息学分析方法BAGEL和k-TSP筛选配对的分类器,用于识别肿瘤的分化程度.随后采用ROC曲线对所筛选的特征分子标志物的分类敏感度和特异度进行判断,鉴定具有最强分类能力的分类器.选取北京肿瘤医院30份胃癌组织标本,包括22份低分化胃癌和8份高分化胃癌标本,采用实时荧光定量PCR对所鉴定的分类器进行验证.结果 利用胃癌分化差异基因表达谱数据,采用BAGEL分析方法筛选出了121个表达变化大于2倍的差异表达基因(FC＞2.0,P＜0.001),并在此基础上进一步采用k-TSP分析方法获得了3组用于区分胃癌高低分化程度的胃癌特征基因,包括MYLIP和TMPRSS3,ZNF266和TM4SF1以及SNAI2和CNFN.ROC曲线结果显示,SNAI2和CNFN组合基因对胃癌标本的分化程度进行判断具有最高的分类敏感度(100%)和特异度(100%),其AUC达到1,其他两组分类器则分别为0.981和0.963.实时荧光定量PCR结果显示,在22份低分化胃癌标本中,18份标本(82%)的SNAI2的表达水平高于CNFN;在8份高分化胃癌标本中,6份标本(75%)的SNAI2的表达水平低于CNFN.结论 SNAI2和CNFN在不同分化程度胃癌中具有特定的表达模式,并且两者的表达水平呈现负相关趋势,提示SNAI2和CNFN组合可能作为判断胃癌分化程度的分子标志物.

Abstract：

Objective To identify biomarkers associated with the differentiated phenotype based on gene expression profiling of gastric cancer. Methods Two bioinformatic methods, BAGEL and k-TSP, were used to identify featured genes associated with differentiation in gastric cancer samples based on the Oligo gene chip data, and ROC curves were used to verify the classification sensitivity and specificity of the identified genes. Finally, a total of 30 gastric cancer samples with different differentiation levels were collected for laboratory validation using real-time PCR analyses. Results A total of 121 differentially expressed genes were identified using the BAGEL algorithm, the criterion were FC ＞ 2. 0 and P ＜ 0. 001.Then, the k-TSP algorithm for feature selection based on this differential expression data were used, and 3 groups of featured genes which had potential to classify poor and well differentiation gastric cancer samples were identified, including MYLIP and TMPRSS3, ZNF266 and TM4SF1, SNAI2 and CNFN. To define the featured gene groups that had the highest classification capability, ROC curves to calculate the classification sensitivity and specificity of each gene group were used. The results showed that the combination of SNAI2and CNFN as a classifier had the highest classification sensitivity and specificity. Real-time PCR results showed that 18 of 22 poor differentiation samples were found with high expression of SNAI2 and low expression of CNFN (82%); 6 of 8 well differentiation samples were of low expression of SNAI2 and high expression of CNFN (75%). Conclusion The results indicate that SNAI2 and CNFN are constantly expressed in poor or well differentiation gastric cancer samples, and the expression pattern of these two genes is opposite. These results indicate that SNAI2 and CNFN have the potential for the identification of the differentiation level of gastric cancer.     

蜜桑白皮的体内降脂作用研究＊

目的 考察蜜桑白皮的体内降脂减肥作用。方法 建立小鼠高脂肥胖模型，随机分为正常对照组、肥胖模型组、蜜桑白皮灌胃组、阳性对照组，记录小鼠体重，测定肾周脂肪指数和附睾脂肪指数，及血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平。此外，通过Autodock模拟蜜桑白皮中主要成分与脂质代谢关键酶——羟甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）及羧酸酯酶I（hCES1A）的相互作用，预测其调节血脂作用机制。结果 蜜桑白皮组可显著减缓小鼠体重增加，并有效降低LDL-C水平，其效果优于阳性奥利司他药物组。经Autodock分子对接发现，主要成分桑色素及桑根酮C可分别通过氢键与HMGR的催化活性中心Asp-767、及hCES1A关键氨基酸Cys-389产生较强的相互作用。结论 蜜桑白皮具有良好的减肥降脂作用。     

WT1基因反义寡核苷酸对急性白血病细胞的抑制作用

WT1基因表达产物能够抑制G CSF对髓前体细胞的分化作用,诱导其促进增殖作用。WT1反义寡核苷酸是与WT1基因转录本mRNA翻译起始段互补的一段18nt寡核苷酸链[1 3 ] 。我们的目的是通过WT1反义寡核苷酸抑制WT1基因的表达,观察细胞凋亡的情况,研究WT1基因在白血病发生、发展中的作用以及探讨WT1反义寡核苷酸在白血病治疗中的应用。材料和方法1　药物和试剂　WT1 反义及WT1 正义硫代寡核苷酸序列根据WT1 cDNA设计,由大连宝生物公司合成。反义链序列:5′GTCGGAGCCCATTTGCTG 3′,正义链序列:5′CAGCAAATGGGCTCCGAC 3′。…     

一组与胃黏膜病变演化及早期癌变相关基因的鉴定及生物学意义

目的:鉴定能够特异性识别肿瘤生物学行为和预测肿瘤早期发生的分子标志谱,为胃癌早期诊断和有效防治提供实验依据和理论基础.方法:利用优化的70 mer的22K-Oligo基因芯片杂交和生物信息学分析,建立了胃癌(gastric cancer,GC)和癌旁形态学正常组织(normal appearing tissue,NAT)差异基因表达谱.通过设立以混合的正常胃黏膜组织作为共同参照(common reference,CR),将胃癌和配对癌旁形态学正常组织表达无明显差别的一类基因分离出来,这些基因主要是参与细胞增殖、代谢和分化过程的调控.在此基础上鉴定出一组与胃黏膜病变演化和细胞癌变早期相关的差异表达基因.结果:利用半定量RT-PCR,免疫组织化学染色方法对差异表达基因进行了验证,获得了与芯片表达谱数据一致的结果.进一步的生物信息学分析和实验研究明确了3个有代表性的基因(EGR1、CYR61和ADAMTS1)在胃癌及癌旁形态学正常组织、异型增生、肠上皮化生和非癌患者正常胃黏膜组织中的表达变化.癌和配对形态学正常组织表达水平未见明显差异的这一组基因,在肠化和异型增生组织中,mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜组织.结论:肿瘤患者癌旁形态学正常组织中的基因表达模式已经发生了改变.EGR1、CYR61和ADAMTS1基因过量表达参与胃黏膜病变的演化过程,这一组基因的异常表达可能是胃癌发生的早期事件之一.     

大鼠心肌蛋白双向凝胶电泳技术的建立

[目的]建立大鼠心肌蛋白质组研究的双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）技术。[方法]提取SD大鼠心肌总蛋白,以载体两性电解质pH梯度等电聚焦为第一向电泳,垂直SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向电泳,完成2-DE,考马斯亮蓝染色后扫描获取凝胶图像并用PDQuest软件进行分析。对2-DE中关键环节,如调节pH3~10和pH4~6载体两性电解质的比例、样品离心处理、增加等电聚焦电压和离子强度等方面进行优化。[结果]通过样品处理后离心除去多糖成分,pH3~10和pH4~6载体两性电解质的比例调至1∶2,改变电泳条件,成功消除横向拖尾、分辨率较高的心肌蛋白双向电泳图谱。每张图谱可检测到超过150个蛋白质点,匹配率大于55%。[结论]建立了SD大鼠心肌蛋白的双向凝胶电泳分析技术,该方法可行、重复性好,所提供的方案具有一定参考意义。