弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体构建及在Vero细胞中的表达

目的构建弓形虫表面抗原SAG2的DNA疫苗载体，并在Vero细胞中表达。方法设计1对引物，从弓形虫RH株速殖子基因组DNA中扩增SAG2全长编码基因，构建pVAXl—SAG2真核表达重组质粒。以限制性内切酶Kpn Ⅰ和EcoR Ⅰ进行双酶切、PCR鉴定，纯化后进行测序鉴定。脂质体介导法瞬时转染Vero细胞，同时以pVAX1为对照，48h后收集细胞，Western—blot鉴定。结果从弓形虫RH株DNA中扩增出了577bp的SAG2基因，构建了真核表达载体pVAX1—SAG2，在质脂体介导下转染Vero细胞，质粒DNA成功的转染到细胞中。通过Westen-blot分析，细胞裂解液样品有1条可被弓形虫免疫血清所识别的约17ku大小的条带，与预计大小一致。结论真核表达载体pVAX1—SAG2在Vero细胞中有一定表达，且有一定的活性。     

SARS病毒N蛋白真核表达质粒构建及诱导的体液免疫

目的构建SARS病毒核衣壳蛋白（N）的真核表达质粒，并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段，定向克隆入真核表达栽体pVAC，构建pVAC-N重组质粒；大量制备该重组质粒，经基因枪腹部皮内注射免疫BALB／c小鼠三次，间接ELISA法测定免疫鼠IgG抗体效价。结果成功构建了重组表达质粒pVAC-N，免疫小鼠后可诱导产生出特异性的IgG抗体。结论构建的真核表达质粒pVAC-N能诱导小鼠产生特异性抗体，为SARS疫苗的进一步研究打下基础。     

以血清生化指标诊断球虫病的初步研究

本文用判别分析法研究了以血清生化指标对鸡球虫病的诊断。结果表明，在无其它禽病感染的情况下，可根据血清成丹的变化来区别未感染鸡和球虫府鸡．以及疠鸡感染的虫种(株)和不同感染时期。并在此基础上建立了判别方程，各组判别方程判别的正确率可达到83．33％-100％。     

弓形虫疫苗及其保护性研究现状

本文对近年来研制的弓形虫疫苗的种类、方法及其免疫保护性进行了综述，以期为弓形虫疫苗的进一步研究提供参考。     

代谢组学技术及其在重要寄生原虫研究中的应用

代谢组学是继后基因组学、转录组学和蛋白质组学之后迅速发展起来的一门新兴学科,由于其独特的优点,现已成为一种重要的研究手段,目前主要应用于药物研发、疾病监测与诊断等领域。随着代谢组学技术的逐渐成熟以及新的分析方法的逐步建立,代谢组学的应用越来越广,也逐渐应用到寄生虫学研究领域,尤其是与公共卫生学息息相关的寄生原虫。本文通过对代谢组学、代谢组学研究方法以及代谢组学在重要寄生原虫研究中的应用展开综述,旨在为进一步深入了解代谢组学这门技术,并为我们能够应用该技术解决寄生原虫领域的难题提供参考。     

弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究

目的用pVACGRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护作用。方法大量制备pVACGRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠3次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照。于末次免疫4周后作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFNγ及IL4含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),并观察攻毒试验后小鼠存活情况。结果脾淋巴细胞增殖各组间差异无显著性(P>0.05);pVACGRA4组CD4+T细胞百分率无明显变化(P>0.05),CD8+T细胞百分率明显增加(与pVAC对照组比较P<0.05,与空白对照组比较P<0.01),CD4+/CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);pVACGRA4免疫组IFNγA值比对照组略高,但差异无显著性(P>0.05),IL4A值各组间无明显变化(P>0.05);pVACGRA4组可诱导产生特异性IgG抗体,但滴度不高;pVACGRA4免疫组小鼠存活率显著高于两对照组,死亡小鼠的平均存活时间延长(与空白对照组比较P<0.05)。结论用pVACGRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫攻击感染的部分保护作用。     

猪弓形虫病诊断与药物治疗研究进展

弓形虫病是由刚地弓形虫引起的一种人兽共患病,广泛地分布于世界各地。它感染的中间宿主有草食动物、猪、灵长类、其它哺乳动物和鸟类等。在家畜中,我国以猪的感染较多,猪也是我国人群流行弓形虫病的重要传染源之一。20世纪70-80年代,弓形虫病曾在我国养猪场中大规模暴发流行,死亡率可高达60％以上,给养猪生产造成巨大经济损失。弓形虫感染人可以引起流产或先天性的疾病,导致婴幼儿发育畸形、智力障碍、脑炎及脑膜炎等。Mead等评估,美国每年大约有225000新病例,50％的病例是通过食物感染的。在美国猪肉已成为人感染弓形虫病的主要来源。为了寻求更敏感、特异和价廉的诊断方法及新的更好的治疗药物,本文对猪弓形虫病的诊断方法和药物治疗的研究进展加以综述。     

弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA4基因的克隆与表达

目的 克隆和表达弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA4基因。方法 根据GRA4基因序列,设计合成一对引物,用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因片段,插入pMD18-T载体,并转化大肠杆菌JM109,经PCR、双酶切、测序验证后,将GRA4基因片段定向亚克隆到载体pGEX-4T-2中构建原核表达重组质粒pGEX-4T-2.GRA4,重组子在E.coli BL21中经IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE及Westem blot分析。结果 从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出GRA4基因片段并诱导表达出能被兔抗弓形虫血清识别的重组GRA4蛋白。结论 成功构建和表达了弓形虫pGEX-4T-2-GRA4重组质粒,为弓形虫病诊断抗原和疫苗的研究奠定了基础。     

广东集约化猪场结肠小袋纤毛虫感染情况调查

为了解广东省集约化猪场的结肠小袋纤毛虫的感染情况,我们于2001年7月至2003年12月,采用粪便检查法抽检了广东省20个代表性集约化猪场的种猪和肉猪共1 906头的粪样.结果发现,场阳性率为100%,各场的感染率为14.2%～72.2%.其中种母猪的感染率为46.8%,种公猪的感染率为50.5%,育肥猪的感染率为49.8%,生长猪的感染率为34.8%,保育猪的感染率为20.1%.本文的调查结果表明,广东省集约化猪场不同生长阶段猪结肠小袋纤毛虫的感染情况均很严重,调查结果为猪场制定防制结肠小袋纤毛虫的措施提供了科学依据.