二硫化二砷诱导哮喘豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸细胞凋亡的研究

目的观察二硫化二砷(As2S2)诱发哮喘豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸细胞凋亡的作用。方法采用卵白蛋白制备哮喘豚鼠模型并激发哮喘,提取肺泡灌洗液并分离其中的嗜酸细胞。将嗜酸细胞悬浮生长于含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中,嗜酸细胞初始浓度均为2×109L-1。A组As2S2以1.406 3 mg/L终浓度分别加入细胞培养液中培养3,6,12,24,48 h。B组将As2S2终浓度调整为0.04,0.09,0.18,0.35,0.70,1.41,2.81 mg/L,培养6h。2组均以不加As2S2为对照。Wright’s染色、透射电子显微镜观察嗜酸细胞的形态学变化。流式细胞仪检测观察嗜酸细胞凋亡率。结果嗜酸细胞与As2S2作用6 h后,Wright’s染色、透射电子显微镜均观察到嗜酸细胞出现凋亡的形态学改变。将嗜酸细胞与终浓度为1.406 3 mg/L As2S2在培养基中分别培养3,6,12,24,48 h后,流式细胞检测可见嗜酸细胞凋亡率随着As2S2作用时间的延长而先升高,于24 h达最高,凋亡率为27.19%,而后下降。各不同时间组嗜酸细胞凋亡率与对照组比较均有显著性差异。将嗜酸细胞与不同终浓度As2S2在培养基中分别培养6 h后,流式细胞检测可见嗜酸细胞凋亡率随着As2S2浓度的增加而升高,各不同浓度组嗜酸细胞凋亡率与对照组比较亦均有显著性差异。结论As2S2可促进哮喘豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸细胞凋亡,随着As2S2作用时间的延长和浓度增加这种作用更明显。     

血管活性肠肽对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞表达MMP-9的影响

目的：探讨血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)对经脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞分泌和表达基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响。方法：采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及明胶酶谱法（gelatin zymography），观察经LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞给予不同浓度的VIP（10-10～10-6mol/L）作用24h后MMP-9基因表达量和活性的变化。结果：(1)正常肺泡巨噬细胞仅分泌和表达少量的MMP-9，经不同浓度LPS（0.1～10mg/L）诱导后MMP-9活性和表达均明显高于未经LPS诱导的对照组（P<0.01）；(2)不同浓度VIP (10-10～10-6mol/L）的干预，均可下调LPS诱导的MMP-9的活性和表达（P<0.01）；(3)该作用可被蛋白激酶C和钙调蛋白的相应阻断剂H-7,W-7部分逆转（P<0.01）。结论：VIP能降低LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞MMP-9的表达及活性，其细胞内信号途径可能与蛋白激酶C和钙调蛋白有关，提示VIP在肺内炎症时可能具有保护性作用。     

姜黄素抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖的作用

目的 研究姜黄素对气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖的作用.方法 体外培养大鼠原代ASMCs.CCK-8法检测血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)和PDGF加姜黄素处理的ASMCs A150的光密度值,以观察PDGF诱导的增殖和姜黄素的抗增殖作用.Western blotting 检测ERK1/2蛋白的表达水平.结果 与对照组(1.04±0.12)比较,CCK-8法检测给予PDGF 2 d后,10ng/mL PDGF组(1.16±0.14)和50 ng/mL PDGF组(1.30±0.15)的A150的光密度值均显著增加.P＜0.01.给予姜黄素处理12、24和36 h后,与对照组比较,11.25μmol/L组(21.57%、43.55%和65.99%)、16.88μmol/L组(39.64%、57.44%和77.80%)和25.3μmol/L组(44.50%、53.68%和92.68%)的细胞平均抑制率均增加显著,P＜0.05.姜黄素(25μmol/L)加PDGF(25 ng/mL)处理20、40和60 min后ERK1/2蛋白表达水平均显著降低.结论 姜黄素对增殖的ASMCs有抑制作用,可能与抑制了ERK1/2的信号通路活化有关.     

被动吸烟与甲醛及通风不良对小白鼠影响的实验观察

目的分析三种有害室内因素:被动吸烟、甲醛及通风不良对小白鼠机体的影响。方法将32只小白鼠随机分为4组:被动吸烟组、甲醛组、通风不良组和空白对照组,每组8只,对前三组分别进行通香烟、通甲醛、不通风处理,空白组处于通风正常环境,实验持续4小时,过程中每隔1小时所有小鼠进行独木桥和通电迷宫试验及耐缺氧试验。结果t检验和方差分析显示,被动吸烟组过独木桥和穿行迷宫的时间比其他组显著延长,p<0.05,具有统计学意义。结论被动吸烟对中枢神经系统有严重的毒性作用。甲醛对中枢神经也有一定损伤作用。通风不良的环境,导致脑供氧不足而影响精神状态及平衡感下降。     

臭氧应激对人支气管上皮细胞上皮钙粘素表达的影响

目的：观察人支气管上皮细胞（human bronchial epithelial cells，HBECs）上皮钙粘素（E—cadherin，E-cd）的表达，探讨E—cd在维持气道损伤修复过程中的变化及意义。方法：分别采用免疫细胞化学染色和RT—PCR的方法检测HBECs E—cd及HBECs E—cd mRNA的表达。结果：臭氧（ozone，O3）应激可使HBECs膜上E—cd的表达减少，胞浆内E—cd表达增加（P〈0．05）。随着O3应激停止后的时间延长，膜上E—cd表达逐渐增加，胞浆内E-cd表达则减少。在停止O3应激后的第32h E—cd的表达恢复正常。O3应激对HBECs E—cd mRNA的表达无明显影响（P〉0．05）。结论：HBECs有E—cd表达，O3应激影响HBECs E—cd的分布。     

PBL教学模式在医学生理学教学中存在的问题及对策

基于问题的学习(PBL)教学模式有别于传统的以授课为基础的学习(LBL)教学模式。由于这一教学模式具有许多优点,已被国内外许多院校广泛接受并应用于多个学科的教学。然而,在实际操作过程中出现了一些问题,如不及时解决将会影响到其教学效果。本文就PBL在医学生理学教学中出现的一些常见问题,提出了相应的解决对策,以供医学教育工作者参考。     

克罗米酚对骨髓间质干细胞增殖和向成骨细胞分化的影响

目的　在离体条件下研究克罗米酚(CLO)对小鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)增殖和向成骨细胞分化的影响。方法　在含经活性炭吸附的 10%血清的无酚红α MEM中加入β 磷酸甘油和维生素C诱导小鼠BMSCs向成骨细胞分化,同时加入 0 1nmol·L-1至 10nmol·L-1CLO处理细胞。用细胞计数来反映细胞增殖情况;测定碱性磷酸酶 (ALP)活性与钙的沉积量反映细胞向成骨细胞分化状态;用试剂盒来检测一氧化氮 (NO)的产物。结果　CLO ( 0 1 ~10nmol·L-1 )呈剂量依赖性地增加小鼠BMSCs的数目,ALP活性和钙的沉积量,同时培养基中NO代谢产物明显增加。分别加入雌激素受体 (ER)拮抗剂ICI182, 780 (0 1μmol·L-1 )及一氧化氮合酶抑制剂L NAME( 6mmol·L-1 )均可阻止CLO促进BMSCs的增殖及向成骨细胞分化的作用,并取消NO代谢产物的增加。结论　CLO在 0 1 ~10nmol·L-1剂量范围内具有雌激素样受体激活效应,可通过ER/NO途径促进小鼠骨髓间质干细胞的增殖及向成骨细胞分化。     

活性氧不参与二氯化钴诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖

目的 探讨活性氧是否参与二氯化钴诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)过度增殖.方法 用化学性缺氧模拟剂二氯化钴处理HPASMC,建立缺氧性肺动脉高压血管重塑的细胞模型 用外源性活性氧供体过氧化氢处理HPASMC,观察活性氧对细胞增殖的影响;活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HPASMC,观察其对二氯化钴或过氧化氢诱导的细胞增殖的改善作用;应用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖,Western blot检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的表达,双氯荧光素染色和荧光照相术检测细胞内活性氧的含量.结果 在25 ～ 50μmol/L浓度范围内,二氯化钴处理24 h可诱导HPASMC增殖,50 μmol/L二氯化钴处理24 h可使细胞内HIF-1α的水平明显增加;与二氯化钴的作用类似,过氧化氢在12 ～ 25μmol/L浓度范围内处理24 h也可引起细胞增殖,但不改变HIF-1α的水平;在二氯化钴或过氧化氢处理前,用不同浓度的NAC预处理,在1 500 μmol/L浓度时,NAC预处理可明显抑制过氧化氢诱导的HPASMC过度增殖(P＜0.05),而对二氯化钴诱导的细胞增殖则无明显影响(P＞0.05);另外,50 μmol/L二氯化钴处理6～24 h对细胞内活性氧的含量无明显影响(P＞0.05).结论 化学性缺氧可诱导HPASMC过度增殖,其机制可能不依赖于活性氧.