慢病毒载体对MDA-MB-231 细胞中 microRNA-18a-3P 表达的影响

目的 构建人microRNA-18a-3P（miR-18a-3P）过表达及干扰慢病毒载体,研究病毒感染人乳 腺癌细胞系MDA-MB-231 的步骤和方法。方法 PCR 技术扩增相应目的基因片段并进行酶切,回收后与目 的基因连接,产物转化细菌感受态细胞,对阳性克隆测序行对比分析,构建miR-18a-3P 过表达及干扰慢病毒 载体,荧光法测定病毒滴定;倒置荧光显微镜观察人乳腺癌细胞MDA-MB-231 转染及筛选过程的转染效率, 筛选最佳MOI 值;qRT-PCR 检测慢病毒转染后MDA-MB-231 细胞内miR-18a-3P 的表达。结果 测序 分析证实重组慢病毒构建正确;过表达及干扰慢病毒滴度分别为2×109 和1×109 TU/ml ;加Polybrene 较未 加Polybrene 转染效率升高,当感染复数为10 TU/ml,Polybrene 浓度为1μg/ml 时,转染效率最佳;miR- 18a-3P 转染组过表达miR-18a-3P 的相对表达量较空白对照组、阴性对照组高（P <0.05）,miR-18a-3P 转染组干扰表达miR-18a-3P 的相对表达量较空白对照组、阴性对照组低（P <0.05）。结论 成功构建了 miR-18a-3P 过表达及干扰慢病毒表达载体,对人乳腺癌细胞MDA-MB-231 进行转染和筛选后,可快速高 效率获得所需目的细胞。