在体观测补肾中药对帕金森病模型小鼠纹状体多巴胺含量的影响

目的 探讨补肾中药对帕金森病(PD)模型小鼠黑质一纹状体多巴胺(DA)的影响. 方法用MPTP·HCl腹腔注射法建立PD小鼠模型,选择造模成功小鼠随机分为淫羊藿组、黄精组、司来吉兰组、模型对照组,每组6只,另取同周龄同品系小鼠6只作为正常对照组.正常对照组、模型对照组灌胃给予蒸馏水,淫羊藿组、黄精组、司来吉兰组灌胃给予...     

补肾中药对帕金森病模型小鼠黑质-纹状体多巴胺的影响

目的:探讨补肾中药对帕金森病(PD)模型小鼠黑质-纹状体神经递质多巴胺(DA)的影响。方法:取PD模型小鼠45只,随机分为淫羊藿组、女贞子组、黄精组、司来吉兰组和模型对照组,每组9只,另取同周龄C57BL/6J雄性小鼠9只作为正常对照组。正常对照组和模型对照组ig蒸馏水,淫羊藿组、女贞子组、黄精组、司来吉兰组分别ig淫羊藿、女贞子、黄精、司来吉兰(剂量分别为6,6,8,2×10-3 g·kg-1)的水煎液及水溶液。0.5 mL/次,2次/d,连续给药4周后冰浴中取黑质-纹状体,免疫组织化学法检测酪氨酸羟化酶(TH)的含量,高效液相-电化学法检测DA及其代谢物高香草酸(HVA)的含量。结果:淫羊藿组TH的表达,DA,二羟苯乙酸(DOPAC)的含量均高于模型对照组(P<0.05),且淫羊藿组TH的表达高于司来吉兰组(P<0.05),与空白对照组无差异;女贞子组和黄精组中DA的含量较模型对照组高(P<0.05),且女贞子组中DA的含量高于司来吉兰组(P<0.05),与空白对照组无差异。结论:补肾中药可以增加PD模型小鼠黑质-纹状体中DA的含量,但其作用机制并不完全一致,有待进一步深入研究。     

补肾中药对大鼠杏仁核c—Jun、c—Fos蛋白的影响

目的 探讨补肾中药对大鼠c-Jun、c-Fos表达的影响.方法 Wistar大鼠随机分为女贞子组、淫羊藿组、氯米芬组、倍美力组和蒸馏水组5组,分别给予女贞子水煎液、淫羊藿水煎液、氯米芬水溶液、倍美力水溶液、蒸馏水,连续灌胃15 d后腹主动脉真空负压取血及快速脱颈椎处死取杏仁核,用酶联免疫吸附法检测血浆E2、T、Fsh及杏仁核c-Jun、c-Fos蛋白的含量.结果 女贞子组、淫羊藿组的血浆激素水平及脑杏仁核c-Jun、c-Fos蛋白含量均比蒸馏水组有显著升高(P<0.05),两组之间的血浆激素水平及c-Fos蛋白含量无统计学意义(P<0.05),淫羊藿组的c-Jun的蛋白含量比女贞子组有升高(P<0.05),女贞子组、淫羊藿组的血浆激素水平及脑杏仁核c-Jun、c-Fos蛋白含量均较氯米芬组和倍美力组低(P<0.05).脑杏仁核c-Jun、c-Fos蛋白含量的增多和血浆激素水平的升高有相关性,呈S曲线相关(P<0.05).结论 补肾中药在一定范围内能增强c-Jun、cFos的表达.     

女贞子、淫羊藿补肾中药对自发性高血压大鼠主动脉内皮舒缩功能的影响

目的 研究补肾中药女贞子、淫羊藿对自发性高血压大鼠(SHR)的血压、主动脉内皮舒张因子一氧化氮(NO)及收缩因子内皮素(ET-1)的影响,探讨补肾中药调节主动脉内皮舒缩功能的可能机制.方法 采用随机对照研究的方法将40只12~14周龄自发性高血压大鼠(SHR)随机分为女贞子组、淫羊藿组、阳性对照组、模型组,以同龄同种系正常血压的京都种大鼠(Wistar-Kyoto rat,WKY)10只作为正常组;女贞子组、淫羊藿组、阳性对照组分别给予女贞子、淫羊藿水煎液,依那普利水溶液,模型组和正常组给予蒸馏水灌胃.2 w后采用多导生理记录仪检测大鼠血压,处死大鼠后取腹主动脉血测定血清一氧化氮(NO),血浆内皮素-1(ET-1)的含量,取主动脉检测内皮eNOS、ET-1蛋白及eNOS mRNA、ET-1mRNA的表达.结果 用药后女贞子、淫羊藿使SHR大鼠的血压有所降低,但差异无统计学意义;女贞子组、淫羊藿组血液NO、主动脉内皮eNOS蛋白及eNOS mRNA表达较模型组升高(P<0.05),血液ET、主动脉内皮ET-1蛋白及ET-1 mRNA表达均明显降低(P<0.05).结论 单味中药女贞子、淫羊藿虽然没有明显降低血压,但略有下降的趋势,且能调节主动脉血管内皮舒缩因子.     

基于海马神经元突触CaMKⅡ/SynapsinⅠ/GluR1信号紊乱的自闭症发病机制

目的自闭症发病率逐年上升,其与认知功能异常的神经环路失调关联性收到国内外研究者关注。然而,迄今仍未能阐明其确切病因和发病机制。我们以突触蛋白钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Calcium/calmodulin-dependentprotein kinaseⅡ,CaMKⅡ)相关信号为切入点展开研究。方法 SD大鼠孕12.5 d时随机分为自闭症组和对照组,VPA水溶液(240 g.L-1)造模。检测子代大鼠的外观、睁眼时间、游泳平衡能力和自主活动情况;Western blotting、免疫荧光染色等技术研究海马突触CaMKⅡ/SynapsinⅠ/GluR1信息模块在自闭症模型脑组织中的表达情况,探讨其变化规律。结果自闭症模型大鼠发育缓慢、体型较小、毛发稀疏、短尾畸形,睁眼延迟,游泳能力低下;自主活动实验中表现为活动路程、活动时间和活动速度、边缘活动时间增加、中央活动时间、中央活动速度降低的自主活动增加和低探索性。Phos-pho-CaMKⅡ(Thr286),Phospho-SynapsinⅠ(Ser603),Phos-pho-GluR1(Ser831),Phospho-NR1(Ser896)在自闭症模型大鼠大脑皮层和海马部位的表达均有明显降低。免疫荧光染色也发现Phospho-CaMKⅡ(Thr286)在自闭症模型大鼠海马的阳性染色也明显降低。结论海马CaMKⅡ/SynapsinⅠ/GluR1信号紊乱与自闭症发病进程密切相关,关联深入研究将为预防和治疗自闭症的新药靶点发现提供实验依据。     

反复重度低血糖对糖尿病大鼠海马PKA/PKC/CaMKⅡ磷酸化信号通路的影响

目的：观察2型糖尿病大鼠在诱发反复重度低血糖时海马组织中蛋白激A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化信号通路相关蛋白水平变化,探讨其在认知功能损害中的作用。方法：将大鼠随机分为4组：对照组(CON)、糖尿病组(DM)、反复重度低血糖组(G↓)和糖尿病反复重度低血糖组(DM G↓)。采用STZ法建立2型糖尿病大鼠模型;对照组(CON)、糖尿病组(DM)给予生理盐水,反复重度低血糖组(G↓)和糖尿病反复重度低血糖组(DM G↓)给予普通胰岛素连续注射4天使呈反复重度低血糖状态（<2.0mmol/L）。western blot 法检测各组大鼠海马组织PKA/PKC/CaMKⅡ磷酸化信号通路相关蛋白翻译后磷酸化的表达水平。结果：与正常组(CON)相比,糖尿病反复重度低血糖组(DM G↓)大鼠海马区磷酸化PKA蛋白表达水平增高（P<0.05）,其上游ERK磷酸化水平也增高（P<0.05）;而PKC、CaMKⅡ信号通路的相关蛋白表达,差异无统计学意义（P>0.05）;与糖尿病组(DM)、反复重度低血糖组(G↓)相比,糖尿病反复重度低血糖组(DM G↓)大鼠海马区PKA、PKC、CaMKⅡ相关蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：糖尿病诱发反复重度低血糖的情况下,PKA磷酸化水平发生明显改变,提示可能与重度低血糖致脑损伤和认知功能障碍相关联。PKA磷酸化表达变化可能可以作为敏感生化指标。     

慢性铅暴露大鼠海马脑区自噬相关蛋白表达的研究

目的:观察慢性铅暴露后子代大鼠海马脑区铅含量变化,采用自噬/溶酶体途径关联蛋白标记物探讨慢性铅暴露对海马脑区自噬/溶酶体途径关联信号蛋白表达的影响。方法:以慢性铅暴露子代大鼠为研究对象,随机编号分组为对照组、低剂量铅暴露组(0.5 g/L)和高剂量铅暴露组(2.0 g/L)。断乳期仔鼠分笼饲养,仔鼠饮用低、高含量的醋酸铅饮用水直至60天成熟期。分别取血样与海马脑组织样本使用石墨炉原子吸收分光光度法进行铅含量测定,免疫印迹及免疫荧光组化方法分别检测慢性铅暴露后海马脑区自噬相关蛋白Beclin 1、LC3、LAMP2及cathepsin B的表达变化情况。结果:与对照组比较,模型组大鼠血铅含量显著升高(P<0.01)。同时,低剂量与高剂量铅暴露模型组大鼠海马脑铅含量显著升高,分别为(1.26±0.31)μg/g(低剂量组)与(1.83±0.18)μg/g(高剂量组)vs对照组(0.52±0.13)μg/g。此外,免疫印迹结果显示,高剂量铅暴露组大鼠海马脑区的早期自噬标志物Beclin 1及LC3-Ⅱ/LC3-I比值较对照组显著增加(P<0.05或P<0.001)。激光共聚焦显微镜结果显示,慢性铅暴露高剂量组较正常对照组的自噬相关蛋白cathepsin B在海马锥体神经元的阳性表达明显增加。结论:慢性铅暴露诱导大鼠海马脑区发生自噬/溶酶体途径关联信号蛋白表达变化,可能与海马脑区铅含量的增加存在内在关联性。     

补肾中药对帕金森病模型小鼠黑质-纹状体神经元的保护作用

目的 探讨补肾中药对帕金森病(PD)模型小鼠黑质-纹状体神经元的保护作用.方法 取PD模型小鼠40只,随机分为淫羊藿组、女贞子组、黄精组、司来吉兰组及模型组5组,每组8只,另取同周龄C57BL/6J雄性小鼠8只作为正常对照组.正常对照组及模型组均给予蒸馏水,淫羊藿组、女贞子组、黄精组、司来吉兰组分别灌胃给予淫羊藿、女贞子、黄精、司来吉兰的水煎液及水溶液.每次灌胃0.5 ml,2次/d,连续给药4 w后冰浴中取黑质-纹状体,流式检测FasL、Fas、Caspase-3、Bcl-2,酶联免疫法检测神经生长因子(NGF)、脑源性神经因子(BDNF)、胶质源性GDNF,电镜下观察小鼠黑质中神经元的形态.结果 黄精组FasL的含量明显低于模型组(P＜0.05),与司来吉兰组及正常对照组无明显差异(P＞0.05);淫羊藿组、女贞子组及黄精组的Caspase-3的含量均低于模型组(P＜0.05),均与正常对照组和司来吉兰组无明显差异(P＞0.05);黄精组中NGF的含量明显高于模型组、司来吉兰组(P＜0.05),与正常对照组无明显差异(P＞0.05);淫羊藿组和黄精组中的BDNF的含量均高于模型组和正常对照组(P＜0.05),淫羊藿组与司来吉兰组无明显差异(P＞0.05),黄精组明显高于司来吉兰组(P＜0.05);淫羊藿组、女贞子组及黄精组小鼠黑质神经元凋亡程度较模型组有减轻.结论 补肾中药可能通过降低黑质-纹状体中相关凋亡因子的含量、增加NGF的含量来对DA能神经元起保护作用的.