浙南海域野生坛紫菜遗传多样性的ISSR分析

目的:研究浙南海域野生坛紫菜的遗传多样性.方法:采用简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)分子标记技术,分析采自浙江南部海域的苍南铁钉岛、洞头竹屿岛、南麂列岛、温岭斜头岛等地坛紫菜(Porphyra hai tanesis)的4个野生种群.结果:6条ISSR引物共获得268个位点,257个多态位点,4个种群野生坛紫菜多态位点百分率(PPL)为95,90％,等位基因数(Na)为1.8081,有效等位基因数(Ne)为1.5326,Nei's基因多样性(H)为0.1618,Shannon's指数(I)为0.3509,均高于个体水平;种群内和种群间Nei's基因多样性计算遗传分化水平(Gst)为0.2832,种群间的基因交流为Nm=2.3591,表明野生坛紫菜种群间存在着较高的遗传多样性,遗传变异中有28.32％发生于群体间.108株坛紫菜的聚类分析结果同样也表明坛紫菜种群间的遗传分化水平较低,遗传变异主要存在于种群的个体间.结论:浙南海域野生坛紫菜种群间遗传差异较大,遗传多样性水平较高,个体间的遗传差异较小.表明目前浙南野生坛紫菜的种质资源较好.     

套装式一次性宫腔组织吸引管在高危人工流产中应用

目的：比较套装式一次性宫腔组织吸引管与传统金属人流器械应用于高危人工流产手术,在手术时间、疼痛程度、人流综合症发生率、子宫穿孔发生率、术中出血量以及术后宫腔残留方面的不同。方法：选择具有高危因素的人工流产患者200例,随机分组,两组患者的年龄、孕产次、孕周差异无统计学意义。观察组使用套装式一次性宫腔组织吸引管,对照组使用传统金属人流器械,采用常规负压吸引术终止妊娠。结论：在高危人流手术中使用套装式一次性宫腔组织吸引管可以缩短手术时间、减轻患者疼痛程度、降低人流综合症和子宫穿孔发生率。     

应用微滴式数字PCR定量检测结直肠癌患者血浆循环游离DNA

目的建立基于微滴式数字PCR(dd PCR)技术定量检测结直肠癌(CRC)患者血浆循环游离DNA(cfDNA)含量的方法,并初步探讨其临床应用。方法设计β-actin基因dd PCR特异性引物和探针,通过条件优化建立cfDNA定量检测方法;用不同浓度标准品验证所建方法的特异性、灵敏度、线性及重复性;并用该法检测39例CRC患者与40例健康人群血浆标本,比较CRC患者与对照组、术前与术后组血浆cfDNA浓度差异。结果所建方法无非特异性扩增,检测灵敏度为0.29 copies/μl,在模板浓度为10 pg/μl~10 ng/μl内线性良好(y=-2.34+33.17x,r~2=0.999),批内CV为9.85%,批间CV为11.04%;CRC患者血浆cfDNA结果 (7.20±5.15)copies/μl明显高于对照组(3.38±1.97)copies/μl(P0.01);术后组血浆cfDNA浓度为(3.90±3.39)copies/μl,较术前组明显下降(P0.01)。结论建立的dd PCR定量检测血浆cfDNA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可为CRC患者的临床决策和病程监控提供一种无创手段。     

麦冬多糖抑制TGF-β1诱导的人胚胎肺成纤维细胞表型的转化

研究麦冬多糖对转化生长因子-β₁(TGF-β₁)诱导的人胚胎肺成纤维细胞表型转化的影响,并初步探讨其分子机制。方法 采用TGF-β₁诱导人胚胎肺成纤维细胞(HEL)转化,同时给予麦冬多糖进行干预;采用CCK-8检测细胞的增殖率,电镜观察细胞的超微结构,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ 型胶原蛋白(COL I)、Smad2蛋白和p-Smad2蛋白的表达,实时荧光定量RT-PCR检测α-SMA mRNA和COL Ⅰ mRNA的表达。结果 25、50、100 μg.ml^-1浓度的麦冬多糖对HEL细胞均无明显毒性,并能抑制TGF-β₁诱导所致的成纤维细胞增殖(P＜0.05);与对照组相比,麦冬多糖干预组细胞表面微绒毛减少、微丝变短,胞浆内线粒体数目下降,粗面内质网减少; 同时下调α-SMA、COL I、Smad2、p-Smad2蛋白的表达量和α-SMA、COL I的mRNA表达水平(P＜0.05)。结论 麦冬多糖可能通过干预TGF-β/Smads信号通路,在一定程度上抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化。     

结直肠癌患者循环肿瘤DNA定量KRAS基因突变的检测

目的建立结直肠癌KRAS基因G12D液体活检技术,并探讨其在结直肠癌诊疗中的应用价值。方法用微滴式数字PCR(ddPCR)技术定量检测52例结直肠癌患者和80名健康对照的血浆游离DNA的KRAS基因G12D突变率和突变浓度;以结直肠癌患者肿瘤组织KRAS基因测序结果为金标准评价ddPCR检测的准确性;分析结直肠癌患者KRAS基因G12D突变率、浓度与其临床表征的关系。结果结直肠癌患者血浆KRAS基因G12D突变型检出率(26.92%)和浓度中位数(81.5 copies/m L)显著高于健康对照(8.75%,16 copies/m L);结直肠患者组高分化腺癌的KRAS基因G12D突变浓度显著高于中分化和低分化腺癌(P<0.05),淋巴结转移N2的KRAS基因G12D突变浓度显著高于N0和N1(P<0.05);结直肠癌患者血浆KRAS基因G12D突变与肿瘤组织突变一致性达87.50%。结论ddPCR检测方法是一种快速、无创和准确的检测血浆循环肿瘤DNA(ctDNA)的方法,其检测结果可为临床用药指导和病程监控提供依据。     

酪酸梭菌代谢产物丁酸和氢气对急性胃黏膜损伤的作用

目的:前期研究表明酪酸梭菌对损伤的胃黏膜具有保护作用,但具体效应物质不明。本文通过检测酪酸梭菌的主要代谢产物氢气和丁酸对损伤胃黏膜的效应,探究黏膜保护作用的具体机制。方法:将雄性ICR小鼠通过乙醇灌胃诱导胃黏膜损伤,并以氢气和丁酸分别进行处理,观测胃组织的大体变化和组织结构损伤情况,通过RT-q PCR检测炎症因子白细胞介素12(IL-12)、Ras相关核蛋白1(RAN1)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的含量,采用免疫组化法观测Bcl-2和Bax蛋白表达量变化。结果:胃组织大体观测发现丁酸能够保护胃黏膜,而氢气不具有此作用;HE染色也提示丁酸能够显著改善乙醇造成的胃黏膜病理损伤。RT-q PCR则显示所检测炎症因子IL-12、RAN1和MCP-1的表达量较模型对照组有显著降低(P0.01)。在丁酸组,Bax的表达量较模型组显著减低(P0.01),而Bcl-2的含量却明显提高(P0.01)。结论:酪酸梭菌胃黏膜保护效应的主要产物可能是丁酸而不是氢气。丁酸能够通过抑制炎症反应,下调Bax/Bcl-2表达比例,从而实现对胃黏膜的保护作用。     

Anti-HER2 ScFv-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其靶向结合乳腺癌细胞的初步分析

目的：构建原核表达系统诱导获得携带绿色荧光的抗人表皮生长因子受体2（human epidermalgrowth factor receptor 2,HER2）单链抗体,分析其靶向结合HER2阳性肿瘤细胞的功能,探讨其应用于HER2阳性肿瘤分子诊断与靶向治疗的可能性。方法：将绿色荧光蛋白基因与鼠源性人抗HER2单链抗体基因拼接成融合基因anti-HER2 ScFv-GFP,构建原核表达载体重组子pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP,转入大肠杆菌E.coli TOP10诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot法鉴定,Ni2＋-NTA亲和层析法纯化获得目的融合蛋白。将不同浓度的融合蛋白anti-HER2 ScFv-GFP分别与HER2阳性的乳腺癌细胞SKBR3、HER2阴性的MCF7混合,观察绿色荧光在不同癌细胞表面的分布。结果：成功获得长度为1 539 bp的融合基因,原核表达系统pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP/TOP10成功构建并表达携带绿色荧光的抗HER2单链抗体,融合蛋白相对分子量大小约60 kDa。HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光,细胞有皱缩现象,而HER2阴性MCF7被洗脱后无荧光。结论：携带绿色荧光的抗HER2单链抗体能牢固结合在HER2阳性的乳腺癌细胞SKBR3表面,绿色荧光可以起到报告作用。     

地诺孕素治疗子宫腺肌病有效性与安全性Meta分析

目的 系统评价地诺孕素用于子宫腺肌病（adenomyosis，AM）保守治疗的有效性与安全性。方法 计算机检索中英文数据库自建库至2023年8月相关的随机对照试验。采用偏倚风险评估工具评价文献质量，RevMan 5.4软件进行分析。结果 纳入9篇随机对照试验，共654例AM患者，338例患者接受地诺孕素治疗，用药疗程3～6个月。Meta分析结果显示地诺孕素治疗腺肌病的总有效率（OR=6.70，95%CI：1.84～24.42，P=0.004）、血清糖类抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）降幅（MD=–6.89，95%CI：–12.84～–0.93，P=0.02）、子宫体积（MD=–26.49，95%CI：–37.86～–15.12，P<0.00001）、生活质量调查表评分（MD=6.12，95%CI：4.76～7.47，P<0.00001），均优于未使用地诺孕素者；疼痛改善情况（MD=–0.14，95%CI：–2.19～1.92，P=0.90）、子宫内膜厚度（MD=–0.54，95%CI：–3.66～2.59，P=0.74），差异无统计学意义；总体不良反应发生率（OR=0.51，95%CI：0.12～2.18，P=0.37）、阴道不规则出血发生率（OR=1.98，95%CI：0.25～15.59，P=0.52），差异无统计学意义。结论 地诺孕素可提高AM患者治疗的总有效率，一定程度上缩小子宫体积，缓解主观症状，改善患者的生活质量。     

融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP在昆虫细胞中的表达及其靶向结合乳腺癌细胞的功能分析

目的:利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达获得携带绿色荧光蛋白(GFP)的抗人表皮生长因子受体2(HER2)的单链抗体可变区片段(ScFv),分析其靶向结合乳腺癌细胞表面受体HER2的功能。方法: 构建融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,重组获得真核表达载体重组子pFAST Bac-to-Bac HT A/anti-HER2-ScFv-GFP,转化DH10Bac,收集重组病毒bacmid,分别转染、感染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白表达产物。Ni²⁺-NTA 亲和层析法纯化anti-HER2-ScFv-GFP融合蛋白后分别滴入乳腺癌细胞HER2阳性的SKBR3和HER2阴性的MCF7,对比携带绿色荧光的抗HER2单链抗体靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体情况。结果: 获得长度约1 539 bp的融合基因anti-HER2-ScFv-GFP,感染重组病毒的Tn-5B1-4细胞膜附近有明显绿色荧光,SDS-PAGE、Western blotting法检测到60 kD的特异性条带。 结合实验显示HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光,而HER2阴性的MCF7细胞表面荧光易被洗脱。结论: 在Tn-5B1-4中成功表达携带绿色荧光的融合蛋白anti-HER2-ScFv-GFP,该携带绿色荧光的抗HER2单链抗体具有靶向结合乳腺癌细胞表面HER2受体的效能。     

温州地区汉族人群CYP2C19和CYP2C9基因多态性分析

目的：研究温州地区汉族人群CYP2C19、CYP2C9基因多态性分布。方法：采用聚合酶链式反应和测序方法,对287例健康人群CYP2C19、CYP2C9基因多态性进行分析。结果：温州地区汉族人群的CYP2C19*1、CYP2C19*2和CYP2C19*3三种等位基因的频率分别为65.16%、29.27%和5.57%;CYP2C19*1/*1、CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3、CYP2C19*2/*3、CYP2C19*2/*2和CYP2C19*3/*3基因型的频率分别为44.95%、33.45%、6.97%、4.18%、10.45%和0.00%,弱代谢率为14.63%;CYP2C9*1和CYP2C9*3等位基因频率分别为97.74%和2.26%,CYP2C9*1/*1和CYP2C9*1/*3的基因频率为95.47%和4.53%,未发现CYP2C9*3/*3。结论：温州地区汉族人群CYP2C19和CYP2C9弱代谢率与已报道的汉族人群基本一致,与日本人群相近,显著高于欧美人群。