诺维氏梭菌对小鼠移植性肝癌的抑制作用

目的 评估无毒诺维氏梭菌对小鼠移植性肝癌的抑瘤效应,及其在肿瘤和重要器官的定植情况,并确定瘤内注射的最佳剂量。方法 建立H22皮下移植瘤BALB/c小鼠模型后称小鼠重量、测肿瘤大小,并按随机原则分为生理盐水组、无毒诺维氏梭菌低剂量组（1.0×107 mL-1,0.5 mL）、中剂量组（1.0×108 mL-1,0.5 mL）和高剂量组（1.0×109 mL-1,0.5 mL）。每天观察小鼠的一般情况,每周3次定时测量小鼠重量,每周2次测肿瘤大小,评估细菌的抑瘤效应。采用革兰染色法、细菌培养法、PCR技术,了解肿瘤和重要器官中诺维氏梭菌的定植情况。利用HE染色、脾脏指数、胸腺指数,了解细菌干预后荷瘤鼠炎症反应、免疫功能及肿瘤转移的情况。结果 无毒诺维氏梭低、中、高剂量组抑瘤率分别为8.49%、44.59%、14.84%,高剂量组小鼠一般情况最差,中剂量组小鼠一般情况最好。肿瘤中有诺维氏梭菌定植,主要脏器无该菌定植。高剂量组和中剂量组荷瘤鼠脾脏质量明显增大,两组脾脏质量和指数与生理盐水组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。高剂量组胸腺显著缩小,但胸腺指数各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 无毒诺维氏梭菌能选择性地定植于肝癌区,中剂量（1.0×108 mL-1,0.5 mL）无毒诺维氏梭菌能有效抑制免疫正常小鼠H22皮下移植瘤,可能与抗肿瘤免疫和炎症反应有关。     

诺维氏梭菌对小鼠移植性肝癌的抑制作用

目的 评估无毒诺维氏梭菌对小鼠移植性肝癌的抑瘤效应，及其在肿瘤和重要器官的定植情况，并确定瘤内注射的最佳剂量。方法 建立H22皮下移植瘤BALB/c小鼠模型后称小鼠重量、测肿瘤大小，并按随机原则分为生理盐水组、无毒诺维氏梭菌低剂量组（1.0×107 mL-1，0.5 mL）、中剂量组（1.0×108 mL-1，0.5 mL）和高剂量组（1.0×109 mL-1，0.5 mL）。每天观察小鼠的一般情况，每周3次定时测量小鼠重量，每周2次测肿瘤大小，评估细菌的抑瘤效应。采用革兰染色法、细菌培养法、PCR技术，了解肿瘤和重要器官中诺维氏梭菌的定植情况。利用HE染色、脾脏指数、胸腺指数，了解细菌干预后荷瘤鼠炎症反应、免疫功能及肿瘤转移的情况。结果 无毒诺维氏梭低、中、高剂量组抑瘤率分别为8.49%、44.59%、14.84%，高剂量组小鼠一般情况最差，中剂量组小鼠一般情况最好。肿瘤中有诺维氏梭菌定植，主要脏器无该菌定植。高剂量组和中剂量组荷瘤鼠脾脏质量明显增大，两组脾脏质量和指数与生理盐水组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。高剂量组胸腺显著缩小，但胸腺指数各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 无毒诺维氏梭菌能选择性地定植于肝癌区，中剂量（1.0×108 mL-1，0.5 mL）无毒诺维氏梭菌能有效抑制免疫正常小鼠H22皮下移植瘤，可能与抗肿瘤免疫和炎症反应有关。     

幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌BIB发酵及纯化工艺研究

目的初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌（BIB）的高密度发酵及其蛋白纯化工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,放大工艺至50L发酵罐中,对影响目的蛋白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种量、诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导持续时间及诱导剂添加方式等进行优化验证;并利用rBIB蛋白高等电点特性（pI=9.05）,在pH 7.0-7.5的磷酸盐缓冲液中目的蛋白带正电荷,采用阳离子交换层析进行纯化,对阳离子交换层析填料及纯化缓冲液的pH进行优化。结果经高密度发酵后BIB菌体产量为70g/L,蛋白表达量为32%;rBIB蛋白经阳离子交换层析纯化后其纯度为91.8%。结论该工艺的初步建立为深入研究rBIB蛋白性质及其规模化生产奠定了基础。     

流感流行及其基因疫苗的研究进展

流感的季节性流行和大流行给人类造成了很大的损失。注射流感疫苗是预防流感的主要措施之一。目前上市的人用流感疫苗主要是由鸡胚生产的传统灭活疫苗,在疫苗用毒株的获取和生产速度等方面有很大的局限性。基因疫苗研究在近年来取得了重大进展,显示出了传统疫苗所不能比拟的巨大优势,流感基因疫苗主要有DNA疫苗、腺病毒载体疫苗和痘病毒载体疫苗,本文就这三方面作一简要综述。     

HPV16 E7"自杀性"DNA 疫苗的构建及其体外表达特性研究

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的"自杀性"DNA疫苗,并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用。方法以pET32/E7质粒为模板,用PCR方法扩增HPV16 E7基因,构建真核表达重组质粒pSCA/E7,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒转染BHK-21细胞,然后用免疫荧光技术检测HPV16 E7在细胞中的表达,用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)进行染色检测其诱导细胞凋亡作用。结果PCR扩增得到约400 bp的目的基因片段,测序结果与GenBank中的东亚型HPV16 E7基因序列100%同源。免疫荧光技术检测证实,pSCA/E7重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的基因。TUNEL检测证实,pSCA/E7重组质粒能诱导被转染的BHK-21细胞发生凋亡。结论成功构建HPV16 E7基因的重组质粒pSCA/E7,该重组质粒可在BHK-21细胞中表达,并能诱导被转染的细胞发生凋亡。     

HPV16 E7“自杀性”DNA疫苗的构建及其体外表达特性研究

目的构建人乳头瘤病毒16型（HPV16）E7基因的“自杀性”DNA疫苗，并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用。方法以pET32／E7质粒为模板，用PCR方法扩增HPV16 E7基因，构建真核表达重组质粒pSCA／E7，经PCR、酶切和测序鉴定正确后，将重组质粒转染BHK-21细胞，然后用免疫荧光技术检测HPV16 E7在细胞中的表达，用dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）进行染色检测其诱导细胞凋亡作用。结果PCR扩增得到约400bp的目的基因片段，测序结果与GenBank中的东亚型HPV16 E7基因序列100％同源。免疫荧光技术检测证实，pSCA／E7重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的基因。TUNEL检测证实，pSCA／E7重组质粒能诱导被转染的BHK-21细胞发生凋亡。结论成功构建HPV16 E7基因的重组质粒pSCA／E7，该重组质粒可在BHK-21细胞中表达，并能诱导被转染的细胞发生凋亡。