原发性食管癌组织中多药抗药性基因1的表达

用ＲＴＰＣＲ方法，定量检测了３０例食管癌和相应切断正常粘膜组织中多药抗药（ＭｕｌｔｉＤｒｕｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）性基因１的表达。结果：癌组织中３３．３％的病例存在ＭＤＲ１基因的表达，而相对应的切断正常粘膜组织中，仅有１３．３％的病例存在ＭＤＲ１基因的表达，皆为低中度表达。Ｐ＜０．０５，２者间差异有显著性。但ＭＤＲ１基因的表达与食管癌临床病理资料如性别、年龄、肿瘤大小、分级、淋巴结转移、ＴＮＭ分期等无关。结果提示：ＭＤＲ１基因的表达在食管癌的发生中起一定的作用，它可能与食管癌的原发性耐药有关。     

谷胱甘肽硫转移酶同功酶基因在食管癌组织中的表达

采用ＲＮＡ斑点杂交分析方法，对４０例食管癌组织和相对应的正常粘膜组织中胱甘肽硫转移酶同功酶基因ＧＳＴ－π、ＧＳＴ－α和ＧＳＴ－μ基因情况进行研究，结果食管癌组织中ＧＳＴ－π基因表达阳性率为７７．５％，在相应的正常粘膜组织中表达的阳性率为９０．０％，在食管癌组织中ＧＳＴ－α和ＧＳＴ－μ基因表达水平较低，表达阳性率分别为３５．０％和２０．０％而正常粘膜组织中ＧＳＴ－α－ＧＳＴ－μ基因表达的阳性率分别为     

食管鳞癌p53蛋白表达与放射治疗疗效的关系

用免疫组化方法对２８例食管癌活检标本组织中ｐ５３蛋白表达情况进行了检测，并观察了其与临床放射治疗效果的关系。结果：食管鳞状细胞癌术前活检标本ｐ５３蛋白阳性表达率为４６．４％，放疗采用常规设计，放射治疗效果为ｐ５３阳性组ＣＲ４６％，ＰＲ１５％，ＰＤ３９％；ｐ５３阴性组ＣＲ５３％，ＰＲ４７％，ＰＤ０％。ｐ５３蛋白阳性者放疗疗效较阴性者差。结果表明：ｐ５３蛋白可以作为预测食管鳞癌放疗效果判断的参考指标之一。     

生物素交联补骨脂素标记HPV基因探针的制备

对含ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ质粒的大肠杆菌进行培养、扩增，提取大量质粒ＤＮＡ，纯化、酶切、回收ＨＰＶＤＮＡ片段，用国产生物素交联补骨脂素标记，再经纯化鉴定。制备的ＨＰＶＤＮＡ探针用亲合素辣根过氧化物酶显色，敏感性可达ｌｐｇ。检测靶核苷酸的敏感性可达５ｐｇ。该探针用于原位杂交检测１０例食管癌组织及相应癌旁粘膜组织中的ＨＰＶＤＮＡ，也取得良好结果。结果提示：用生物素交联补骨脂素标记基因探针是一种简单的方法，且效果良好，适于研究和临床检测。     

CEA基因沉默对基因工程腺病毒(H101)杀伤食管癌EC9706细胞的影响

目的：研究癌胚抗原（CEA）特异性基因沉默对基因工程腺病毒（H101）杀伤食管癌EC9706细胞作用的影响，以探讨影响H101敏感性的内在因素。方法：利用RNA干扰技术，构建针对人食管癌EC9706细胞的CEA siRNA载体，通过基因转染，在EC9706细胞中建立稳定的CEA基因沉默体系（干扰1组及干扰2组），并以空载体转染和采进行转染的EC9706细胞作对照，用H101在体外进行细胞毒性实验。结果：在此实验任何病毒浓度下，干扰2组与空载体组和对照组比较。生存率明显下降，有统计学意义（P〈0．05）；而干扰1组在低病毒浓度（≤1vp／cell）下，与空载体组和对照组比较，生存率下降，有统计学意义（P〈0．05），当病毒浓度〉1vp／cell时，无统计学意义（P〉0．05）。结论：提示CEA在H1001感染并杀伤肿瘤细胞过程中可能起一定作用，为进一步从基因水平探讨CEA的作用机制和提高瘩瘤腺病毒的治疗效果打下基础。     

人食管癌相关基因cDNA片段的克隆、筛选与初步鉴定

目的 :筛选和鉴定人原发性食管癌组织的相关基因 ,揭示食管癌的癌变机理。方法 :用高效、灵敏的荧光mRNA差异显示技术 ,以食管癌及相应的正常食管粘膜组织为对照 ,通过对其基因表达的比较 ,找出差异条带 ,利用ReverseNorthernDotBlot、DNA序列分析和NorthernBlot,并结合mRNA原位杂交技术对被筛片段进行鉴定。结果 :①在实验中分离、鉴定了 74条差异片段 ,其中包括正常组织表达而癌组织中不表达的差异片段 5 4个 ,癌组织中表达而正常组织不表达的差异片段 2 0个。②其中 1个片段C5 7(337bp)在GenBank数据库中没有发现同源的已知基因或片段 ,推测其可能为食管癌相关基因。③经NorthernBlot检测C5 7在癌组织中有表达信号。④原位杂交技术检测C5 7在癌组织中具有较高的阳性表达率 (74% )。结论 :食管癌组织中C5 7可能是新的食管癌相关的候选癌基因 ,它与食管癌的发生发展可能有关     

不同固定剂及固定时间对PCR扩增效果的影响

本研究选取五种不同固定液，分别按四种固定时间（12小时，24小时，48小时和72小时）对存在有HBVDNA的人肝癌组织进行固定，脱水包埋。然后提取组织DNA，观察不同固定液及固定时间对PCR扩增效果的影响。同时，还比较了从蜡块中制取PCR模板的四种方法。结果显示：新配中性缓冲甲醛液对组织DNA破坏较小，对PCR扩增效果影响亦较小且成本费用相对较低，固定时间最好不超过48小时。长期放置的用自来水配制的甲醛固定液对组织DNA破坏较大，DNA降解严重，直接影响PCR扩增效果。在用蜡块组织制备DNA模板上，传统酶消化，酚-氯仿抽提，酒精沉淀较为稳定，但所需组织相对较多。对小块组织，充分脱蜡，用双蒸水充分煮沸是制备PCR模板较简便的方法。根据本研究，笔者建议，在目前我国日常病理工作中，应重视对固定液的选择及固定时间的限制，以便能为进一步基因诊断提供先决条件。     

食管癌高危人群的筛查方法及监测技术的研究进展

在食管癌高发区进行高危人群的筛查方法及监测技术的研究将为食管癌的早期发现、早期治疗提供有力的客观依据，同时对食管癌的！级预防和病因学各种假说的印证具有重要的意义。为此该内容已被列为国家“八五”攻关项目。目前，与食管癌有关的筛查方法和监测技术，国内外已有不少探索性研究。笔者从现场实际应用情况出发，对此研究进展作一综述。一、食管拉网细胞学检查法自60年代初沈琼等创建了“食管细胞采取器”这一简便的食管细胞学检查方法以来，细胞学拉网一直是国内进行食管癌高危人群普查的有效方法。这种方法的食管癌检出率在门诊可…     

p53基因在食管癌组织中的高表达

本文利用免疫组化LSAB法检测了p53基因在35例食管癌组织中的表达情况。35例食管癌标本中，60％（21／35）的标本癌组织都存在有p53基因的高表达，其中18例标本同时存在有癌旁粘膜上皮p53基因在10例癌旁粘膜上皮中也存在高表达。p53的高表达主要位于核内，部分也有胞浆表达。p53基因的高表达与癌组织的分化程度有关，分化越差，阳性率越高（P＜0．0025）。p53基因的表达存在异质性，并与肿瘤细胞的浸润转移及细胞周期的不同有关。我们的结果表明，p53基因的高表达在食管癌的发生中是一个常见的基因改变，它在食管癌的发生发展中起着重要的作用。     

癌胚抗原基因抑制对溶瘤腺病毒H101治疗人食管癌裸鼠皮下移植瘤的影响

目的:观察癌胚抗原(CEA)特异性基因沉默对溶瘤腺病毒H101杀伤食管癌EC9706细胞作用的影响,以探讨影响H101敏感性的内在因素.方法:利用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对人食管癌EC9706细胞的CEAsiRNA载体,通过基因转染,在EC9706细胞中建立稳定的CEA基因沉默体系,并以空载体转染和未进行转染的EC9706细胞作对照,建立人食管癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,用H101进行瘤内注射.采用Real Time PC和Western Blot方法检测移植瘤组织中CEA的表达,测量肿瘤体积.结果:降低CEA在mRNA和蛋白质水平的表达,对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤成瘤时间和体积无影响,经H101瘤内注射治疗后,干扰组、空载体组和对照组肿瘤体积分别为(50.16±19.01)、(208.13±72.29)、(219.46±46.56)mm3,干扰组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而空载体组与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05).论:抑制食管癌EC9706细胞中CEA的表达,可引起H101敏感性增加.