新生儿肺炎并发脑膜炎脑脊液的特点及临床意义

目的探讨新生儿脑脊液的特点及临床意义。方法回顾性分析63例新生儿肺炎并发脑膜炎的临床资料,比较不同性别、不同发病时间患儿的实验室检查特点。结果 98.41%新生儿肺炎并发脑膜炎,脑脊液细胞学分类单核细胞占(77.60±12.36)%。不同性别组实验室检查结果比较差异无统计学意义(P>0.05);早发性肺炎组并发脑膜炎患儿的脑脊液葡萄糖较晚发性肺炎组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生儿肺炎并发脑膜炎的脑脊液细胞学以单核细胞反应为主,男孩比女孩更容易患新生儿肺炎并发脑膜炎,性别与发病时间对新生儿肺炎并发脑膜炎患儿的实验室检查指标无影响。     

小鼠miRNA-203慢病毒过表达载体的构建及病毒包装与滴度测定

目的构建microRNA-203（miR-203）过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定。方法利用化学合成miR-203发夹前体结构RNA（small hairpin RNAs,hRNA）,并将其克隆入pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;利用脂质体将鉴定的阳性重组pSicoR-miR-203表达载体、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三个质粒共转染到HEK-293T细胞,分别在48h和72h收获上清,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液梯度稀释后感染293T细胞,检测病毒滴度,并将制备的病毒颗粒尾静脉注射Balb/c小鼠,检测miR-203在小鼠体内的表达与分布情况。结果酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-203重组质粒,并成功的包装成慢病毒,病毒滴度为5×107 TU.mL-1。重组病毒在Balb/c小鼠肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有表达。结论成功构建miR-203慢病毒表达载体,获得高效表达miR-203的慢病毒颗粒,为miR-203靶基因筛选及其功能的研究奠定了基础。     

热休克胃癌细胞负载DC-CIK细胞杀伤癌细胞活性的研究

目的研究负载相关抗原的树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞对胃癌细胞的杀伤作用。方法取健康人外周血并分离出外周血单个核细胞(PBMC),经不同细胞因子分别诱导出DC和CIK细胞,热休克方法处理胃癌MKN-28细胞株并制备肿瘤抗原用于负载DC,与CIK细胞共培养,以流式细胞术检测DC、CIK细胞表型,MTS法检测CIK细胞对MKN-28细胞的杀伤作用。结果 CIK与DC共培养后,与单纯CIK细胞相比较,增殖活性明显提高,CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞数增多并且具有更强的杀瘤活性,效靶比为20.0∶1时,负载MKN-28抗原的DC-CIK(Ag-DC-CIK)组对MKN-28的杀伤活性为(57.96±2.23)%,远大于未负载MKN-28抗原的DC-CIK组[(38.02±2.06)%]和单纯CIK组[(29.78±1.84)%],差异具有统计学意义(P<0.05)。结论以热休克凋亡肿瘤细胞抗原负载的DC能促进CIK细胞增殖分化,并提高其对胃癌细胞的杀伤活性。     

CIK、DC-CIK细胞杀伤胃癌MKN-28细胞的作用比较

目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后对胃癌MKN-28细胞株的杀伤作用。方法取正常人外周血,分离出外周血单个核细胞(PBMC),加入不同的细胞因子分别诱导出DC和CIK细胞,共培养成DC-CIK细胞,以MTS法测定不同组CIK细胞对MKN-28杀伤活性。结果与单纯CIK细胞相比较,DC-CIK组细胞增殖速率明显提高(P<0.05);具有更强的杀伤胃癌MKN-28细胞株的活性(P<0.05),效靶比为20.0∶1时,DC-CIK组对MKN-28的杀伤活性为(38.02±2.06)%,>CIK组的(29.78±1.84)%,差异有统计学意义。结论 DC-CIK细胞是一种增殖活性和细胞毒作用均高于单纯CIK细胞的免疫活性细胞。     

miR-583靶向调控DDX5促进HBV复制和表达

目的 探讨miR-583对乙型肝炎病毒（HBV）复制、表达的影响及相关作用机制。方法 体外培养人肝癌细胞HepG2、人稳转HBV病毒的肝癌细胞HepG2.2.15,并将HepG2.2.15分为空白对照组、NC-siRNA组（转染NC-siRNA）及miR-583 siRNA组（转染miR-583 siRNA）。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测miR-583、DDX5 mRNA及HBV DNA表达,酶联免疫（ELISA）检测乙型肝炎病毒s抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）表达水平,双荧光素酶法验证miR-583与DDX5的靶向关系。 结果 与HepG2细胞相比,HepG2.2.15细胞中miR-583表达水平显著升高（P＜0.05）,DDX5 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）。与NC-siRNA组相比,miR-583 siRNA组HepG2.2.15细胞中miR-583表达水平显著降低（P＜0.05）,DDX5 mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）,细胞上清液中HBV DNA、HBsAg、HBeAg表达水平显著降低（P＜0.05）。Target ScanHuman网站预测及双荧光素酶实验结果均显示,miR-583与DDX5存在靶向调控关系。 结论 miR-583能促进HBV复制、表达,可能与靶向抑制DDX5表达有关,下调miR-583表达可抑制HBV复制、表达。     

回顾性分析成人化脓性脑膜炎细菌构成及其脑脊液分布特点

目的回顾性分析宁夏地区成人化脓性脑膜炎(purulent meningitis in adult,APM)患者脑脊液(cerebrospinal Fluid,CSF)细菌构成及特点。方法收集宁夏医科大学总医院2002年01月至2014年07月诊治并行细菌培养的144例化脓性脑膜炎患者临床资料,分析比较致病菌检出阳性与阴性的实验室检查特点,以及不同致病菌(革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌及革兰阳性杆菌)患者之间实验室检查特点。结果 144例化脓性脑膜炎的细菌检出阳性率为36.8%(53例),致病细菌以革兰阳性球菌常见[64.15%(34例)],其中以葡萄球菌属为主;细菌检出阳性组患者的血中性粒细胞比例、脑脊液白细胞计数及脑脊液蛋白含量均高于阴性组(分别(82.52±9.43)%,(78.13±13.25)%,P=0.022;(4078.13±5739.24)×10~6/L,(2181.61±4440.87)×10~6/L,P=0.010;(2.99±2.67)g/L,(2.18±2.01)g/L,P=0.041)。发病10d内就诊的101例患者,细菌检出阳性组脑脊液压力、脑脊液白细胞计数、脑脊液中性粒细胞比例亦均高于阴性组((263.82±55.05)mmH_2O,(236.03±66.26)mmH_2O,P=0.032;(4660.45±5756.37)×10~6/L,(2745.97±5193.33)×106/L,P=0.008;(70.21±30.51)%,(56.79±35.54)%,P=0.048),脑脊液淋巴细胞比例较阴性组低((18.92±24.10)%,(32.02±32.10)%,P=0.023)。结论成人化脓性脑膜炎的致病菌以革兰阳性球菌多见,其细菌培养阳性患者的脑脊液与培养阴性者具有一定差异,可能会为临床诊疗提供参考价值。     

16SrDNA测序在细菌性重症肺炎痰液致病菌分析中的应用

目的 采用16S rDNA测序,分析重症肺炎痰液中致病菌构成,探索病原学诊断的新方法.方法 收集细菌性重症肺炎患者的痰液标本,运用聚合酶链反应（PCR）扩增及高通量测序技术,对标本中病原菌16SrDNA V3～V5区进行多样性分析.结果 测序显示痰液样本含有的物种种类相对较多,还存在较多未被测序检测到的物种,优势菌属主要为链球菌属、变性菌属、不动杆菌属、鞘氨醇单胞菌属、普氏菌属、克雷伯菌属、假单胞菌属、水杆菌属、棒状杆菌属等.结论 细菌性重症肺炎痰液致病菌种复杂多样,物种丰富,16S-rDNA测序是临床实践中一种新的尝试.     

拉莫三嗪RP-HPLC分析方法的建立及应用

目的 建立适用于临床药物浓度监测的拉莫三嗪血药浓度的高效液相色谱分析法.方法 以替硝唑作内标,用氯仿作萃取剂,Symmetry-C 18反相色谱柱,乙腈-0.02mol·L-1,磷酸二氢钾（体积比为25：75）为流动相,流速为1 mL·min-1,柱温37℃,检测波长：210nm.结果 拉莫三嗪在0.5～ 8.0μg·mL-1范围内线性关系良好,日间、日内RSD均＜7.50％,提取回收率＞68.00％.结论 本方法简便、快速、灵敏、准确,能够满足拉莫三嗪临床药浓度监测及药代动力学研究的要求.