广西巴马小型猪PERV-env基因克隆及其组织表达谱分析

目的克隆广西巴马小型猪PERV-env部分基因,并研究其在不同组织中的表达差异。方法利用RT-PCR方法从巴马小型猪外周血白细胞中扩增PERV-env基因,并与部分国内外已发表的PERV-env基因序列进行同源性及遗传进化分析。以扩增获得的广西巴马小型猪PERV-env基因为模板设计引物,利用半定量RT-PCR的方法对广西巴马小型猪不同组织中PERV mRNA表达情况进行分析。结果在所检测的9个组织样品中PERV mRNA相对表达水平存在差异,肾及外周血淋巴细胞中PERV mRNA丰度最高,肺、心、肝、脾、胸腺、卵巢次之,且表达丰度差异不显著(P0.05),胰腺PERV mRNA表达丰度最低。结论以巴马小型猪胰岛细胞进行异种移植发生PERV感染的潜在危险性可能要低于其它器官,但仍需进一步研究证实。     

中国特有小型猪内源性反转录病毒囊膜基因的克隆及进化分析

目的克隆分析中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)囊膜基因(env),比较不同来源毒株的异同及系统进化关系。方法应用RT-PCR的方法分别从中国实验小型猪、巴马香猪及五指山小型猪外周血淋巴细胞中扩增PERVenv基因,克隆入T载体后测序;随后以PCR方法对克隆PERVenv基因进行分型检测;最后采用DNAsis及DNAstar软件对克隆的env基因和国外毒株env基因进行同源性及系统进化进行分析比较。结果本试验所克隆的3株PERVenv基因长度分别为1983bp、1986bp及1968bp,分别编码661、662和656个氨基酸,分型检测均为PERV-A亚型。同源性分析表明:国内这3个分离株env基因与国外来源于不同宿主的PERV-A、B、C亚型env基因的同源性分别在92.8~96.5%、69.4~73.4%及77.5%~80.8%之间。结论PERV中国株的进化与A、B、C亚型分类有关,与宿主、分布地域关系不大,且PERV-A亚型与C亚型的亲源关系更近于B亚型。