胰腺癌组织中BRAF表达的初步研究

目的:了解BRAF基因在正常胰腺和胰腺癌组织中的表达水平。方法:6例胰腺癌标本取自胰腺癌手术患者,3例正常胰腺组织取自外伤性胰腺损伤需切除部分胰腺者。用Trizol法抽提每份组织的总RNA,分别进行紫外分光光度计测定、琼脂糖凝胶电泳及Lab on ch ip检测,对总RNA进行质控;应用实时定量PCR技术检测正常胰腺和胰腺癌组织BRAF的mRNA水平;应用W estern b lot检测BRAF的蛋白表达水平。结果:BRAF mRNA水平在正常胰腺组织中为0.001 016 7±0.000 25,胰腺癌组织中为0.002 606 2±0.001 09,上调2.56倍;W estern b lot显示,正常胰腺组织BRAF蛋白表达为6.70±2.50,胰腺癌组织为21.23±5.60,上调3.17倍。结论:胰腺癌组织中BRAF mRNA和蛋白表达水平均明显上调,其可能的调控机制及生物学效应还有待进一步研究。     

胰腺癌组织中CDC25B表达及临床意义的初步探讨

目的研究CDC25B基因在胰腺癌组织中的表达,探讨其在胰腺癌发病机制中的作用。方法利用实时荧光定量-PCR技术检测24例胰腺癌组织和4例正常胰腺组织中CDC25B基因的表达,PCR产物的定量方法采用比较Ct法,应用western blot检测其蛋白的表达水平。用Kaplan-Meier生存率曲线分析CDC25BmRNA与预后的关系。结果实时荧光定量-PCR发现CDC25B基因平均模板量在正常胰腺组织中为0.000635±0.000210,胰腺癌组织中为0.001988±0.000650;与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中CDC25B mRNA表达上调3.13倍(P<0.05),CDC25B mRNA升高5倍以上者生存时间缩短。胰腺癌组织中CDC25B蛋白也过度表达,正常胰腺组织CDC25B蛋白表达为1.22±0.33,胰腺癌组织为5.56±1.57,上调4.56倍(P<0.01)。结论CDC25B在胰腺癌组织中表达明显上调,CDC25B mRNA升高者预后差。     

人BRAF野生型及V600E突变型真核表达载体的构建及表达

目的:构建BRAF野生型和V600E突变型真核表达载体;转染并筛选稳定表达BRAF的胰腺癌细胞株,为探讨BRAF V600E突变在胰腺癌发生发展中的作用提供合适的细胞模型.方法:将BRAF野生型及V600E突变型cDNA克隆于真核表达载体pCMV-Myc中,构建pCMV-Myc-BRAFW)及pCMV-Myc-BRAFV600E重组质粒,酶切鉴定、测序证实序列正确后,利用脂质体将重组质粒转染胰腺癌细胞Panc-1,经G418培养筛选获得抗性细胞克隆,用RT-PCR和Western blot鉴定野生型和V600E突变型BRAF基因在Panc-1细胞中的表达.结果.酶切鉴定和序列分析证实,重组克隆pCMV-Myc—和pCMV-Myc—BRAFV600E序列正确,RT-PCR和Western blot结果显示G418筛选获得的转基因Panc-1细胞稳定表达BRAF和BRAF V600E.结论:成功构建了pCMV-Myc-BRAFW和pCMV-Myc-BRAFV600E真核表达载体,建立了稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.     

CDC25B基因在肝细胞肝癌的表达

目的探讨CDC25B基因在肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达，以探讨其在HCC发生和发展中的作用。方法联合应用激光显微切割和实时定量PCR技术检测24例正常肝脏组织和24例HCC组织中CDC25B基因的表达，PCR产物的定量方法采用比较Ct法；应用Western blot检测其蛋白的表达水平；应用免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PC—NA）的表达。结果在显微镜下用激光显微切割机，将单个肝细胞成功切下，提取RNA后，逆转录成cDNA，实时定量PCR发现CDC25B基因平均模板量在正常肝脏组织中为0．0006350±0．00021，HCC组织中为0．001988±0．00065，上调约3倍（P〈0．01）。CDC25B mRNA的表达与PCNA明显相关（r=0．45，P〈0．05）。HCC组织中CDC25B蛋白也过度表达，正常肝脏组织CDC25B蛋白表达为1．02±0．43，HCC组织为6．01±1．66，上调约6倍（P〈0．01）。结论CDC25B在HCC组织中表达明显上调，该基因的高表达与细胞周期调节机制的关系以及在HCC细胞的恶性转化中的作用还有待进一步探讨。     

Walker-256大鼠移植性肝癌模型探讨

目的 Walker-256细胞质肝内接种制备大鼠移植性肝癌模型.方法 取体重150～180g雄性Spraque-Dawley (SD)大鼠72只,随机分为实验组和对照组:实验组(n=60)肝内接种Walker-256细胞质;对照组(n=12)肝包膜下注射相同剂量的生理盐水,1周后观察肿瘤大小、并进行病理学检测.结果 实验组大鼠共有15只大鼠死亡,而移植瘤肝癌模型出瘤率为100% (45/45),大多数大鼠伴有肺以及腹腔转移,并且均经过病理学证实.结论 Walker-256细胞质肝内接种可以成功建立适宜临床研究的肝癌模型.     

胰腺癌相关基因研究进展

胰腺癌是消化系统常见恶性肿瘤之一,在美国每年约有28,000到30,300新发病例,接近每年胰腺癌死亡例数[1]。据2000年上海市统计每10万人中就有6人患胰腺癌,其中5·5人死亡。目前胰腺癌主要是以手术为主的综合治疗,但切除率低,80%以上患者确诊时只能行探查或姑息性手术。因此,胰腺     

儿童Ⅲ型胰腺外伤六例治疗体会

目的 探讨儿童Ⅲ型胰腺外伤的治疗方法.方法 回顾性分析2010年1月至2015年6月收治的6例Ⅲ型胰腺外伤患儿的临床资料.本组均为男孩,年龄6岁4个月～11岁5个月.入院时均有不同程度腹痛,伴呕吐2例,伴发热1例;血淀粉酶(695.83±264.07) U/L,尿淀粉酶(4 163.67±5 546.53)U/L.CT检查,均提示胰管损伤可能,其中3例分别合并脾挫伤、左肾上腺挫伤加肺挫伤、左肾上腺挫伤.患儿均先给予生长抑素、禁食、静脉营养等保守治疗,但症状控制不满意.待血流动力学稳定后行逆行胰胆管造影(ERCP)加内镜鼻胰管引流术或胰管支架引流术.结果 6例ERCP造影提示1例胰头部、4例胰体部、1例体尾部主胰管损伤.行13次ERCP引流,2例经7次ERCP引流治愈;另4例6次ERCP引流症状控制不佳,3例穿刺引流,1例开放引流后治愈.6例随访胰管均修复、恢复通畅;2例超声检查示胰腺有局部细小囊性改变,无临床症状,淀粉酶恢复正常.结论 单独ERCP引流治疗儿童Ⅲ型胰腺外伤疗效不满意,有待更多临床总结;结合经皮穿刺引流和开放引流效果确切.儿童Ⅲ型胰腺外伤使用药物治疗加确切引流就能取得良好预后,应尽量避免复杂手术.     

高脂血症促使大鼠急性胰腺炎胰腺腺泡由凋亡趋向坏死

目的 通过建立高脂血症性急性胰腺炎大鼠模型,探讨高脂血症可能加重急性胰腺炎病程的机制.方法 D-果糖饮食诱导SD大鼠的产生高脂血症,在此基础上通过腹腔注射蛙皮素诱导急性胰腺炎,并且设立正常组、高脂血症组和急性胰腺炎组作为对照.8周后,取大鼠血浆检测血糖、血脂和游离脂肪酸等指标;收集大鼠胰腺以及胰周组织,检测组织匀浆中ADP与ATP比值,通过Western blot法检测组织中caspase-3和caspase-8等蛋白以及其底物的表达情况,对组织切片进行HE染色并通过TUNEL法分析组织凋亡和坏死的情况.结果 高脂血症性急性胰腺炎大鼠的血浆中血脂、游离脂肪酸等指标偏高;caspase-3和caspase-8活性片断表达下调,而其底物蛋白降解较少;TUNEL分析阳性率偏低,以上提示胰腺组织凋亡蛋白活性受到一定的抑制;另外,ADP与ATP比值相对较高,提示胰腺组织更易产生坏死反应.结论 笔者推测高脂血症可能通过促进大鼠胰腺组织由凋亡趋向坏死,从而加重急性胰腺炎病变程度.     

高脂血症和急性胰腺炎研究进展

急性胰腺炎是临床上较常见的急腹症,在美国,每年约300,000以上急性胰腺炎患者,其中约3,200病例死亡,在我国其发病率也呈逐年递增之势。尽管,绝大多数患者表现为急性水肿性胰腺炎,症状较轻;但是约25％的患者表现为急性重症坏死性胰腺炎,其病死率可高达30％～50％。因此,急性胰腺炎一直是研究的热点之一。下面就高脂血症和急性胰腺炎相关研究的进展综述如下。     

利用基因芯片技术检测BRAF基因在胰腺癌组织中的表达

目的：研究BRAF基因在正常胰腺与胰腺癌组织中表达的情况。方法：收集正常胰腺组织3例以及胰腺癌手术切除标本6例。后者均经病理学检查证实；用TRizol法对组织进行总RNA抽提，采用无RNA酶的DNA酶I等方法进行纯化；通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳以及Lab-on—chip对总RNA进行质控；利用寡核苷酸芯片技术检测正常胰腺和胰腺癌组织中BRAF基因的表达，并且应用逆转录聚合酶链反应（RT‘PCR）技术加以验证。结果：总RNA的OD260nm／OD280nm之值在1．8～2．0之间；琼脂糖凝胶电泳18s和28s电泳条带清晰，且28s和18s亮度之比≥2；Lab—on—chip检测显示18s和28s双峰比例及位置均正常。无降解杂峰出现。芯片杂交扫描图像信号清晰，具有较低的整体背景和较高的信噪比；Ratio分析表明，BRAF基因在胰腺癌组织中表达上调（Cy3／Cy5〉2．0）。RT—PCR验证了胰腺癌组织中BRAF mRNA表达上调。结论：BRAF基因在胰腺癌组织中表达上调，其在胰腺癌发生发展过程中的作用机制还有待于进一步探讨。