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目的:探讨IL-15、IL-21和4-1BBL组成的不同培养体系，对体外扩增的NK-92细胞毒活性的影响。方法:以三质粒系统包被携带IL-15、IL-21和4-1BBL基因的慢病毒，用慢病毒感染的方式制备2组饲养层细胞；筛选后经MMC处理分5组体外扩增NK-92细胞（NK-92组:NK-92细胞；K562组:K562细胞+NK-92细胞；IL-15组:表达IL-15和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞；IL-21组:表达IL-21和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞；IL-15+IL-21组:表达IL-15和4-1BBL的K562细胞、表达IL-21和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞）；通过CCK-8法，乳酸脱氢酶释放法检测体外扩增后NK-92细胞的细胞毒性；ELISA检测NK-92细胞上清中IFN-γ的水平，以评估NK-92细胞的抗肿瘤效应。结果:两组转染后的HEK293FT细胞以及慢病毒感染的K562细胞携带绿色荧光，两组饲养层细胞成功表达目的基因；各组饲养层细胞都能刺激NK-92细胞大量增殖；随着效靶比的逐渐增加，IL-15组扩增后的NK-92细胞毒性显著高于其余各组（P<0.05）；效靶比为5∶1和10∶1时，IL-15组NK细胞IFN-γ的释放量显著高于其余各组（P<0.05）。结论:膜结合型IL-15、IL-21与4-1BBL联合都能引起NK-92细胞的大量增殖，且IL-15与4-1BBL联合运用扩增的NK-92细胞有更强的杀伤肿瘤细胞的能力。 相似文献
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目的 探讨内吗啡肽-1对心肌缺血再灌注损伤中PI3K/Akt信号通路的作用以及对细胞凋亡的影响。方法 将50只SD雄性大鼠随机分为5组：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、内吗啡肽-1后处理组（EM50组）、内吗啡肽-1+渥曼青霉素后处理组（EM50+Wort组）和PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素后处理组（Wort组）。采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min复制心肌缺血再灌注模型,实验期间动态监测大鼠心率、平均动脉压;再灌注结束后检测大鼠血浆乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛等生化指标,RT-PCR检测Bax和Bcl-2基因的表达情况,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、磷酸化Akt蛋白和总Akt蛋白的表达。结果 与S组比较,IR组心率和血压降低（P<0.05）;与IR组比较,EM50组心率和血压有所增高（339.94±26.65 vs 284.01±34.99;75.02±14.45 vs 55.83±20.98,P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性下降（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加（132.77±8.25 vs 84.10±12.42,P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较高（0.61± 0.06 vs 0.38±0.04,P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量降低（1.70±0.39 vs 3.78±0.71;0.30±0.08 vs 0.53±0.07,P< 0.05）,Bcl-2基因的表达量升高（1.20±0.44 vs 0.55±0.25,P<0.05）;与EM50组比较,EM50+Wort组心率和血压降低（P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性增加（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性降低（P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较低（P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量升高（P<0.05）,Bcl-2基因表达量降低（P<0.05）。结论 EM-1后处理可调节细胞凋亡,减轻心肌缺血再灌注损伤。PI3K/Akt信号通路可能对EM-1后处理产生的心肌保护效应发挥一定的介导作用。 相似文献
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目的制备靶向c-Met蛋白的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T), 并检测其对人非小细胞肺癌(NSCLC)H1975细胞的体外杀伤作用。方法将含c-Met抗体scFv片段的CAR序列插入慢病毒质粒中, 用酶切质粒电泳, 检测目的基因正确性。质粒转染工具为HEK293细胞, 收集浓缩慢病毒, 通过慢病毒感染的方式制备第二代c-Met CAR-T, 通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot验证CAR序列的表达, 采用流式细胞术检测c-Met CAR-T的阳性率、细胞亚型, 流式细胞术验证NSCLC细胞H1975中c-Met蛋白的阳性表达并选择c-Met蛋白阴性表达的卵巢癌细胞A2780作为对照, 采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测c-Met CAR-T在效靶比为1∶1、1∶5、1∶10、1∶20时对H1975细胞的杀伤作用。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测c-Met CAR-T在靶抗原刺激下, 细胞因子白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IFN-γ的释放情况。结果成功合成c-Met CAR慢病毒重组质粒, 酶切条带位置符合理论值。基因测序结... 相似文献
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