穿心莲茉莉酸甲酯及非生物胁迫下Real-time PCR内参基因的筛选

目的 筛选合适的穿心莲茉莉酸甲酯（MeJA）和非生物胁迫下实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测的内参基因。方法 利用高温、干旱、紫外和MeJA处理的穿心莲转录组数据，挑选到7个候选内参基因肌动蛋白1（ACT1），肌动蛋白2（ACT2），转录延伸因子（EF-1α），甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH），微管蛋白（TUB），多聚泛素酶（UBQ）和18S核糖体RNA（18S），并以上述处理后的穿心莲叶片为实验材料，进行Real-time PCR验证。利用geNorm，NormFinder 和BestKeeper 3种内参稳定性评估软件进行分析，再利用Refinder软件进行综合分析。结果 3种软件基于不同指标进行稳定性评估，结果并不相同，综合分析得出候选内参基因在高温胁迫下表达稳定性顺序依次为UBQ>18S>EF-1α>ACT2>ACT1>GAPDH>TUB；干旱胁迫下表达稳定性顺序依次为ACT1>UBQ>EF-1α>18S>ACT2>GAPDH>TUB；UV胁迫下表达稳定性顺序依次为EF-1α>TUB>ACT2>UBQ>18S>GAPDH>ACT1；MeJA胁迫下表达稳定性顺序依次为ACT1>EF-1α>UBQ>ACT2>18S>TUB>GAPDH。其中18S基因表达丰度较高，不适合作为内参基因。结合转录组数据对4种胁迫中穿心莲内酯合成相关基因酶羟甲基戊二酰-辅酶A合成酶（HMGS）的相对表达水平验证，发现合适内参基因的Real-time PCR结果更可靠。结论 穿心莲高温、干旱、紫外和MeJA胁迫时，UBQ，ACT1和UBQ，EF-1α和TUB，ACT1和EF-1α分别为最适内参基因组合，为后期开展穿心莲高温、干旱、紫外和MeJA处理中基因的功能调控和表达研究提供了参考。     

异甘草素联合顺铂抑制三阴性乳腺癌细胞增殖的效果研究

目的探究异甘草素（ISL）联合顺铂（DDP）抑制三阴性乳腺癌（TNBC）细胞增殖的效果,并初步探讨两者协同治疗TNBC的机制。方法将MDA-MB-231细胞分为ISL/DDP联用组、DDP处理组、ISL处理组和对照组。采用MTT法检测细胞活力并确定最佳协同比例及协同指数（CI）;采用AnnexinV-FITC和碘化丙啶（PI）双染法测定细胞凋亡率;采用彗星实验法分析细胞DNA损伤程度;采用Westernblot法检测骨髓细胞瘤癌基因（c-Myc）、重组酶51（Rad51）、乳腺癌易感基因1（BRCA1）、乳腺癌易感基因2（BRCA2）表达水平。结果DDP处理组中,随着DDP浓度的增加,细胞活力显著降低,对应的半数抑制浓度（IC50）为（29.8±2.3）滋mol/L;ISL处理组中,随着ISL浓度的增加,细胞活力逐渐降低,对应的IC50为（25.6±1.8）滋mol/L。DDP和ISL的最佳协同比例为1∶1。与对照组比较,DDP处理组和ISL处理组细胞凋亡率均明显增加（均P＜0.05）;与DDP处理组比较,ISL/DDP联用组细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）。与对照组比较,DDP处理组和ISL处理组细胞内均可见明显的DNA拖尾,DNA损伤程度显著;与ISL处理组比较,ISL/DDP联用组DNA拖尾现象更加明显;与DDP处理组比较,ISL/DDP联用组DNA拖尾现象无明显变化。与对照组比较,DDP处理组Rad51和BRCA1表达水平均明显增加（均P＜0.05）,ISL处理组c-Myc、Rad51、BRCA1以及BRCA2表达水平均明显降低（均P＜0.05）。与DDP处理组比较,ISL/DDP联用组c-Myc、Rad51、BRCA1以及BRCA2表达水平均明显降低（均P＜0.05）。与ISL处理组比较,ISL/DDP联用组c-Myc、Rad51及BRCA2表达水平均明显降低（均P＜0.05）。结论ISL和DDP联合应用可协同抑制TNBC细胞的恶性增殖、诱导细胞凋亡并加重DNA损伤程度,这可能与抑制DNA损伤修复相关基因c-Myc、Rad51、BRCA1和BRCA2的表达水平有关。     

大青转录组测序及生物信息学分析

【目的】利用高通量测序技术获得大青的转录组信息特征。【方法】通过高通量测序平台Illumina HiSeq;2500对大青进行转录组测序,采用Trinity软件de novo组装获得Unigene,并基于序列同源性对Unigene进行功能注释,得到大青转录组的遗传信息。【结果】测序数据经过质控后共获得26 394 223个高质量的Reads,通过de novo组装获得100 191个Unigene,N50长度为1 055 bp,平均长度724.4 bp。其中59 690个(59.58%)Unigene在NR、SwissProt、KOG、GO、KEGG数据库中均得到注释。其中KEGG数据库注释到38 260个Unigene,涉及136条代谢通路。在大青转录组中共鉴定到407个Unigene参与萜类化合物的生物合成,165个Unigene涉及类黄酮生物合成,29个Unigene参与黄酮和黄酮醇生物合成,37个Unigene参与异黄酮生物合成,同时,还鉴定到210类转录因子。MISA分析发现6 680个Unigene包含8 640个简单重复序列。【结论】利用高通量测序技术和生物信息分析获得了大青的转录组信息特征,这些数据可为后期开展功能基因鉴定、解析黄酮类化合物次生代谢途径及其调控机制奠定研究基础。     

中西医结合治疗产后乳汁分泌缺乏症

初产妇产后乳汁分泌缺乏者，一般单用中药、针灸或西药治疗即可获效，疗效不佳者，采用中西医结合治疗可获较好疗效。     

大青转录组测序及生物信息学分析

【目的】 利用高通量测序技术获得大青的转录组信息特征。【方法】 通过高通量测序平台Illumina HiSeqTM 2500 对大青进行转录组测序,采用Trinity软件de novo组装获得Unigene,并基于序列同源性对Unigene 进行功能注释,得到大青转录组的遗传信息。【结果】 测序数据经过质控后共获得26 394 223个高质量的Reads,通过de novo组装获得100 191个Unigene,N50长度为1 055 bp,平均长度724.4 bp。其中59 690个（59.58%）Unigene 在NR、SwissProt、KOG、GO、KEGG数据库中均得到注释。其中KEGG数据库注释到38 260个Unigene,涉及136条代谢通路。在大青转录组中共鉴定到407个Unigene参与萜类化合物的生物合成,165个Unigene 涉及类黄酮生物合成,29个Unigene参与黄酮和黄酮醇生物合成,37个Unigene参与异黄酮生物合成,同时,还鉴定到210类转录因子。MISA分析发现6 680个Unigene 包含8 640个简单重复序列。【结论】 利用高通量测序技术和生物信息分析获得了大青的转录组信息特征,这些数据可为后期开展功能基因鉴定、解析黄酮类化合物次生代谢途径及其调控机制奠定研究基础。     

较低剂量石英粉尘所致大鼠肺脏的早期变化

目的研究较低剂量的石英对肺组织损伤的特点。方法对大鼠采用较低剂量的石英和石棉粉尘（每只１０ｍｇ）染尘后，测定两种粉尘在两个月内所致大鼠支气管肺泡灌洗液中细胞总数、蛋白含量、总脂含量和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性等毒性指标以及全肺胶原含量的变化，并观察肺组织的病理改变。结果石英可引起灌洗液中细胞总数、蛋白质含量、总脂含量和ＬＤＨ活性持续升高，全肺胶原含量持续增加；而石棉只引起细胞总数和ＬＤＨ在染尘后１０天的一过性升高，全肺胶原含量虽也逐渐增加，但不如石英明显。结论较低剂量的石英具有很强的肺毒性和致纤维化能力。     

温石棉和石英引起肺组织细胞因子表达的比较研究

目的研究温石棉和石英对肺组织细胞因子表达的影响。方法用免疫组织化学法观察了温石棉和石英染尘后两个月内大鼠肺组织ＰＤＧＦ－Ｂ、ＴＧＦ－β１、ＴＮＦ－α表达水平的变化。结果石棉和石英均可引起这三种细胞因子的表达增加，但石棉诱导的细胞因子表达比石英更强、更持久。结论细胞因子，尤其是ＴＧＦ－β１的过度表达可能在石棉的致肿瘤过程中起一定作用。     

改良“Braden压疮危险性评估量表”的应用效果观察

目的：规范压疮的预防,评估压疮管理效果,提高临床护理质量。方法：将改良“Braden压疮危险性评估量表”与传统压疮评估量表的应用效果进行比较。结果：传统压疮评估量表的时间效率、动态评估效率、护理效率以及资料保存效果与改良表在临床应用中有显著性差异。结论：改良“Braden压疮危险性评估量表”可有效节省护理人员的时间,便于对皮肤状况进行连续、动态评估及护理且便于资料的收集和保存。     

中草药DUS测试应用与进展

中国药用植物资源丰富,但人工驯化的品种不多,中草药育种水平相对比较弱。中草药资源是开展品种选育的基础,药用植物新品种保护权对种质资源的保护和开发利用有重要的意义,但是大量的野生中草药资源还未研发出测试指南。从植物新品种保护权的发展、申请现状以及中草药开展DUS测试的进展进行了综述,为进一步利用DUS测试保护和利用中草药种质资源提供指导。     

沙利度胺对白血病细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤敏感性的影响

目的:探究沙利度胺对白血病细胞自然杀伤细胞及活性受体D(natural killer cell group 2 member D,NKG2D)配体表达及自然杀伤细胞(natural killer,NK)杀伤敏感性的影响。方法:取对数生长期白血病细胞株HL-60、K562细胞,以不同浓度沙利度胺作用48h,并设置未经沙利度胺处理的细胞为对照组,采用细胞计数实验(cell counting kit-8,CCK-8)检测沙利度胺对细胞的半抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50),实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)和流式细胞术检测细胞NKG2D配体[MHC-I类链相关分子A(major histocompatibility complex classⅠchain-related protein A,MICA)、MICB]及人巨细胞病毒UL16蛋白的结合蛋白[(UL16-binding proteins,ULBPs:ULBP1、ULBP2、ULBP3)]表达情况,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测沙利度胺对NK-92MI细胞的杀伤效率。结果:沙利度胺干预HL-60、K562细胞,IC50分别为30.06、31.95μg/mL,且随着沙利度胺浓度的升高,抑制作用越明显;与对照组比较,沙利度胺组MICB、ULBP1、ULBP2基因mRNA水平明显升高(P<0.05),但MICA和ULBP3 mRNA水平无明显变化(P>0.05);与对照组比较,沙利度胺组MICB、ULBP1、ULBP2表达明显升高(P<0.05),但MICA和ULBP3表达无明显变化(P>0.05);效靶比分别为1:1、5:1、10:1时,与对照组比较,沙利度胺组NK-92MI对细胞的杀伤效率明显升高(P<0.05)。结论:沙利度胺可能通过提高NKG2D配体MICB、ULBP1、ULBP2表达,提高HL-60、K562细胞对NK-92MI的杀伤敏感性。