核受体NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡

目的:探讨核受体亚家族6A1(NR6A1)对血管平滑肌细胞凋亡的影响及可能的分子机制。方法:将腺病毒Ad-NR6A1感染大鼠血管平滑肌细胞,分别在感染后0 h、24 h和48 h时进行MTT实验,以时间为横坐标,A570为纵坐标绘制细胞生长曲线,观察NR6A1对细胞生长的影响;进行DAPI染色、TUNEL染色及caspase活性检测,观察细胞凋亡情况;进一步通过基因芯片技术,寻找NR6A1的靶基因;采用siRNA介导的基因沉默技术,观察受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(RIPK3)基因沉默对NR6A1诱导的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果:腺病毒Ad-NR6A1感染细胞48 h时,NR6A1过表达组细胞数量较对照组(重组腺病毒载体Ad-Lac Z)明显减少;DAPI染色显示NR6A1过表达诱导血管平滑肌细胞出现核浓缩和核碎裂的凋亡表型,TUNEL染色显示NR6A1过表达引起细胞凋亡,caspase活性检测结果显示NR6A1过表达细胞内caspase-3、caspase-8和caspase-9活性均较对照组高;基因芯片技术检测发现,NR6A1过表达上调血管平滑肌细胞中RIPK3基因表达;RIPK3基因沉默可以显著抑制NR6A1诱导的平滑肌细胞凋亡。结论:NR6A1通过上调RIPK3基因表达诱导血管平滑肌细胞凋亡。     

PDCD4表达下调通过pAKT/pGSK3β途径促进胃癌顺铂耐药的机制初探

摘要：目的 探讨程序性细胞凋亡因子4（PDCD4）表达下调在顺铂诱导胃癌细胞凋亡中的作用机制,为胃癌的 顺铂耐药提供新的分子靶点。方法 通过在人胃癌细胞系SGC7901中敲减表达PDCD4基因,顺铂诱导细胞凋亡,将 细胞分为shNC组、shPDCD4组、shNC加药组和shPDCD4加药组,荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测PDCD4 mRNA 表达水平;Caspase-3活性测定试剂盒、Hoechst染色结合细胞免疫荧光检测细胞凋亡水平;Western blot检测磷酸化蛋 白激酶B（pAKT）和磷酸化糖原合成酶激酶3β（pGSK3β）蛋白表达水平。在细胞中加入特异性Akt抑制剂,将细胞分 为 shNC 加药组、shPDCD4 加药组、LY294002 阻断组（转染 shPDCD4 质粒,先加 LY294002 再加入顺铂处理）和 Wortmannin 阻断组（转染 shPDCD4 质粒,先加 Wortmannin 再加入顺铂处理）,Western blot 检测聚 ADP-核糖聚合酶 （PARP）蛋白表达水平。结果 qRT-PCR 和Western blot 检测结果证实稳定转染ShPDCD4质粒的SGC7901细胞中 PDCD4的mRNA表达和蛋白表达均有显著下降,体外稳定转染ShPDCD4的SGC7901胃癌细胞株构建成功。相较于 shNC 加药组,shPDCD4 加药组 Caspase3 活性下降,细胞凋亡降低（P＜0.05）。PDCD4 表达下调将导致 pAKT 和 pGSK3β的表达水平提高（P＜0.05）,应用Akt抑制剂（LY294002、Wortmannin）阻断该信号通路后,PARP的相对表达 水平重新上调（P＜0.05）。结论 PDCD4表达下调能够通过pAKT/pGSK3β途径降低顺铂引起的胃癌细胞凋亡,进而 促进细胞顺铂耐药的形成。     

RXRα对正常及形觉剥夺豚鼠屈光状态及眼球生长的调控

目的 通过对豚鼠球旁注射RXRα激动剂或抑制剂,研究RXRα在正常及形觉剥夺豚鼠屈光状态及眼球生长方面的调控作用,从而明确RXRα在屈光发育和近视形成中的作用.方法 实验研究.将245只正常3周龄体质量在100 g左右的三色豚鼠245只,采用直接抽样法分为正常组和形觉剥夺(FDM)组,2组又各分为空白对照组、溶剂组和给药组.溶剂组和给药组豚鼠每天右眼球旁分别注射DMSO或RXRα激动剂Fluorobexarotene或RXRα抑制剂HX531,连续注射4周,对侧眼不做处理.实验前和实验后2、4周分别检测屈光度和眼轴参数.正常组在实验结束后免疫荧光检测巩膜RXRα含量.采用独立样本t检验和单因素方差分析进行数据分析.结果 球旁注射Fluorobexarotene 4周后,豚鼠巩膜RXRα表达增加;球旁注射HX531 4周后,巩膜RXRα表达减少.不论注射RXRα激动剂或是抑制剂,正常组及形觉剥夺组豚鼠屈光状态和眼轴参数变化差异均无统计学意义.结论 球旁注射RXRα激动剂Fluorobexarotene或抑制剂HX531对正常及形觉剥夺豚鼠屈光发育及眼球生长无明显影响,提示单独RXRα对正常以及FDM豚鼠的屈光发育和眼球生长可能没有直接调控作用.     

多药耐药基因MDR 1 和细胞自噬在 肿瘤多重耐药机制中的研究进展

肿瘤是威胁人类健康的恶性疾病。化疗是目前临床抗肿瘤最常用的治疗方法,化疗药物具有 较广的抗瘤谱。但肿瘤多重耐药的发生是导致化疗疗效不佳的主要原因。肿瘤多重耐药机制非常复杂,与 药物代谢、药物靶点改变、DNA 修复增强、细胞周期改变及肿瘤微环境等均有密切联系。其中多药耐药基 因MDR 1 表达的膜转运蛋白P- 糖蛋白参与的化疗药物逆向转用是多药耐药发生的重要机制之一,但是针 对MDR 1 的一些抑制剂并不能很好地解决肿瘤的耐药问题。近年来研究发现,细胞自噬直接参与肿瘤多药耐 药,联合调控MDR 1 的表达及肿瘤细胞自噬水平将可能改善肿瘤细胞的多重耐药。该文主要从多药耐药基因 MDR1 的表达调控及细胞自噬水平改变两方面综述肿瘤细胞多重耐药机制的研究进展。     

基于阻断蛋白质相互作用的抗肿瘤多肽研究进展

肿瘤的发病率在逐年增长,其中恶性肿瘤严重影响着人类的健康和生命。目前,临床上常规抗癌药物由于存在靶向性较低、毒副作用明显、容易产生耐药性等缺点,正在失去其一些治疗用途。而抗肿瘤多肽类药物拥有分子量小、靶向性强、特异性高、毒性弱、易于合成等特点,使其成为了治疗肿瘤的新方法。抗肿瘤多肽主要包括天然多肽、人工修饰多肽及人工合成多肽,其作用机制非常复杂,主要包括抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,促肿瘤细胞凋亡,免疫调节等。该文从多肽通过阻断蛋白质相互作用发挥抗肿瘤作用这一机制进行概述。