CD49f剪接异构体在不同细胞系中的表达

目的比较CD49f选择性剪接异构体在人不同来源干细胞以及结肠癌细胞系中的表达,并构建特定异构体过表达载体用于功能研究。方法 RT-PCR及real-time PCR检测CD49f选择性剪接异构体在不同细胞中的表达;分子克隆方法构建各异构体的慢病毒过表达载体;流式细胞计量术、Western blot及real-time PCR检测CD49f各异构体的过表达;Transwell方法检测细胞侵袭能力的改变。结果人胚胎干细胞系H9中表达CD49f异构体B,而上皮类细胞仅表达异构体A;间质细胞中二者均有表达,但异构体A表达多于异构体B;检测的4个结肠癌细胞系中CD49f异构体A和B均有表达,其中HT29和HCT116中以异构体A为主,而HCT8和LoVo中异构体B的表达更为明显。构建的慢病毒表达载体可使HT29中CD49f异构体A和B获得特异性过表达,其中异构体B的过表达使HT29的侵袭能力增加。结论不同类型细胞中CD49f选择性剪接异构体A和B的表达存在显著差异,二者的生物学功能具有差别。     

间质细胞双尾C基因条件性敲除小鼠模型建立及其表型分析

目的构建间质细胞双尾C(Bicc1)基因条件性敲除小鼠模型, 并对其表型进行分析。方法将CRISPR Cas9方法构建的Bicc1f/+小鼠子代与Pdgfra启动子驱动的Cre小鼠进行杂交, 获得子代小鼠, 饲养1～2周后提取其脚趾及鼠尾组织基因组DNA, 经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后, 在DNA水平检测小鼠基因型;选取经鉴定后生长至3周龄的Bicc1基因条件性敲除小鼠(实验组)、野生型小鼠(对照组)各3只进行后续实验:通过腹腔注射他莫昔芬进行诱导敲除Bicc1基因, 于1周后取小鼠肾脏、骨骼肌、皮肤及脂肪组织, 一部分组织通过实时定量PCR(RT-qPCR)鉴定其中的Bicc1 mRNA表达水平;另一部分组织以10%多聚甲醛固定, 随后进行HE染色和Masson染色, 在光镜下观察分析。应用SPSS 28.0软件对数据进行分析, 组间比较采用t检验, P<0.05表示差异有统计学意义。结果通过繁育获得间质细胞Bicc1基因条件性敲除小鼠, 基因型为Bicc1f/fCre+/-, 野生型小鼠基因型为Bicc1f/fCre-/-;RT-qPCR检测结果显示, 实验组小鼠肾脏、骨骼...     

人脐带间充质干细胞对脊柱关节炎患者外周血T细胞产生IL-17的抑制作用

本研究通过观察人脐带间充质干细胞(hUCMSC)对脊柱关节炎(SpA)患者外周血T细胞产生IL-17的抑制作用,初步探索hUCMSC在SpA治疗领域的应用前景。体外分离SpA患者及健康志愿者外周血单个核细胞(PBMNC),PBMNC单独培养或与hUCMSC共培养,应用流式细胞仪检测T细胞中CD3+CD4+IL-17+(Th17)及CD3+γδTCR+IL-17+细胞比例;应用ELISA检测细胞培养上清中IL-17的浓度。结果表明,SpA患者外周血T细胞中Th17细胞占(3.42±0.82)%,CD3+γδTCR+IL-17+细胞占(0.30±0.10)%,分别是健康对照组(0.75±0.25)%和(0.06±0.02)%的4.5倍及5倍(P<0.01);SpA患者PBMNC与hUCMSC共培养后,T细胞中Th17细胞下降为(1.81±0.59)%,CD3+γδTCR+IL-17+细胞下降为(0.16±0.06)%(P<0.01);ELISA检测结果表明,SpA患者PBMNC培养上清IL-17的浓度显著高于健康对照组[(573.95±171.68)pg/ml vs(115.53±40.41)pg/ml(P<0.01)];SpA患者PBMNC与hUCMSC共培养后,细胞上清IL-17的浓度下降至(443.20±147.94)pg/ml(P<0.01)。结论:hUCMSC能够抑制SpA患者外周血T细胞产生IL-17,在SpA临床治疗中具有应用前景。     

OCT4异构体在人胚胎干细胞和间充质干细胞中的表达

目的比较OCT4异构体(OCT4A、OCT4B、OCT4B1)及其调控因子在人胚胎干细胞(hESC)和人间充质干细胞(hMSC)中的表达。方法利用RT-PCR、免疫荧光染色、流式细胞分析及体内/外分化实验,鉴定hESC及hMSC的生物学特性;应用real-time PCR、Western blot和流式细胞分析比较OCT4异构体及其转录因子NANOG,SOX2和mRNA结合蛋白LIN28在hESC及hMSC中的表达水平。结果 OCT4异构体mRNA在hESC和hMSC中均有表达,在hESC中的表达显著高于在hMSC中,并以OCT4A的差别最为显著(P0.01);在蛋白水平,hESC表达OCT4A和OCT4B-256aa,hMSC不表达OCT4异构体蛋白。hESC高表达OCT4的调控因子NANOG、SOX2和LIN28;hMSC低表达SOX2,不表达NANOG和LIN28。结论 NANOG、SOX2和LIN28调控OCT4的表达,OCT4异构体在hESC和hMSC中的表达差异提示其可能是不同发育阶段干细胞自我更新和分化潜能等方面差别的主要因素之一。     

应用小室模型再生毛发的实验研究

目的 建立毛囊重建小室模型,并应用该模型进行毛发再生实验研究。方法 制备小室模型,分离C57BL/6新生小鼠的表皮和真皮细胞,混合后注入小室内。7 d后拆除小室,并观察创口部位的毛发再生情况。30 d后对创口部位皮肤取材,行HE染色,观察其形态结构。结果 裸鼠小室植入部位创面愈合并可见毛发再生,新生毛发大体观和镜下观与正常毛发无明显差异,且排列极性、生长密度良好。对部分无毛发再生的创面进行分析,发现模型构建过程中小室植入的位置对毛囊再生具有重要的影响。结论 应用小室模型和新生鼠表皮真皮细胞可以成功实现毛发再生,小室模型是一种可用于毛囊再生研究的良好动物模型,且小室的植入位置对该模型的成功与否具有重要影响。