34例服用“吉林红丹三号”患者汞负荷及毒性反应的研究

吉林红丹三号的研究为治疗脑血栓偏瘫病人提供了必要的安全剂量范围,对开发祖国医药遗产也有一定价值。通过两地区的流行病学调查与临床观察,证实该地区临床服药病人的发汞、血汞值均未超过健康人群的95％正常值的范围,在一定程废上可以说汞在体内无明显的蓄积现象。根据毒理、药理的实验结果(另有报告)及环境流行病学调查资料综合分析,吉林红丹三号每丸含汞量为28mg、每日服一丸、连服一个月,可视为安全剂量的最大范围。     

沙蚕提取物的抗氧化活性研究

目的探讨沙蚕提取物的抗氧化活性。方法采用DPPH法观察沙蚕提取物的抗氧化活性，通过Sephadex LH-20凝胶过滤，对沙蚕提取物中的抗氧化物质进行了初步分离纯化。结果与结论沙蚕提取物具有较强的清除自由基（DPPH）的能力，通过定性分析方法确定该物质为一类小分子量的多肽类物质。     

长春新碱对人成骨肉瘤MG63细胞的促凋亡作用及其机制

目的：观察长春新碱对人成骨肉瘤MG63细胞促凋亡作用,探讨其引起细胞凋亡的分子机制。方法：以0、5、10、20、50、100 μg/L不同浓度长春新碱处理的MG63细胞,分别经Annexin V - PI 双染和DCFH-DA染色后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞内活性氧化物（ROS）水平,用实时定量RT-PCR分析mRNA表达水平。结果：较低浓度（10 μg/L）长春新碱即可使MG63细胞凋亡率升高至17.6%（P<0.05）,且随着长春新碱浓度的增加细胞凋亡率增加,呈明确的剂量-效应关系;更低浓度（5 μg/L）长春新碱即可引起细胞内ROS水平明显升高及过氧化氢酶（CAT）基因表达下调（P<0.05）。结论：长春新碱从较低浓度起即有促进细胞凋亡作用,其作用机制是通过下调CAT基因表达,导致细胞内ROS异常蓄积以促进MG63细胞凋亡     

青岛海域浒苔蛋白提取及其抗肿瘤活性的初步研究

目的提取浒苔蛋白并研究其对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法用20 mol／L的Tris—HCl（pH8．0）缓冲液悬浮新鲜浒苔，悬浮液反复冻融结合超声波细胞破碎法提取其中的浒苔蛋白。采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）研究浒苔蛋白对乳癌细胞EMT6生长的抑制作用，观察肿瘤细胞形态学的变化。建立乳癌细胞EMT6荷瘤小鼠模型，研究浒台蛋白对荷瘤小鼠瘤径和瘤体质量的影响。结果浒苔蛋白粗提率为0．54％，主要是相对分子质量约为25000的蛋白。随着浒苔蛋白浓度的增加，肿瘤细胞存活率逐渐降低，抑制率逐渐增加；光镜观察结果显示，浒台蛋白作用48h后，肿瘤细胞出现明显的形态学改变。瘤体内注射浒苔蛋白可显著缩小瘤径和瘤体质量，抑瘤率达25％。结论浒苔蛋白在体内、体外均能够抑制肿瘤细胞的增殖，并呈明显的量效关系。     

照射骨髓基质细胞对辐射损伤小鼠造血重建的影响

采用辐照方法将骨髓基质细胞(BMSC)预先强化,再经体外培养、富集后与骨髓细胞(BMC)一起经尾静脉输注给全身致死剂量照射的小鼠。采用股骨BMC计数,CFU-GM和CFU-S测定及股骨切片组织学观察等方法研究了这种细胞对辐射损伤小鼠造血重建的影响。结果表明输入的BMSC对辐射损伤小鼠造血重建具有促进作用。进一步研究表明,这种细胞对辐射损伤小鼠造血重建的促进作用不是由于其中含有造血干细胞(HSC)所致,而是通过其经血循环迁徒至造血组织后对同时输入BMC中的HSC增殖和向粒系分化发挥支持和刺激作用来实现的。     

AD7c-NTP与麦芽糖结合蛋白的融合表达、纯化及其抗血清制备

人工合成了编码AD7c-NTP的基因,并将其中的6种密码子GGA AGG AGA ATA CTA CCC分别突变成大肠杆菌偏爱密码子GGT CGT CGT ATC CTG CCG,PCR扩增后克隆到表达载体pMAL-c2上,构建表达质粒pMAL-AD7c,重组质粒导人E coli BL21(DE3)构建工程菌,IPTG诱导实现了MBP-ADTc-NTP融合蛋白在工程菌中的高效表达,细胞裂解液经Amylose-resin亲和层析、DEAE-Sepharose离子交换层析以及Su—perdex 200凝胶过滤层析,得到了电泳纯的融合蛋白。纯化的融合蛋白免疫家兔制备了兔抗MBP-AD7c-NTP 融合蛋白的抗血清,利用该抗血清及点杂交技术,初步分析了10例AD疑似患者的尿样.结果表明5例疑似患者的尿样呈阳性,另5例呈阴性。     

重组沙蚕溶栓活性蛋白酶的纯化及其性质研究

目的表达、纯化重组沙蚕溶栓活性蛋白酶并对其性质进行研究。方法将表达载体pMAL-PPA转化入Ecoli DH5α构建工程菌，IPTG诱导工程菌大量表达麦芽糖结合蛋白一沙蚕溶栓活性蛋白酶（MBPPPA），细胞裂解液中融合蛋白经Amylose-resin亲和层析与DEAE-Sepharose FF离子交换层析得到了纯化。用Factor Xa切割融合蛋白后经酪蛋白平板法检测其纤维蛋白溶酶原激活活性，然后对其部分性质进行了研究。结果构建了表达MBP—PPA的工程菌。经纯化得到相对分子质量约51kDa的融合蛋白，Factor Xa切割融合蛋白后，重组沙蚕溶栓活性蛋白酶（PPA）体外具有纤维蛋白溶酶原激活活性，性质研究表明PPA热稳定性好，最适pH为8．0，该酶在pH6．0～9．0范围内有较好的稳定性，酶活在有机溶剂中至少维持20d，25mmol·L^-1PMSF能完全抑制其活性。结论证实PPA是一种纤溶酶原激活剂，且将来有望成为一种新型溶栓药物。     

转移潜能不同的人前列腺癌细胞系差异膜蛋白质组学的分析

目的：通过应用鸟枪法蛋白质组学技术发现早期诊断和逆转前列腺癌转移的分子标志。方法：应用鸟枪法蛋白质组学技术，比较人高转移前列腺癌细胞株（PC-3M）和人低转移前列腺癌细胞株（PC-3）间膜蛋白表达的差异。用sDSPAGE胶分离膜蛋白，并且进行胰酶消化，用反相液相色谱分离肽混合物后进行ESI-MS／MS鉴定，用数据库查询结合生物信息学技术比较分析并识别细胞间的差异表达膜蛋白。结果：1）利用Gel-1DLC-MS／MS分析，在严格的过滤参数条件下鉴定了PC-3和PC-3M两种细胞中的蛋白，在PC-3细胞中鉴定了2172个蛋白．在PC-3M细胞中鉴定了2023个蛋白。2）用GOA分析软件进行分类，PG3细胞中1499个蛋白为已知细胞组分，其中564（38．13％）个蛋白为膜蛋白或者膜相关蛋白；PC-3M细胞中1391个蛋白为已知细胞组分，细胞组分中527（38．30％）个为膜蛋白或者膜相关蛋白。几个假设蛋白和cDNA序列也被预测。3）用蛋白名称和IPI数据库号对比分析后发现有161个蛋白质仅在PC-3前列腺癌细胞株中检测到有表达，135个蛋白质仅在PC-3M中检测到有表达。结论：人高、低转移前列腺癌细胞株的膜蛋白表达存在明显差异，为进一步发现前列腺癌转移相关分子和阐明前列腺癌侵袭转移的分子机制提供实验证据。     

人前列腺癌PC3细胞亚群的分离及其生物学行为分析

目的 研究人前列腺癌PC3肿瘤细胞系中是否存在具有干细胞特征的细胞亚群,并对其形态及克隆生长特征进行分析,同时探讨染料Rho123着色强度是否可用于区分不同的肿瘤细胞亚群.方法 采用Rho123染色后流式细胞仪分析;Rho123与DAPI复染后荧光显微镜下形态学观察及细胞克隆生长特征分析等方法.结果 PC3细胞中存在对Rho123着色显著差异的两类细胞亚群,其形态结构、增殖能力及克隆生长方式均有明显差别.结论 人前列腺癌PC3细胞系中存在具有干细胞特性的细胞亚群,对Rho123拒染的特性可用于区分肿瘤干细胞与其他肿瘤细胞.