嵌合抗原受体T细胞靶向PD-L1的初步研究

目的:采用嵌合抗原受体(CAR)T细胞技术将肿瘤免疫检查点抑制剂序列(MEDI4736)整合至CART细胞,构建一种新的抗PD-L1的CART(αPDL1-CART)细胞,并探索αPDL1-CART细胞的作用机制。方法:共培养结合实验检测αPDL1-CAR的结合性,流式细胞术分析αPDL1-CART细胞表达,细胞毒性实验检测αPDL1-CART细胞杀伤性。结果:αPDL1-K562细胞可特异性结合PDL1-K562细胞,阳性表达率为(48.9±13.9)%;与T vs K562组、T vs PDL1-K562组和αPDL1-CART vs K562组相比,αPDL1-CART vs PDL1-K562组αPDL1-CART细胞可显著减少PDL1-K562细胞数[(2 136.9±766.1)个,P<0.05]。结论:αPDL1-CART细胞可特异性结合和杀伤PDL1-K562细胞,将进一步促进CART细胞与免疫检测点结合研究。     

PI3K-AKT-mTOR信号通路在伯基特淋巴瘤中的活化

目的 探讨PI3K-AKT-mTOR信号通路在伯基特淋巴瘤中的活化情况.方法 收集13例伯基特淋巴瘤患者淋巴瘤组织及14例患者淋巴结反应性增生组织病理切片,采用免疫组织化学方法检测AKT、mTOR、RPS6磷酸化情况.结果 伯基特淋巴瘤组织中p-AKT、p-mTOR、p-RPS6表达率分别为84.6％(11/13)、100.0％(13/13)、100.0％(13/13),反应性淋巴结增生为64.2 ％(9/14)、71.4％(10/14)、78.6 ％(11/14),阳性表达率差异均具有统计学意义(均P＜0.05).结论 PI3K-AKT-mTOR信号通路在伯基特淋巴瘤中存在异常活化.     

继发性血栓性血小板减少性紫癜17例临床分析

目的 总结分析继发性血栓性血小板减少性紫癜（继发性TTP）患者的临床表现、实验室特点及治疗,以提高对继发性TTP的诊断和治疗水平.方法 对我院2003年1月至2013年12月期间诊断为继发性TTP的17例患者的临床特点和治疗转归进行分析.结果 17例患者中10例（58.82％）出现三联征（血小板减少、微血管病性溶血性贫血、神经系统症状）;6例（35.29％）于病程中出现典型TTP五联征（发热、血小板减少、微血管病性溶血性贫血、神经系统症状和肾脏损害）.本组患者外周血涂片均可见破碎红细胞,范围为1.5％ ～16.5％.本组患者的治疗以血浆置换和输注血浆为主,联用糖皮质激素等免疫抑制剂,治疗有效率64.71％.结论 继发性TTP的诊断主要依赖临床特点,破碎红细胞比例＞1％作为诊断指标有助于早期诊断、早期治疗;不同原因继发性TTP预后不同,应积极处理原发病或消除诱导TTP发作的诱因,尽早给予血浆治疗,并联用糖皮质激素等免疫抑制剂以提高疗效、降低死亡率.     

糖尿病酮症酸中毒合并血淀粉酶升高的相关因素分析

分析152例糖尿病酮症酸中毒（排除急性胰腺炎所致）患者血淀粉酶（AMY）升高的相关因素，以血AMY为因变量，以入院时14项生化指标为自变量进行多元线性回归分析。血葡萄糖、钠、渗透压、甘油三酯进入回归方程，偏回归系数分别为10．26，10．35，2．21和8．00，常数为-2162．06。与269例血AMY正常者血葡萄糖、甘油三酯、钠、渗透压水平比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。     

稳定沉默钙网蛋白表达通过下调VEGF、MMP2/9的表达抑制SNK6细胞侵袭能力

目的:探索稳定下调钙网蛋白(calreticulin,CALR)对NK/T细胞淋巴瘤细胞SNK6细胞侵袭性的影响及其可能机制。方法:设计靶向人钙网蛋白的特异性短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列,构建重组慢病毒载体;三质粒系统包装慢病毒颗粒,感染SNK6细胞,嘌呤霉素抗性筛选稳定下调钙网蛋白表白的SNK6细胞。应用CCK8法测定细胞增殖活力,Transwell小室测定细胞侵袭。Western blot检测SNK6细胞CALR表达水平,荧光定量PCR检测SNK6细胞CALR、MMP2、MMP9和VEGF的转录水平。结果:成功构建重组慢病毒载体pLKO.1-puro-shCALR,并包装慢病毒,筛选出稳定下调钙网蛋白的SNK6细胞株。稳定下调SNK6细胞钙网蛋白表达后,SNK6侵袭性减弱,MMP2、MMP9和VEGF的转录水平降低。结论:稳定下调SNK6细胞钙网蛋白的表达可使SNK6细胞侵袭性减弱,其机制可能与降低MMP2、MMP9和VEGF的转录水平有关。     

维生素K4对获得性维生素K依赖性凝血因子缺乏症的临床疗效

目的探讨在获得性维生素K依赖性凝血因子缺乏症的患者中运用维生素K4口服制剂进行维持治疗的临床可行性。方法回顾性分析了24例确诊获得性维生素K依赖性凝血因子缺乏症的患者,静脉运用或肌注维生素K1治疗至临床出血停止、PT恢复正常后,其中9例改成维生素K4口服治疗,另15例则继续维生素K1静脉或肌注治疗,观察其临床出血表现、疗效及不良反应。结果在维持治疗2周后PT差异无统计学意义(P0.05),且在维持治疗期间,维生素K4口服治疗组相对常规治疗组无明显肝毒性作用(P0.05)。结论维生素K4口服维持治疗本病安全、有效、方便,患者依从性好,无明显不良反应。     

survivin、环氧化酶-2及bcl-2在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其相关性

 目的　研究survivin、环氧化酶-2（COX-2）及bcl-2在非霍奇金淋巴瘤（NHL）中的表达及其临床意义并初步探讨三者的相关性。方法　用免疫组织化学MaxVision法检测44例NHL和同期20例反应性淋巴样增生（RH）组织中survivin、COX-2及bcl-2蛋白的表达。结果　survivin、COX-2、bcl-2在NHL中的阳性表达率分别为70.45 %（31／44）、68.18 %（30／44）、63.64 %（28／44）;RH中分别为40.00 %（8／20）、40.00 %（8／20）和20.00 %（4／20）,差异有统计学意义（均P＜0.05）。NHL组织中,COX-2与survivin（r＝0.306,P＝0.043）、survivin与bcl-2（r＝0.339,P＝0.040）的表达均呈正相关。结论　COX-2、survivin、bcl-2在NHL组织中呈高表达;survivin、bcl-2作为分子标志可能对淋巴瘤的诊断、分型具有一定的价值;COX-2和survivin、survivin和bcl-2在NHL的发生和发展中可能具有协同作用。     

糖尿病酮症酸中毒合并高淀粉酶血症的相关因素

目的:探讨无并发急性胰腺炎的糖尿痛酮症酸中毒患者血淀粉酶升高的相关因素。方法:421例糖尿病酮症酸中毒患者,根据诊断标准排除急性胰腺炎,检测血淀粉酶、钠、钾、氯、钙、磷、肌酐、二氧化碳结合力、葡萄糖,次晨空暖腹血脂、肝功能,淀粉酶升高者,每4～8小时复查血淀粉酶。以血淀粉酶为应变量,以血糖等14个自变量进行多元线性回归分析。结果:葡萄糖、血钠、血渗透压、血三酰甘油与血糖显著相关(P<0.05)。结论:糖尿病酮症酸中毒患者血淀粉酶升高的主要原因是脱水、高血糖、高三酰甘油、高血渗透压,高血钠是血淀粉酶升高的加重因素。     

存活蛋白重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达

本研究旨在构建含有人存活蛋白(survivin)基因的重组腺病毒载体,并探讨其在转染树突状细胞中的表达。以质粒pcDNA3.0-survivin为模板,通过PCR扩增获得survivin基因全长序列。PCR产物回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒,获得重组质粒pShuttle-CMV-survivin。通过双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pShuttle-CMV-survivin转化E.coliBJ5183菌(含腺病毒骨架质粒)并进行同源重组,然后筛选阳性克隆,提取质粒,将此重组腺病毒质粒分别进行酶切、线性化、纯化,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染293细胞。制备病毒上清并测定其滴度,将病毒上清转染树突状细胞,应用Westernblot方法分析survivin的表达。结果表明成功构建了含有人survivin基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.65×109pfu/ml。Westernblot鉴定显示,经重组腺病毒转染的DC可有效表达survivin。结论含survivin基因的重组腺病毒载体的构建成功,为下一步开展抗白血病免疫研究奠定实验基础。     

用携有存活蛋白基因的重组腺病毒载体转染树突状细胞诱导细胞毒T细胞抗淋巴瘤免疫效应

本研究探讨转染survivin（SVV）基因的树突状细胞（DC）体外诱导特异性抗淋巴瘤的免疫效应。对人外周血DC进行诱导培养,以Ad-SVV转染DC,用Westernblot鉴定Survivin的表达,用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应,用混合淋巴细胞反应（MLR）测定DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,以ELISA法检测上清中的细胞因子IL-12含量。结果表明：在MLR中,刺激应答比（S/R）为1∶5、1∶10、1∶50和1∶100时,转染Ad-SVV的DC有较强刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力;转染Ad-SVV的DC组所诱发的CTL活性明显高于对照DC组;转染病毒后第2天,转染Ad-SVV的DC组的IL-12分泌水平高于对照DC组。结论：含存活蛋白基因的DC能够在体外诱导特异性CTL效应,对CA46细胞有明显的杀伤作用。