MiR-340经组织型纤溶酶原激活剂调控施万细胞的纤溶能力

目的:探讨microRNA-340(miR-340)对施万细胞纤溶能力的调控作用及作用的靶基因。方法:采用溶圈实验来检测miR-340对施万细胞纤溶能力的影响,用荧光素酶双报告基因系统确定miR-340与组织型纤溶酶原激活剂的靶向关系,用实时定量聚合酶链反应检测坐骨神经夹伤后组织型纤溶酶原激活剂mRNA和miR-340的表达变化。结果:miR-340能够抑制施万细胞的纤溶能力,并直接靶向作用于组织型纤溶酶原激活剂的3’UTR,坐骨神经夹伤后组织型纤溶酶原激活剂mRNA与miR-340的表达呈负相关性。结论:miR-340通过直接靶向组织型纤溶酶原激活剂的3’UTR,从而下调靶基因组织型纤溶酶原激活剂的表达抑制施万细胞的纤溶能力。     

嗅觉受体在背根节神经元和坐骨神经中的表达与鉴定

目的:探讨背根节神经元和坐骨神经中存在嗅觉受体基因的表达。方法:采用表达谱芯片检测坐骨神经离断后嗅觉受体在背根节神经元和近端坐骨神经中的表达变化,并用RT-PCR验证芯片结果。结果:背根节神经元和坐骨神经中存在嗅觉受体的表达,而且在坐骨神经离断后它们的表达发生显著改变。结论:首次报道了嗅觉受体在背根节神经元和坐骨神经中的表达,推测嗅觉受体可能在坐骨神经离断后与检测各种刺激信号相关。     

坐骨神经损伤与再生过程中背根节神经元基因表达模式分析

目的：探讨坐骨神经损伤与再生过程中,背根节神经元轴突再生的分子调控模式和机理。方法：采用表达谱芯片分析坐骨神经离断后,14-6背根节神经元基因表达的变化,并分析差异基因所反映的核心生物学过程的变化。结果：（1）坐骨神经离断后,近端坐骨神经差异基因的数量表现为先上升再下降的趋势,但背根节神经元呈现为波浪形的增加。（2）核心生物学过程的差异基因数量变化：刺激检测、G-蛋白偶联受体信号通路、细胞表面受体连接信号转导均呈波浪形变化。防御反应、炎症反应、免疫反应、轴突生成表现为持续性增加。（3）与轴突生成相关的差异基因表达变化结果显示：Lhx4、Nkx2-9、Efnb3、Titfl、Apoa4表现为波浪形增加。Mapk8ip3、Zfp312、Gap43在长时间点表达增加。Tnn、Efnbl-开始降低,Notchl、Nefl、Bmprlb等基因表现为长时间点表达降低。结论：坐骨神经离断后,背根节神经元差异基因和核心生物学过程的变化趋势,反映了周围神经损伤与再生过程中轴突再生的分子调控模式。     

MicroRNA-1对施万细胞增殖的调节作用

目的:探讨microRNA-1(miR-1)对施万细胞增殖的影响及其作用的靶基因。方法:采用Edu染色法检测miR-1对原代培养的施万细胞增殖能力的影响,用双荧光素酶报告基因系统确定miR-1的靶基因。结果:miR-1能够抑制原代培养的施万细胞的增殖,并可直接作用于Edn1基因的3′UTR。结论:miR-1可以直接靶向Edn1的3′UTR,从而通过下调靶基因Edn1的表达抑制施万细胞的增殖。     

TDG蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备

目的:表达纯化胸腺嘧啶糖苷酶(TDG)蛋白并制备TDG多克隆抗体.方法:PCR扩增小鼠TDG(mTDG)的基因片段并插入pET28a(+)原核表达载体,表达并纯化His-mTDG融合蛋白.用纯化的His-mTDG蛋白免疫兔子产生抗血清,进一步亲和纯化抗血清制备抗TDG的多克隆抗体,并检测分析制备的抗体在Western blotting和免疫荧光分析中的应用.结果:在低温(20 ℃)和低IPTG浓度(0.2 mmol·L-1)时,His-mTDG融合蛋白大部分在可溶上清部分,用亲和层析法分离纯化了His-mTDG蛋白,并用纯化的蛋白制备了兔抗TDG抗体,结果显示制备的抗体能够特异性地在免疫分析中使用.结论:本研究纯化了条带单一的并且具有生物学活性的TDG融合蛋白,制备了具有良好特异性的兔抗TDG抗体,为进一步研究TDG的性质、结构和功能奠定了基础.     

MicroRNA-34a通过靶基因c-Met抑制施万细胞增殖

目的:探讨坐骨神经横断后,microRNA-34a(miR-34a)对c-Met(肝细胞生长因子受体)的调控作用及对施万细胞增殖的影响。方法:采用Real-time PCR检测miR-34a和c-Met在坐骨神经横断后近侧端的表达变化;Edu染色法检测miR-34a对原代培养的施万细胞增殖能力的影响;双荧光素酶报告基因系统检测miR-34a对c-Met 3’UTR的直接靶向作用。结果:miR-34a与c-Met在坐骨神经横断后近侧端的表达呈负相关,能够抑制原代培养的施万细胞的增殖,并可直接作用于c-Met基因的3’UTR。结论:miR-34a可以直接靶向c-Met的3’UTR,从而通过下调靶基因c-Met的表达抑制施万细胞的增殖。     

Let-7对施万细胞凋亡的调节作用

目的:探讨Let-7对施万细胞凋亡的调控作用及其发挥作用的靶基因。方法:采用Annexin V/PI双染色法检测Let-7对H2O2刺激的原代培养的施万细胞凋亡的调控作用,双荧光素酶报告基因系统检测Let-7对白介素10的3’UTR的直接靶向作用。结果:Let-7能够抑制H2O2刺激的原代培养的施万细胞的凋亡,并可直接作用于白介素10基因的3’UTR。结论:Let-7可以直接靶向IL10的3’UTR,从而通过下调靶基因IL10的表达调控施万细胞的凋亡。     

外源核苷酸对脂多糖刺激小鼠的保护作用及其机制研究

目的:研究外源核苷酸对脂多糖(LPS)刺激小鼠的保护作用,并探讨其可能机制。方法:采用刚断奶的昆明种仔鼠40只,按体重随机分成五组:对照组、核苷酸(NT)组(4h、18h)、无核苷酸(NF)组(4h、18h),对照组和NF组饲喂无核苷酸半纯合基础日粮;NT组饲喂含0.25%核苷酸混合物的日粮,在实验的D15,NT组和NF组灌胃LPS,对照组灌胃同等剂量的无菌生理盐水,在灌胃后的4h、18h,收集血清,无菌取肝、小肠、腹腔巨噬细胞待测。结果:日粮中添加核苷酸能显著升高LPS刺激小鼠肝Na+K+-ATP酶、小肠超氧化物歧化酶(SOD)活性、血清总抗氧化能力(T-AOC)和腹腔巨噬细胞分泌的抗炎性细胞因子白介素10(IL-10)的水平,降低小肠丙二醛(MDA)含量、血清谷丙转氨酶(AIL)、小肠髓过氧化物酶(MPO)活性和腹腔巨噬细胞分泌的炎性细胞因子白介素1(IL-1)的水平。结论:小鼠在受到LPS刺激时,在无核苷酸日粮中添加核苷酸有助于维持机体氧化/抗氧化、炎症/抗炎症平衡,保护机体免受损伤。