溶血对生化检验准确性的影响及纠正

目的探讨不同溶血标本对临床常规化学检验准确性的影响、干扰及纠正措施。方法用HITACHI 7600-020全自动生化分析仪测定不同溶血标本的溶血指数(H)、血红蛋白(HGB)、血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)、葡萄糖(GLU)、尿素(UREA)、肌酐(CREA)、尿酸(UA)、胆固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A(Apo-A1)、载脂蛋白B(Apo-B)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、钾(K )、钠(Na )、氯(Cl-)、钙(Ca2 )、无机磷(IP)、二氧化碳(CO2)、淀粉酶(AMY)32项生化指标,并以未溶血血清(H=0)为对照,进行多元回归分析,观察各项目的变化及纠正值的预期可接受性。结果溶血对常规生化指标ALT,AST,TP,ALB,GLU,LDH,CK,CK-MB,K ,Na ,Cl-、Ca2 、IP、CO2产生正干扰,对TBIL,DBIL,GGT,ALP,TBA,AFU,UA产生负干扰,与H=0组相比有统计学意义,P<0.01或P<0.05。且溶血指数(H)越大,干扰越明显。根据美国CL1A'88能力比对检验的分析质量要求,经二元回归纠正后,TBIL,DBIL,GGT,ALP,LDH,CK,Ca2 纠正值100%达到预期可接受范;ALT,TP,ALB,UA,GLU,K ,Na ,Cl-,CO2,IP纠正值90%以上达到预期可接受范围;AST纠正值87.5%达到预期可接受范围;AFU,CK-MB,TBA分别有77.5%,72.5%和47.5%的纠正值达到预期可接受范围。结论不同溶血标本对常规化学检验的不同检测项目产生不同的影响及干扰,经二元回归纠正后,90%(28/31)的检测项目获得较为满意的预期可接受性(预期可接受值≥90%),AFU,CK-MB,TBA纠正不理想(预期可接受值<77.5%),溶血标本不适宜进行AFU,CK-MB,TBA测定。     

采用CRISPR/Cas9技术构建新品系HBeAg转基因小鼠

目的培育一种HBeAg转基因小鼠新品系。方法克隆乙型肝炎病毒HBeAg基因;采用CRISPR/Cas9技术,通过同源重 组的方式分别在Rosa26基因位点定点插入pliver-HBeAg表达框,获得含有HBeAg基因的表达载体pliver-HBeAg,经酶切得到 含有HBeAg基因的线性DNA 片段,将Cas9 mRNA、gRNA和donor vector显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,再将其移植 入C57BL/6J雌性代孕小鼠子宫,获得F0代建系小鼠;采用长片段PCR对出生小鼠进行鉴定,共获得HBeAg基因正确同源重组 的F0代建系小鼠;F0代阳性小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配,繁育获得F1代小鼠,经PCR鉴定及测序确认阳性F1代小鼠;将 携带HBeAg基因的F1代转基因小鼠再次回交,对子代小鼠进行PCR基因型鉴定,直至获得纯合子子代转基因小鼠;采用全自 动化学发光免疫分析仪、胶体金法和免疫组织化学方法分别检测HBeAg转基因鼠血浆和肝组织中HBeAg和HBeAb的表达。 结果采用CRISPR/Cas9技术共获得56只F0代小鼠,其中2只为正确同源重组的F0代小鼠;F1代小鼠中6只阳性F1代小鼠。 截至目前,共获得22只F2代纯合子和29只杂合子HBeAg转基因小鼠。所有HBeAg转基因小鼠外周血中均可检出高浓度的 HBeAg蛋白,但未检出HBeAb的表达。而且免疫组化结果显示HBeAg转基因小鼠肝脏肝细胞中可特异性表达HBeAg蛋白。 结论采用CRISPR/Cas9技术成功构建了能在肝脏肝细胞中稳定表达HBeAg蛋白且对HBeAg免疫耐受的新品系HBeAg转基 因小鼠,为HBV的研究提供了新的实验动物模型。     

肺癌的血清学诊断

目的:评价血清癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白片段(CYFRA 21-1)在肺癌诊断中的价值。方法:肺癌患者120例、50例肺部非癌性良性疾病患者以及50例健康人群作为对照组,全部清晨空腹采集血清样本,冷冻保存。用电化学发光免疫测定法检测血清CEA、NSE和CYFRA 21-1的含量水平。结果:在肺癌患者血清中,CEA、NSE和CYFRA 21-1水平明显高于肺部非癌症患者组及正常对照组(P<0.01)。肿瘤标志物在肺部良性疾病组和正常对照组无显著性差异(P>0.05)。CEA在肺腺癌患者含量最高、NSE在肺小细胞癌中的含量最高、CYFRA 21-1在肺鳞癌中的水平最高。CEA、NSE和CYFRA 21-1三项联合检测比单项检测诊断肺癌的阳性率明显增高,总阳性率为90.0%。结论:血清学检测对肺癌的诊断有一定的临床意义;肺癌患者血清CEA、NSE和CYFRA 21-1水平和肺癌的病理分型有一定的相关性;CEA、NSE和CYFRA 21-1三项联合检测可提高肺癌诊断的阳性率。     

2型糖尿病及胰岛素抵抗与细胞因子的相关性研究

目的:研究2型糖尿病(T2DM)及胰岛素抵抗(IR)与细胞因子的相关性. 方法:采用酶联免疫吸附法测定T2DM伴有IR患者30例(A组)和不伴有IR患者30例(B组)及正常对照26例(C组)的空腹血清白细胞介素6(IL-6),白细胞介素8(IL-8)及肿瘤坏死因子(TNF-α)的浓度,并同时测定空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(GHbA1c)及空腹胰岛素(FINS)水平,分析其与IL-6,IL-8,TNF-α的相关性. 结果:与C组比较A组和B组血清IL-6,IL-8,TNF-α的含量均明显增高(P＜0.05);A组与B组比较,A组的IL-6,TNF-α升高较B组明显,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论:T2DM患者存在着细胞因子的过度激活,并与IR密切相关,细胞因子在T2DM及IR的发生发展中起着重要的作用.     

西安地区部分体检人群血清蛋白质参考值调查

目的探讨西安地区健康体检人群血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)的含量及球蛋白/白蛋白(A/G)比值的参考值水平。方法采用回顾分析的方法,随机抽取1000例在我院例行健康查体人群,用日立7600-020全自动生化分析仪进行血清TP、ALB的测定,并计算A/G比值,按不同年龄、不同性别进行分组统计分析,并与温州、贵阳、沈阳、河南焦作、杭州地区人群进行比较,观察血清蛋白质参考值的变化。结果西安地区健康体检人群血清TP67.7-84.1g/L,ALB38.8-56.4g/L,A/G1.00-2.36,且随年龄、性别及居住地区不同存在着差异,健康体检人群血清TP、ALB水平比原参考值明显偏高,A/G比值比原参考值明显偏低(P<0.01)。成年男性血清TP65.4-85.0g/L,ALB35.7-56.5g/L,A/G1.16-2.0,成年女性血清TP62.5-84.9g/L,ALB34.4-55.6g/L,A/G1.07-2.03,男性明显高于女性,男女之间TP、ALB有极显著性差异(Ρ<0.01)。TP现调查值超限检出率(3.3%)明显低于原参考值(10.3%),ALB现调查值(2.1%)低于原参考值(12.7%),A/G现调查值(1.6%)低于原参考值(8.1%),超限检出率降低67%以上。西安地区健康体检人群TP与温州、贵阳、沈阳、杭州相比有极显著差异,ALB与贵阳、沈阳、河南焦作、杭州相比有极显著差异,A/G与温州、贵阳、沈阳、河南焦作相比有极显著差异(P<0.01)。结论西安地区健康体检人群血清蛋白质水平与原参考值发生了改变,原参考值已不能很好的适用临床和健康体检的需要,应科学、合理的建立地区性的蛋白质参考值范围。     

TB-DNA、T-SPOT.TB和TB-Ab平行检测在肺结核诊断中的应用价值

目的评价结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(TB-DNA)检测、结核感染T细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)和结核抗体(TB-Ab)检测3种方法在肺结核诊断中的应用价值。方法收集2019年1-12月商洛某三甲医院收治的245例疑似肺结核患者的一般资料,根据最终诊断结果分为肺结核患者组(试验组)和非结核病患者组(对照组)。比较TB-DNA、TB-Ab和T-SPOT.TB 3种方法平行检测结果在两组中的差异,并分析TB-DNA、TB-Ab和T-SPOT.TB在肺结核诊断中的应用价值。结果试验组的TB-DNA、T-SPOT.TB和TB-Ab的阳性率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。运用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析,T-SPOT.TB抗原A、T-SPOT.TB抗原B、TB-DNA、TB-Ab的ROC曲线下面积分别是0.908、0.881、0.677、0.649。这3种方法在肺结核诊断中以TB-DNA的特异度(97.14%)最高,T-SPOT.TB的灵敏度(89.14%)最高。T-SPOT.TB的诊断符合率高于TB-DNA和TB-Ab,差异均有统计学意义(P<0.05),TB-DNA和TB-Ab的诊断符合率差异无统计学意义(P>0.05)。联合检测可以提高灵敏度,T-SPOT.TB联合TB-DNA具有最高的诊断符合率。结论T-SPOT.TB具有较高的灵敏度、特异度和诊断符合率,在肺结核诊断中具有较高价值,科学地选择组合项目检测可以提高诊断符合率。     

乙肝病毒PreS1抗原的临床应用

目的:评价检测乙肝病毒PreS1抗原的临床应用价值. 方法:将临床送检的1000份乙肝病毒表面抗原(HBsAg)阳性的血清标本进行PreS1抗原检测,同时用FQ-PCR进行HBV-DNA测定. 结果:PreS1总阳性率为52.0%,HBV-DNA阳性率为50.8%,HBeAg阳性率为21.0%. PreS1总阳性率明显高于HBeAg阳性率. PreS1与HBV-DNA的总符合率为94.4%. 结论:PreS1抗原作为乙肝感染和复制的血清学指标敏感性高于HBeAg,对提示乙肝患者的病情发展和转归有重要临床意义. PreS1可以作为一项新的乙肝病毒复制的传染性指标.     

梅毒螺旋体IgM抗体检测的临床意义

目的:评价检测梅毒螺旋体IgM型抗体的临床意义. 方法:收集经临床确诊为梅毒患者的血清标本90例,用RT-PCR方法进行TP-DNA检测,用IgG/RF吸收剂处理血清,然后应用梅毒螺旋体明胶凝集试验进行TP-IgM的检测. 结果:一期梅毒的 TP-IgM抗体阳性率75.9%,二期梅毒的阳性率100%,隐性梅毒的阳性率 77.8%. 总阳性率为81.1%(73/90). TP-IgM在不同时期梅毒组中检测阳性率差异有统计学意义(χ2=90.20, υ=2, P＜0.05). TP-DNA的检测阳性率为78.9%(71/90). TP-DNA和TP-IgM的阳性检出率统计学上无统计学差异(χ2=0.5, υ=1, P＞0.05). 结论:检测血清中梅毒螺旋体IgM型抗体对于梅毒的鉴别诊断具有重要的临床意义.     

TP-ELISA法在梅毒临床诊断中的应用

目的:评价梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,TP-ELISA)检测梅毒螺旋体抗体IgG/IgM的临床意义。方法:收集经临床确诊的各期梅毒血清80份,自身免疫性疾病并排除梅毒的患者血清样本40份,以及100份献血员血清样本。全部血清标本分别进行RPR、TPPA和TP-ELISA试验,检测梅毒螺旋体抗体。结果:TP-ELSIA在梅毒患者组中的阳性率为100%(80//80),确证试验TPPA的阳性率为98.8%(79/80),两种方法的检测阳性率无统计学差异(P>0.05)。TP-ELSIA检测阳性率明显高于初筛试验RPR的检测阳性率87.5%(70/80)。在自身免疫性疾病组RPR试验出现假阳性,其他两种方法无假阳性出现。结论:TP-ELISA检测梅毒螺旋体特异性IgG/IgM抗体具有较高的敏感性和特异性,适用于临床大批量样本初筛和确诊,TP-ELISA试验阳性标本建议进一步作RPR试验。     

血流感染病原学分析及与相关炎性因子的应用价值研究

目的 分析血流感染（bloodstream infection, BSI）的病原学特点,并研究与其相关炎性因子的应用价值,为血流感染的诊断与治疗提供依据。方法 收集商洛市中心医院2018 年1 月~ 2019 年11 月住院成人患者血培养的结果,回顾性分析阳性血培养的细菌分布特点、科室分布特点及病原菌的耐药情况,然后选取130 例血培养阳性病例作为实验组,185 例血培养阴性病例作为对照组,比较两组间白细胞数（WBC）、中性粒细胞数（NEU#）、中性粒细胞/ 淋巴细胞比值（NLR）、超敏C 反应蛋白（hsCRP）和降钙素原（PCT）的水平差异。并运用受试者工作特征曲线（ROC 曲线）评价WBC,NUE#,NLR,hsCRP 和PCT 在血流感染中的诊断效能。结果 血培养共检出病原菌340 株,其中革兰阴性杆菌171 株,占50.29%;革兰阳性球菌146 株,占42.94%;真菌13 株,占3.82%;其他细菌10 株,占2.94%。检出的病原菌居前列的依次是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和屎肠球菌。血培养阳性患者主要来源于重症医学科、神经外科、急诊医学科、神经内科及泌尿外科。产超广谱?- 内酰胺酶(ESBLs) 的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率分别是67.89% 和27.27%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 和耐碳青霉烯类肠杆菌检出率分别为64.5% 和0.68%。两组间WBC,NEU#,NLR,hsCRP 和PCT 水平比较差异均具有统计学意义（Z=-10.538~ -7.163, 均P<0.05）。PCT,NEU#,NLR,hsCRP 和WBC 的ROC 曲线下面积（AUC）分别是0.849,0.752,0.752,0.751 和0.737。结论 商洛某三甲医院血流感染病原菌以革兰阴性菌为主,病原菌耐药率较高。PCT,NEU#,WBC,NLR 和hsCRP 均可用于血流感染的辅助诊断,但PCT 优于其他检验项目。