P16真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用

目的构建pcDNA3/p16真核表达质粒并了解其对肝癌细胞BEL-7404生长的抑制作用.方法将p16 cDNA亚克隆至pcDNA3真核表达载体上,并经脂质体介导转染至BEL-7404细胞中.应用MTT法和流式细胞仪分析转染细胞生长情况和细胞周期.结果重组pcDNA3/p16表达质粒构建成功.经pcDNA3/p16转染的BEL-7404细胞生长速度受到明显抑制,且细胞多停滞于G0/G1期.结论重组pcDNA3/p16质粒能在BEL-7404细胞内表达,且能抑制BEL-7404细胞的生长.     

慢性心功能不全患者血浆内源性洋地黄样因子浓度的临床观察

本文采用地高辛放射免疫测定法检测42例慢性心功能不全患者和31例正常人血浆EDLF浓度,结果显示:慢性心功能不全组血浆EDLF浓度明显高于正常组,而各级心功能不全组之间血浆EDLF浓度无明显差别;右心功能不全组血浆EDLF高于左心功能不全;心功能不全患者血浆EDLF浓度与血清K~+呈明显负相关(r=-0.37,n=35,P<0.025),而与血清Na~+无明显相关。内源性洋地黄样因子Endogenous digitalis-like factor,EDLF)是体内具有洋地黄样作用的生物活性.物质,能抑制钠-钾ATP酶活性,竞争性抑制~3H哇巴因与受体结合,可与地高辛抗体发生交叉免疫反应,有强心、缩血管和利尿作用。为探讨EDLF与心功能不全的关系,我们对42例慢性心功能不全患者和31例正常人采用地高辛放射免疫测定法进行血浆EDLF浓度检测,以分析其意义。     

大鼠GDNF真核表达载体的构建及其真在核细胞中的表达

目的：构建ｐｃＤＮＡ３／ＧＤＮＦ真核表达质粒并了解其在真核细胞内的表达．方法：将ＧＤＮＦ逆转录聚合酶链式反应产物克隆至ｐｃＤＮＡ３真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析并以脂质体介导法转染真核细胞,了解其在细胞内的表达及其表达蛋白的生物学活性．结果：酶切鉴定及测序分析表明重组ｐｃＤＮＡ３／ＧＤＮＦ表达质粒克隆成功,转染实验表明重组质粒能在真核动物细胞中表达出具有活性的ＧＤＮＦ蛋白．结论：以脂质体介导     

原发性高血压患者甲状旁腺激素检测及意义

采用放射免疫法测定了21例肝肾功能正常的EH患者和19例正常人血浆PTH-M浓度。结果显示,FH患者血浆PTA-M浓度明显高于正常人(192.27±71.44比136.44±85.14pg/ml,P<0.05),两组受检者血浆PTH-M浓度均与MAP呈正相关,EH患者血浆PTH-M浓度与PRA呈负相关。提示甲状旁腺素或与其分泌有关的物质可能参与血压调节,甲状分腺机能亢进在EH特别是低肾素型EH发病机理中可能具有一定病理意义。     

人肝细胞生长因子cDNA的克隆及其在Pichia系统中的表达

采用ＲＴ－ＰＣＲ方法以胎肝ｍＲＮＡ为模拟克隆人肝细胞生长因子全长ｃＤＮＡ，核苷酸序列分析证实比文献报道多２个氨基酸编码序列。经与Ｐｉｃｈｉａ分泌型表达载体ｐＰＩＣ９重组，表达质粒转化ＧＳ１１５细胞，ｍｕｔ＾＋表型筛选，经甲醇诱导实现了ｈＨＧＦ在Ｐｉｃｈｉａ Ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母系统中分泌型表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，银染法分析证实表达产物分子量为８０￣８５ｋＤ左右，具有刺激肝细胞增殖活性。