间接竞争ELISA法测定不同厂家葛根芩连片中黄芩苷的含量?

目的用所建立的黄芩苷间接竞争酶联免疫分析(ELISA)法检测不同厂家葛根芩连片中黄芩苷的含量差异。方法利用黄芩苷单克隆抗体,通过考察线性关系、精密度、加样回收率等方法学指标,建立黄芩苷的间接竞争ELISA法,并用所建立的方法测定7个不同厂家葛根芩连片中黄芩苷的含量。结果建立的黄芩苷间接竞争ELISA法的线性范围为16.157~1 280 mg/L,板间精密度RSD≤9.0%,板内精密度RSD≤5.1%,平均回收率为107.1%(RSD=4.9%)。7个厂家生产的葛根芩连片中黄芩苷含量从4.45 mg/片到13.41 mg/片不等。结论间接竞争ELISA法便捷、灵敏、精确、重现性好,可用于测定含黄芩的中药复方中黄芩苷的含量,该方法测得不同厂家的葛根芩连片中黄芩苷的含量差距较大。     

绵马贯众炭中新型碳点的发现及其止血作用研究

目的在绵马贯众炭中发现新型的纳米类成分——碳点,并研究其止血作用。方法通过对绵马贯众炭水煎液提取、分离和透析得到一种新型水溶性的纳米类成分碳点,命名为绵马贯众炭碳点(DCC-CDs)。利用透射电子显微镜(TEM)、高分辨透射电子显微镜(HR-TEM)、紫外-可见分光光度法(UV-vis)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、X-射线光电子能谱分析(XPS)、高效液相色谱(HPLC)等多种仪器和方法,对DCC-CDs进行了表征。通过小鼠断尾和肝脏出血实验评价DCC-CDs的止血作用,通过测定凝血四项及血小板(PLT)数量探讨其止血机制。结果从绵马贯众炭中分离出来的DCC-CDs外形近似球形,分散度良好,粒径分布在1～7 nm。动物实验结果显示DCC-CDs具有良好的止血效果,能显著减少小鼠断尾和肝脏出血时间(P0.01)。此外,DDC-CDs也能使大鼠血液中纤维蛋白原(FIB)浓度和PLT的数量显著升高(P0.05)。结论 DCC-CDs具有止血效果,本研究为应用DCC-CDs治疗出血性疾病的研究提供新思路,也为中药有效成分的探索提供全新的思维模式。     

气郁体质中lncRNA和mRNA表达谱分析及调控网络研究

目的:首次初步揭示气郁体质外周血中lncRNA和mRNA的表达谱及其相关作用网络。方法:运用lncRNA+mRNA人基因表达芯片V4.0(4×180K),从气郁体质(7例)和平和体质(9例)者的外周血中分离单个核细胞,使用R语言limma包筛选出两组显著差异表达的lncRNAs和mRNAs进行Gene Ontology功能和Ingenuity Pathway Analysis(IPA)通路的显著性富集分析,并寻找lncRNA近距离调控的靶基因。结果:气郁体质中有268个lncRNAs(156个上调和112个下调)和251个mRNAs(154个上调和97个下调)。GO功能和IPA通路富集结果表明,这些差异基因主要富集到免疫和激素调节失常相关通路。确定了9个lncRNA-mRNA相互作用对,如,LY86-AS1-F13A1、SBF2-AS1-ADAM2和FANK1-AS1-ADAM12等。结论:本研究首次揭示气郁体质易感抑郁、焦虑等精神障碍疾病的物质基础可能与lncRNAs/mRNAs的免疫和激素调节失常相关。     

连翘苷人工抗原的合成及免疫原性鉴定

基于高特异性,高灵敏度的小分子单克隆抗体的免疫分析方法的建立,对中药小分子化合物的的研究具有重要的意义,其中,小分子人工抗原的合成是中药小分子抗体制备的关键步骤。采用高碘酸钠氧化法分别合成连翘苷免疫抗原（FRn-BSA）和包被抗原（FRn-OVA）,通过紫外光谱和薄层色谱法检测到连翘苷成功与BSA/OVA偶联,小鼠经FRn-BSA免疫后,体内可产生抗连翘苷抗体,效价在1：8 000左右,线性范围为1~100 mg·L^-1。成功合成的连翘苷人工抗原,可为下一步的单克隆抗体制备以及相应免疫方法的建立奠定基础。     

大黄酸兔源多克隆抗血清的制备与鉴定

目的合成大黄酸人工抗原,制备敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗血清。方法采用碳二亚胺法制备大黄酸人工抗原,将大黄酸分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白相偶联。用紫外扫描法鉴定大黄酸人工抗原是否偶联成功,免疫新西兰兔,制备多抗血清,通过间接竞争ELISA测定抗血清效价,通过间接竞争ELISA鉴定抗血清的敏感性和特异性,并分别用间接竞争ELISA和HPLC检测大黄中大黄酸的含量。结果 2只新西兰兔产生的多抗血清效价在1∶64 000以上,其中,2号兔多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度为0.09 ng/mL,且具有良好的特异性。兔抗血清测得大黄中大黄酸含量为(0.026±0.001)%,HPLC测得大黄中大黄酸含量为(0.027±0.000)%。结论本研究制备了敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗体血清,为建立大黄酸免疫亲和色谱分析技术和快速检测方法奠定了基础。     

牡荆素人工抗原的合成与免疫原性的鉴定

目的合成牡荆素的人工抗原,并对其免疫原性进行了鉴定。方法利用高碘酸钠氧化法偶联牡荆素制备牡荆素-牛血清白蛋白的免疫抗原和牡荆素-卵清蛋白的包被原;用紫外分光光度法和薄层色谱法鉴定小分子与载体蛋白偶联反应,并用间接ELISA测定免疫抗原免疫小鼠抗体效价,间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测抗体特异性。结果紫外扫描和薄层色谱结果表明牡荆素与牛血清白蛋白/卵清蛋白偶联成功,小鼠经牡荆素-牛血清白蛋白免疫后,体内产生了抗牡荆素抗体,效价在1∶16 000以上,线性检测范围为0.028 8~18μg/m L。结论合成的牡荆素人工抗原和专属酶联免疫分析法可用于后续的单克隆抗体的制备。     

血瘀体质中lncRNA和mRNA表达谱分析及调控网络研究

目的:为了更客观地探索血瘀体质的微观特征,本研究从转录组学水平首次初步揭示血瘀体质外周血中lncRNA和mRNA的表达谱特征及其相关作用网络。方法:运用Agilent Human lncRNA+mRNA 4×180 k表达谱芯片,从血瘀体质(BSC,n=11)和平和体质(BC,n=9)者的外周血中分离单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs),采用"limma"方法筛选出2组差异有统计学意义的lncRNAs和mRNAs,对差异基因进行GO功能和KEGG信号通路的显著性富集分析,通过构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图并寻找其作用通路中关键的hub基因。结果:差异表达的lncRNAs和mRNAs均能够将血瘀体质和平和体质进行区分。血瘀体质中差异有统计学意义的lncRNAs 394个(139个上调,255个下调)和mRNAs 410个(159个上调,251个下调)。结果显示,血瘀体质差异基因显著聚集在生长发育调节和细胞信号传导相关作用通路,例如,MAP激酶活性的正向调控、血管生成的正向调控、腺苷酸环化酶活性的激活、卵巢卵泡发育、γ-氨基丁酸能突触以及PI3K-AKT信号通路等。通过构建PPI并筛选了一些核心基因,如,FGF2、VEGFA、HIST1H2BK和PHF5A等。结论:血瘀体质易感冠心病,脑卒中等循环系统疾病和疼痛性疾病等物质基础可能与lncRNAs/mRNAs的生长发育调节和细胞信号传导失调相关。