脂质体VEGFR2胞外区基因肿瘤疫苗的制备及其免疫激活体外抗肿瘤活性研究

目的:制备脂质体(LP)携带VEGFR2胞外区(exVEGFR2)肿瘤抗原pCMV质粒复合物基因疫苗,为肿瘤免疫治疗提供新的主动免疫疗法。方法:RT-PCR扩增含2个KpnⅠ和XbaⅠ限制性酶切位点的exVEGFR2序列,将其与pCMV质粒连接,构建pCMV/exVEGFR2质粒。Western blot检测exVEGFR2体外表达水平。用制备好的脂质体pCMV/exVEGFR2复合物(LP-pCMV/exVEGFR2)免疫C57BL/6小鼠,ELISA法检测其免疫激活活性。利用51 Cr释放实验分析CTLs介导的细胞毒活性。结果:成功扩增到exVEGFR2序列,并构建pCMV/exVEGFR2质粒;只有在pCMV/exVEGFR2转染COS-7细胞中,检测到与目的蛋白序列大小一致的相对分子质量为90000的VEGFR2特异性条带。LP-pCMV/exVEGFR2免疫小鼠6周后,ELISA法检测到强烈的特异性抗VEGFR2免疫激活效应;其免疫T细胞能够有效地介导体外VEGFR2阳性的CT-26结肠癌细胞毒性。结论:LP-pCMV/exVEGFR2能够有效地激活小鼠产生特异性抗VEGFR2免疫应答效应,并产生体外抗肿瘤细胞免疫毒性,为后期研究主动免疫治疗VEGFR2阳性肿瘤奠定实验基础。     

声触诊组织成像量化技术在乳腺实性病灶中的临床应用研究

目的 探讨声触诊组织成像量化技术（VTIQ）在乳腺实性病灶中的临床应用价值。方法 对238例患有乳腺肿块的患者（乳腺实性病灶254个）进行常规二维超声检查及声触诊组织量化技术（VTIQ）检查,所有病灶都通过穿刺活检或手术得到病理结果。分析乳腺良性病灶组、恶性病灶组各弹性指标的差异,包括VTIQ成像速度模式图及乳腺病灶的剪切波速度值Vmax、Vmin、Vmean,并绘制三者受试者工作特征（ROC）曲线,确定诊断界点值,评估VTIQ技术诊断乳腺良恶性病灶的诊断效能。结果 VTIQ成像中,乳腺实性病灶所显示的速度模式彩色编码图可分为五种类型：均匀型、欠均匀型、杂乱型、扩散型、硬环型。均匀型、欠均匀型多见于乳腺良性病灶,杂乱型、扩散型、硬环型多见于乳腺恶性病灶。VTIQ成像剪切波速度指标Vmax、Vmin、Vmean在诊断乳腺良恶性病灶中均具有较高的诊断效能,经综合判断,Vmean可作为诊断乳腺良恶性病灶的最佳指标,诊断界点值为4.84m/s。结论 VTIQ技术应用于乳腺实性病灶良恶性诊断时具有较高的诊断效能,Vmean可作为乳腺良恶性病灶诊断的可靠评价指标,Vmax、Vmin可作为特殊乳腺病灶的辅助评价指标。     

向成骨细胞和成脂肪细胞分化的小鼠骨间充质干细胞调节单核细胞来源的破骨细胞发育

为探究分化阶段的骨间充质干细胞对于破骨细胞的影响,将小鼠密质骨来源的间充质干细胞体外诱导分化,研究其对于破骨细胞发育的调控作用。从小鼠密质骨中分离培养得到间充质干细胞,将其进行成骨和成脂肪诱导1周,分别将成骨分化和成脂肪分化的间充质干细胞与CD11b+的单核细胞共同培养,并以抗酒石酸的酸性磷酸酶染色鉴定破骨细胞。结果表明:向成骨分化和成脂肪分化的间充质干细胞均可以调节单核细胞向破骨细胞分化。与未分化的间充质干细胞相比,成骨分化的间充质干细胞促进破骨细胞发育的作用减弱,而成脂肪分化的间充质干细胞促进破骨细胞发育的作用增强。结论:间充质干细胞调节破骨细胞发育的能力在其分化为不同种类细胞后发生相应变化,提示间充质干细胞通过分化为子代细胞而对破骨细胞发育发挥选择性的调节。     

大鼠小脑间位核注射氨己烯酸对淋巴细胞功能的影响

目的探讨小脑间位核GABA能系统对免疫功能的调节。方法大鼠小脑间位核内微量注射GABA转氨酶抑制剂氨己烯酸（VGB）,瑞氏染色法检测外周血白细胞中淋巴细胞百分比的变化;四甲基偶氮唑（MTT）比色法测定淋巴细胞的增殖功能;绵羊红细胞腹腔免疫大鼠,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中抗绵羊红细胞IgM、IgG抗体的水平。结果大鼠双侧小脑间位核微量注射VGB后,与对照组相比,外周血白细胞中淋巴细胞百分比、T淋巴细胞对刀豆蛋白A诱导的增殖能力和血清中抗绵羊红细胞IgM、IgG抗体的水平均明显降低,而两对照组间（未处理对照组和生理盐水对照组）各项指标的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论大鼠小脑间位核GABA能系统参与对免疫功能的调节。     

整合时空生物学和医学

时空和整合是客观存在的,是万物的自我和他我。这"印记"清晰深刻,像影子一样伴随万物一生。自然节律和生物节律可说是"印记"的证例。生物体是一个不完全的开放巨系统,是一个化学大反应罐。开放性让"反应"变得模糊复杂,时空整合机制帮了这个忙。整合的动力是竞争、和适应。生命需要整合时空。     

长春瑞宾渗漏后皮下注射解毒剂的实验研究

目的对长春瑞宾渗漏后常用的数种局部解毒药物进行药效优选。方法建立长春瑞宾外渗损伤的SD大鼠实验模型,分别皮下注射盐酸山莨菪碱等临床常用的数种治疗长春瑞宾外渗损伤的药物,对渗漏部位的皮下硬结、红斑、溃疡和大鼠的功能形态变化以及损伤修复时程进行对比观察,并设立生理盐水皮下注射实验对照。结果采用盐酸山莨菪碱等药物治疗的解毒效果显著。结论治疗长春瑞宾血管外渗损伤可首选盐酸山莨菪碱作为解毒剂。     

细胞间黏附分子 1 通过活化 MAPK 通路调节小鼠间充质干细胞向脂肪细胞分化简

本研究旨在探讨细胞间黏附分子-1（intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1）调节小鼠间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）向脂肪细胞分化的分子机制.分别将小鼠ICAM-1重组逆转录病毒MIGR1-ICAM-1和空载体逆转录病毒MIGR1感染小鼠间充质干细胞系C3H10T 1/2细胞,获得稳定高表达ICAM-1的C3H10T 1/2细胞（MIGR1-ICAM-1/MSC）和对照组细胞（MIGR1/MSC）.通过Western blot检测P38,ERK和JNK通路的活化情况,观察MIGR1-ICAM-1/MSC和MIGR1/MSC向脂肪细胞的诱导分化.实验组加入P38、ERK及JNK 3种信号通路抑制剂后进行培养并观察其成脂肪分化情况.以原位油红染色观察脂滴,应用real-time PCR检测成脂分化关键转录因子C/EBPα和PPARγmRNA的表达水平.结果显示,ICAM-1过表达可活化MSC的P38、ERK及JNK通路;原位油红染色及real-time PCR检测结果显示对ERK通路活化抑制可导致MIGR1-ICAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ的mRNA表达水平上调,脂滴变大,脂肪数量增加（P＜0.01）;阻断P38通路后MIGR1-ICAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ mRNA表达水平下调,脂滴及脂肪细胞数量更小、更少（P＜0.01）.结论：ICAM-1可能通过活化ERK信号通路抑制MSC的成脂分化,通过活化P38通路维持小鼠MSC成脂分化能力.     

超声内镜引导下细针穿刺活检对纵隔和腹膜后淋巴结转移癌的诊断价值

目的:探讨超声内镜引导下细针穿刺活检(EUS-FNA)对纵隔和腹膜后淋巴结转移癌的诊断价值,并评价EUS-FNA的安全性.方法:回顾性分析119例纵隔和/或腹膜后淋巴结肿大怀疑恶性肿瘤转移,并伴或不伴实质或空腔脏器管壁占位病人的临床资料,共187处病灶行EUS-FNA,其中穿刺肿大淋巴结140个,穿刺实质或空腔脏器管壁占位47处.术后注意观察病人有无并发症,并随访细胞学、组织学检查结果.结果:119例病人中,EUS-FNA诊断淋巴结转移癌的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确率分别为92.5%、100.0%、100.0%、86.7%、95.0%.47处实质或空腔脏器管壁占位,EUS-FNA诊断恶性肿瘤41例(包括原发肿瘤35例,转移性肿瘤6例),良性占位4例,2例诊断不明确.术后观察,1例病人出现胸痛不适,2例出现轻微腹痛不适,其中1例合并一过性发热,均给予对症处理后好转,余未出现出血、穿孔等并发症.结论:超声内镜可在一次操作中对多部位病灶进行EUS-FNA,获得病理学诊断;EUS-FNA对纵隔和腹膜后淋巴结转移癌的确诊具有肯定的价值;EUS-FNA可在实时超声监控下进行,安全性高,值得临床重视.