人类神经胶质细胞源神经营养因子的基因克隆与表达

目的获得能表达有生物学活性的成熟蛋白的人类神经胶质细胞源神经营养因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌｉｎｅｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＧＤＮＦ）基因片段。方法分离神经胶质细胞瘤的ｍＲＮＡ，逆转录，采用ＰＣＲ技术，获得ＧＤＮＦ基因片段，将其组装入高效表达载体ｐＢＶ２２０中，表达、分离表达产物。测定其对鸡胚背根神经节的神经营养作用。结果ＰＣＲ后获得４０２ｂｐ的ＧＤＮＦ编码成熟蛋白基因片段，测序结果表明：第４２４碱基由Ａ变为Ｇ。将此片段组装入原核表达载体后，在菌体可溶性蛋白中获得有生物学活性的ＧＤＮＦ。１０００ｍｌ培养液可获４ｍｇＧＤＮＦ粗制品，５０ｎｇ粗制品可促进鸡胚背根神经节生长。结论获得了ＧＤＮＦ基因片段，并使其在原核表达系统中表达。在菌体可溶性蛋白组分中获得了具有促进鸡胚背根神经节生长的ＧＤＮＦ成熟蛋白。     

壳多糖作为固相酶载体的研究

<正> 酶的固相化是生化制备和研究的重要手段。固相化的方法及所使用的载体种类很多。利用蟹壳、虾壳中的壳多糖(chitin)作为酶固相化载体虽然国外已有报道。但这些方法都是将壳多糖在高浓度的NaOH溶液中长时间煮沸,脱去乙酰基生成脱乙酰壳多糖(chitosan)。然后将脱乙酰壳多糖制成多孔凝胶颗粒,再将此凝胶在有机溶剂中重新乙酰化成壳多糖。这种方法需要消耗较多NaOH、有机溶剂及劳动力。我们发现,若控制壳多糖脱乙酰化的程度,仅使其部分分子进行脱乙酰化,即控制NaOH的浓度与煮沸时间,可以制备出一     

绞股蓝丹对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察绞股蓝丹对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法与结果:采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血/再灌注(MCAO/R)模型。通过对动物行为评分,脑栓塞区含水量、重量比测定以及脑组织病理学观察证实。给药组均优于对照组(P<0.01)。结论:绞股蓝丹对脑缺血再灌注损伤具有明显的脑组织保护作用。     

人酪氨酸羟化酶催化核心DNA片段的克隆与表达

获得编码人酪氨酸羟化酶催化核心ｃＤＮＡ片段,并观察其表达。方法采用人的全长ＴＨｃＤＮＡ为模板,设计特定的引物进行ＰＣＲ扩增反就并构建真核表达载体－质粒ｐＣＭＶＴＨｃ。在对目的片段测序后,将重组质粒转染到大鼠原代培养骨骼肌细胞内,用免疫组织化学方法检测其表达。     

小分子抗自由基化合物对大鼠脑损伤保护作用研究

目的观察小分子抗自由基化合物对大鼠脑缺血、缺氧损伤的保护作用 ,为临床应用提供依据。方法采用结扎大鼠颈动脉及进入低氧仓的方法建立脑缺血、缺氧损伤模型 ;腹腔注射小分子抗自由基化合物 ,观察大鼠脑组织海马区域细胞形态变化及血清中超氧化物歧化酶 (SOD)及丙二醛 (MDA)的变化情况。结果与模型对照组相比 ,实验组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞排列整齐紧密 ,形态基本正常 ,仅偶见细胞退行性改变 ;血清SOD酶活力升高 ,MDA含量降低 (P <0 0 5 )。结论小分子抗自由基化合物能提高大鼠血清中SOD酶活力 ,清除自由基 ,抑制脂质过氧化 ,保护脑细胞免受缺血、缺氧损害     

遗传工程简介

<正> 遗传工程或基因工程,是在无细胞系统中,将不同的DNA片段(cDNA或基因DNA与载体DNA)连接成重组的DNA分子,然后将重组分子转入合适的宿主中,成为宿主基因组的一个整体份系或独立地在宿主细胞内进行复制。由此可知,遗传工程的核心是分子的无性繁殖。在自然界,遗传信息的交换一般只限于同种生物体之间。遗传工程技术的出现打破了遗传信息交换的壁障,能使不同种生物体之间甚至在高等生物与低等生物之间进行遗传信息的传递,因而可以按照人类的希望,在短期内定向地改变生物特性并创造新物种,以造福人类。基因工程是否可造成严重危害的争论曾     

人血清清蛋白cDNA克隆的免疫酶法筛选及其鉴定

报道了用免疫酶法从人肝细胞cDNA文库中筛选清蛋白cDNA克隆的过程。所得到的克隆用免疫学方法及内切酶水解法进行鉴定。在7个阳性克隆中,有8个cDNA克隆分子的叠加占据了整个清蛋白cDNA编码区的长度     

简便的蛋白质电泳洗脱装置

<正> 为获得电泳纯蛋白质,通常将电泳后切下的凝胶区带置于透析袋内并在电场中洗脱。但得到的蛋白质溶液浓度往往较低,且凝胶条表面吸附若干蛋白质而造成损失,效率不高。此处介绍一种简便而高效的洗脱装置。具体方法是利用市售圆盘电泳仪及1个50mL的容量瓶作为电泳洗脱设备。将容量瓶的底部截去,再截去部分瓶颈,使其高度与圆盘电泳仪上下槽之间的距离相适应。截口用喷灯烧平滑并使端部略收缩。在圆盘电泳仪上极槽中央打一孔,孔径粗于容量瓶     

绞股蓝丹对大鼠实验性体内血栓形成的抑制作用研究

目的 :观察绞股蓝丹对大鼠实验性体内血栓形成的抑制作用。方法 :大鼠灌服绞股蓝丹低、中、高 3种剂量(2 0 g/kg、4 0 g/kg、6 0 g/kg)后 ,采用大鼠实验性动静脉旁路血栓形成和电刺激颈总动脉形成血栓两种方法 ,观察绞股蓝丹对血栓形成的影响。结果 :用动静脉旁路血栓形成造模后 ,血栓重量分别为 (2 5 .6± 3.9) m g、(2 2 .4± 3.3) m g、(2 2 .0± 3.6 ) m g,与对照组 (2 9.0± 3.1) mg比较有非常显著差异 (P<0 .0 1) ,血栓形成抑制率分别为 11.7%、2 2 .8%和 2 4 .1% ;治疗组电刺激大鼠颈总动脉后血栓形成的时间 (OT)值分别为 (112 8.5± 346 .5 ) s、(876 .2± 133.2 ) s、(778.5± 76 .3) s,与对照组 (6 96 .6± 4 4 .5 ) s比较有非常显著差异 (P<0 .0 1)。结论 :绞股蓝丹具有抗大鼠体内血栓形成的作用。