诱导胚胎干细胞分化为视网膜色素上皮细胞的培养方法

视网膜变性疾病导致视力下降,是视网膜色素上皮(RPE)细胞或感光细胞引起不可逆性损害或凋亡所造成的功能异常,从而导致的致盲性眼病,常引起视觉障碍甚至失明。人胚胎干细胞(hESCs)是一种能够多向分化的细胞。凭借适当的方法,hESCs可分化为各种视网膜细胞。由于人体RPE细胞无法再生,研究表明运用干细胞源性RPE细胞移植治疗视网膜病变的临床治疗方法具有实用前景,且近年来已取得突破性进展。多因素的限制、方法的选择以及诱导条件的复杂等使诱导分化RPE的效率和移植后存活率存在较大差异且不稳定,所以现阶段研究重点在于如何综合不同培养方法,取其利去其弊,提高hESCs定向分化效率以及细胞数量与质量,降低培养污染以及免疫排斥反应等。本文将对目前存在多种培养方法进行举例归纳总结,针对不同角度作出综述。     

凋亡相关基因Survivin在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究Survivin在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床生物学意义。方法采用免疫组化S-P法检测Survivin在NSCLC及癌旁正常肺组织中的表达情况。采用TUNEL法检测凋亡细胞,计算凋亡指数(AI)。结果 60例NSCLC组织中Survivin的阳性表达率为46.7%,20例正常肺组织的阳性表达率为10.0%,差异有统计学意义(P<0.01)。Survivin的阳性表达与有无淋巴结转移、肿瘤的分化程度及TNM分期有关(P<0.05),与NSCLC患者的年龄、性别、肿瘤直径、病理分型、是否吸烟及有无胸膜转移无关(P>0.05)。结论 Survivin基因的异常表达可能在NSCLC的发生、发展中起到一定作用。检测Survivin可能有助于临床TNM分期和有无淋巴结转移的判断。     

一种中医四诊信息采集新模式的探索

目的通过分析现有中医四诊信息采集设备、方法,探索新一代中医四诊信息采集系统,实现对中医四诊信息自动化、全息化采集。方法前端使用视音频通用设备,实时采集中医临床四诊数据,同时利用大数据流式计算、Hadoop分布式储存等关键技术完成动态数据处理功能。结果完成中医四诊信息自动化采集,形成中医四诊信息的大数据仓库。结论通过对中医临床信息的便捷式采集、存储和处理,构建大数据仓库,以便后期数据应用和临床验证,为开发中医辨证论治的四诊辅助系统提供新的思路。     

凋亡相关基因PDCD5在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的研究PDCD5在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床生物学意义。方法采用免疫组化S-P法检测PDCD5在肺癌及癌旁正常肺组织中的表达情况。采用TUNEL法检测凋亡细胞,计算凋亡指数(AI)。结果 60例NSCLC组织中PDCD5的阳性表达率为25.0%,20例正常肺组织的阳性表达率为70.0%,差异有统计学意义(P<0.01)。有淋巴结转移者的阳性表达率为3.7%,无淋巴结转移者阳性表达率为42.4%,差异有统计学意义(P<0.01)。PDCD5的阳性表达还与肿瘤的分化程度(P<0.01)及TNM分期(P<0.05)有关。PDCD5的表达与NSCLC患者的年龄、性别、肿瘤直径、病理分型、是否吸烟及有无胸膜转移无关(P>0.05)。PDCD5在NSCLC中的表达与凋亡指数(AI)呈正相关(r=0.663,P=0.000)。结论 PDCD5基因的异常表达可能在NSCLC的发生、发展中起到一定作用。检测PDCD5可能有助于NSCLC恶性程度、临床TNM分期和有无淋巴结转移的判断。     

cAMP受体蛋白对嗜水气单胞菌生长初期胆汁耐受性的影响

  目的  本研究拟确定cAMP 受体蛋白 对嗜水气单胞菌胆汁耐受性的影响。  方法  构建嗜水气单胞菌的luxS、crp的缺失株及crp回补株，通过胆汁生长实验确定嗜水气单胞菌及其构建株的胆汁耐受性。  结果   嗜水气单胞菌BJ018、BJ018ΔluxS和BJ018Δcrp在LB培养基中生长速度基本一致。 10%胆汁LB中，BJ018和缺失株ΔluxS前8 h生长被抑制，后期呈对数快速生长；其缺失株Δcrp生长速度领先于野生株，早期生长未被抑制。 嗜水气单胞菌BJ018Δcrp的回补株早期生长重新被抑制，与野生株BJ018基本一致。 其他两株嗜水气单胞菌BJ017、BJ054及其缺失株Δcrp胆汁生长结果与BJ018、BJ018Δcrp一致。 这些结果提示嗜水气单胞菌CRP影响菌株对胆汁的耐受。   结论  CRP的存在影响嗜水气单胞菌在胆汁中的生长，可能在胆汁耐受调控中起到重要作用。     

γ-synuclein在非小细胞肺癌中的表达

目的 分析γ-synuclein在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测60例NSCLC组织切片及20例癌旁正常肺组织中γ-synuclein的表达.结果 60例NSCLC组织中γ-synuclein表达的阳性率为46.7％ (28/60),20例正常肺组织中γ-synuclein表达的阳性率为0,差异具有统计学意义(P=0.000).高中分化的NSCLC患者中的γ-synuclein的阳性表达率为34.8％,低分化为85.7％,差异有统计学意义(P=0.001).Ⅰ、Ⅱ期NSCLC患者中γ-synuclein的阳性表达率为28.6％,Ⅲ、Ⅳ期患者γ-synuclein的阳性表达率为62.5％,差异有统计学意义(P =0.009).有淋巴结转移的NSCLC中γ-synuclein的阳性表达率为87.5％,无淋巴结转移者为19.4％,差异有统计学意义(P=0.000).γ-synuclein的表达与NSCLC患者的年龄、性别、肿瘤的大小、病理类型、临床分型、胸腔积液及吸烟无关.结论 γ-synuclein可能与NSCLC的发生、分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关.     

FADD在非小细胞肺癌组织中的表达及与癌细胞凋亡的关系

目的 探讨FADD在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床生物学意义,并探讨其与NSCLC癌细胞凋亡的关系.方法 采用免疫组化SP法分别检测55例肺癌组织及23例癌旁正常肺组织中FADD的表达,TUNEL法检测NSCLC中癌细胞凋亡.结果 55例NSCLC组织中FADD表达的阳性率为83％,23例正常肺组织中FADD表达的阳性率为91％,差异无统计学意义(P＞0.05).NSCLC中FADD表达程度与肿瘤的分化程度呈正相关(rs =0.483,P=0.000),与肿瘤的TNM分期呈负相关(rs=-0.404,P=0.002).NSCLC中FADD阳性表达率与肿瘤的分化程度、TNM分期有关(均P＜0.01).与肿瘤的性别、年龄、是否吸烟、肿块大小、病理分型、淋巴结转移、胸腔积液无关.所选36例NSCLC中均检测到癌细胞的凋亡,FADD蛋白中等阳性、强阳性的NSCLC中癌细胞凋亡程度较高,而阴性表达的NSCLC中凋亡程度较低.结论 FADD表达异常在NSCLC的发生发展中可能起着重要作用,FADD表达水平与NSCLC细胞凋亡密切相关.     

阻断STAT3调控Th17/Treg平衡抑制免疫性肝损伤的实验研究

【立论依据】 肝病临床难治,关键在于免疫应答不力。肝损伤程度与免疫调控密切相关,近年来发现的Th17/Treg细胞失衡,可参与多种疾病的发生发展,但在肝损伤的研究甚少。调节Th17增殖和功能的关键是转录激活因子STAT3。研究发现,一种去乙酰酶抑制剂LBH589可以阻断STAT3,引起Th17/Treg细胞变化。 【设计思路】 本实验拟建立免疫性肝损伤模型,从细胞、蛋白、基因水平对Th17、Treg细胞数量及功能进行评估,探究Th17/Treg细胞失衡与肝损伤的相关性及机制。并采用LBH589分别从体内、体外观测免疫调控效果。 【实验内容】 Wistar大鼠随机分为两组。尾静脉注射ConA建立模型组(CC),PBS注射建立对照组(HC)。CC组自第六周始腹腔注射LBH589(乙组),甲组注射PBS至建模结束,血清学肝功能检测及肝脏病理分析确定建模成功。取外周取血检测TIMP-1、HA水平。取PBMC体外细胞培养,用不同浓度LBH589处理(G2、G3),PBS处理作为对照组(G1),ELISA检测上清液IL-17、IL-6等相关细胞因子的含量。FCM检测Th17细胞和Treg细胞频率变化,计算Th17/Treg比值;免疫组织化学法检测Foxp3、RORγt蛋白表达情况;ELISA法检测外周血IL-17、IL-6等相关细胞因子。 【材料】 健康的雄性wistar大鼠、流式细胞仪、conA(白色冻干粉)、OLYMPUS400自动生化仪,免疫组化试剂、ELISA反应试剂盒、TIMP-1单克隆抗体试剂盒、DMSO溶剂、大鼠透明质酸ELISA试剂盒、96孔培养板。 【可行性】 课题思路逻辑、合理、创新,前期预结果良好。具备该课题实施所需的人员素质和实验环境。课题指导教师多年来致力于肝病的免疫学研究,并取得一定成果。所属实验室为山东省十二五重点实验室,国家级实验与教学示范中心,具有完善的实验科研环境。 【创新性】 肝病临床难治,关键在于机制不清。本课题首次提出把各细胞亚群的网络平衡学说应用于疾病的研究,认为肝病的发展演变,关键在于Th17/Treg细胞亚群的失衡,为肝病发生发展机制提供了理论依据。并通过阻断STAT3免疫调控Th17/Treg细胞平衡状态,以期肝脏损害发生改变,从而达到抑制病情的治疗目的,为其临床治疗提供新的线索。     

浅析音乐治疗在儿内科门诊静脉穿刺输液治疗患儿中的应用

目的通过分析患儿在北京新世纪儿童医院儿内科门诊静脉穿刺输液治疗时接受音乐治疗前后行为及言语紧张度数据,积累音乐治疗在儿科静脉穿刺输液治疗中的应用经验。方法北京新世纪儿童医院门诊接受静脉穿刺输液治疗同时接受音乐治疗的患儿23名,采取行为评价量表和家长问卷评价患儿接受音乐治疗前后的行为和语言指标。结果在儿内科门诊静脉穿刺输液治疗时接受音乐治疗可以使患儿语言恐惧表达率和紧张性肢体动作出现率降低,差异有统计学意义。结论音乐治疗可以减轻静脉穿刺输液治疗对儿童的不良情绪刺激。     

基于数据挖掘的“真实世界”中医糖尿病症药关系研究

目的:利用关联规则,挖掘糖尿病真实临床症状与药物之间的关联关系。方法:通过成都中医药大学数字医药研究所研发的中医大数据平台,提取符合纳入标准的719例“糖尿病”真实临床医案中的症状、用药信息,构建临床病案数据库,采用频数统计及关联规则等数据挖掘方法,挖掘相关症药关系。结果:糖尿病高频症状为乏力、口渴、形体消瘦;常用药物为麦冬、知母、茯苓;挖掘出尿多—知母、形体消瘦—知母、多食易饥—石膏、麦冬等症药强关联规则。结论:应用数据挖掘方法,总结糖尿病真实临床症药分布规律,为糖尿病中医真实临床症药条目构建与优化奠定基础。